2215taqpcrmastermix含染料pt102(編輯修改稿)
2025-07-16 07:29 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的模板量。表2：1 181。g各種來(lái)源的DNA對(duì)應(yīng)的摩爾數(shù)1 181。g DNAmol1 kb線性雙鏈DNA10113 kb質(zhì)粒DNA1010Lambda (λ) DNA1010108人類基因組DNA105例如：純化的人類基因組DNA濃度為1 181。g/181。l，某基因在人類基因組中拷貝數(shù)為10，其單位體積拷貝數(shù)為：105 mol/181。g 1 181。g/181。l 10 copy/mol=106 copy/181。l1104 copy/ (106 copy/181。l) = 1/300 181。l即：1/300 181。l濃度為1 181。g/181。l的人類基因組DNA中含104拷貝該基因，稀釋300倍后加1 181。l至25 181。l PCR體系。為保證反應(yīng)的特異性，DNA終濃度應(yīng)小于10 ng/181。l，過(guò)多的DNA可能會(huì)出現(xiàn)涂抹帶甚至無(wú)特異性條帶。一些特定的模板可參考表3決定模板量。表3：25 181。l PCR體系特定模板用量特定模板25 181。l PCR體系用量cDNA 181。l (10%PCR體系體積)PCR產(chǎn)物用TE＃稀釋100~1000倍后，1 181。l菌液用TE＃稀釋100~1000倍后，1 181。l菌落~1 ml TE＃，1 181。l＃TE:10 mM Tris, pH (25176。C), 1 mM EDTA。TE有利于DNA儲(chǔ)存，溶于TE的模板用量不可超過(guò)PCR體系的體積的10%，因?yàn)镋DTA會(huì)螯合Mg2+而抑制酶活性。如果稀釋后的模板只需短時(shí)間儲(chǔ)存，建議用去離子水稀釋?！饕餄舛纫话忝織l引物配制的濃度
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