【文章內(nèi)容簡介】 綠色 ① ② ③④⑤⑥ 染色方法 膠原纖維，網(wǎng)狀纖維 軟骨，粘液，淀粉樣 神經(jīng)膠質(zhì)纖維，肌纖維 髓鞘，紅細(xì)胞 結(jié) 締 組 織 染 色 Mallory 三色 藍(lán) 淡藍(lán) 紅 黃 Masson 三色 綠 紅 黃 顯示膠原纖維，網(wǎng)狀纖維，彈性纖維三聯(lián)染色 膠原纖維 網(wǎng)狀纖維 彈性纖維 肌肉和紅細(xì)胞 紅 黑 綠 黃 膠原 纖維 染色 膠原纖維 細(xì)胞核和血細(xì)胞 肌肉 顯示膠原纖維，細(xì)胞，肌肉的染色法 紅 綠 黃 天狼星紅苦味酸染色法 紅 綠 黃 網(wǎng)狀 纖維 染色 網(wǎng)狀纖維 膠原纖維 背景 Gomori 銀染色法 黑 紅 黃 James 染色法 黑 紅 淡黃 彈性 纖維 染色 彈力纖維 細(xì)胞核 粘液 背景 維多利亞藍(lán)染色 藍(lán) 紅 Gomori 醛復(fù)紅染色 深紫 紫 顯示彈性，膠原纖維的雙重組合染色 藍(lán)綠色 膠原纖維 紅色 淡黃色 橫紋肌 組織 染色 橫紋肌 膠原纖維，網(wǎng)狀纖維 心?。ㄈ毖毖酰? Mallory 磷鎢酸蘇木精染色法（ PTAH） 藍(lán) 黃色或玫瑰紅色 紫藍(lán)色或棕黃色 早 期 心肌 病 變組 織 染色 缺氧心肌，紅細(xì)胞 正常心肌 細(xì)胞核 其他 Nagar— Olsen 紅 黃或黃棕色 藍(lán) Poley 缺氧心肌染色法 紅 紫 綠 糖類 染色 糖原及其他 PAS 反應(yīng)陽性物質(zhì) 細(xì)胞核 過碘酸 Schiff(PAS) 紅 藍(lán) 粘液物質(zhì)（ 粘 多糖）染色 中性粘液物 酸性粘液物 混合性粘液物 Mowry 阿爾辛藍(lán)過碘酸雪夫（ ABPAS） 紅 藍(lán) 紫紅 Schiff 阿爾辛藍(lán)地衣紅 棕 藍(lán) 黑色素 染色 黑色素及嗜銀細(xì)胞顆粒 膠原纖維 背景 肌纖維 Masson— Fontana 浸銀染色 黑 紅 淺黃 Lillie 亞鐵染色 暗綠色 淺綠 黃 含鐵血黃素染色 含鐵血黃素 其他 Perls blue(普魯士南 ) 藍(lán) 淺紅 膽色素 膽色素 其他 不適用的固定液： Helly，Zenker等含鉻固定液 三氯醋酸染色方法 綠 紅 或 黃 纖維 蛋白 染色 纖維蛋白 陳舊性纖維蛋白 細(xì)胞核 紅細(xì)胞 背景 MSB 染色法（馬休黃猩紅藍(lán)法） 紅 紫 藍(lán) 黃 Gram甲紫染色法 藍(lán)黑 紅 淀粉樣 物質(zhì) 染色 淀粉樣物質(zhì) 細(xì)胞核 剛果紅染色法 紅 藍(lán) Jurgens 甲紫染色法 紅或紫紅色 藍(lán) 真菌 染色 菌絲和孢子 背 景 細(xì)胞核 紅細(xì)胞 Grocott 六胺銀染色 黑褐 淡綠 紅 高碘酸復(fù)紅染色法 紫紅 淺黃色 細(xì)菌 染色 幽門菌 抗酸桿菌 G+ G— 背景 Gram 堿性復(fù)紅結(jié)晶紫染色法 藍(lán) 紅 Ziehl— Neelsen 抗酸桿菌染色法 紅 灰藍(lán)色 Warthin— starry 胃幽門螺桿菌染色法 棕黑或黑 淡黃色 染色方法 項(xiàng) 目 螺旋體 染色 螺旋體 細(xì)菌 細(xì)胞質(zhì) 紅細(xì)胞 Giemsa 染色法 藍(lán) 到淡紫色 藍(lán) 橘黃色 HBsAg 染色 HBsAg 顆粒 細(xì)胞核 紅細(xì)胞 結(jié)締組織 Shikata 地衣紅染色 棕色 醛復(fù)紅改良染色法 紫色 黃 紅 維多利亞藍(lán)染色法 藍(lán)綠色 紅 神 經(jīng) 細(xì)胞 尼 氏 小體染色法 尼氏小體 核 背景 膠質(zhì)細(xì)胞 焦油紫染色法 紫 無色 淡紫 Einarson 棓酸青藍(lán) 黑藍(lán) — 紫色 藍(lán) 淺灰色 甲苯胺藍(lán)染色法 深藍(lán)色 淡藍(lán) 無色 神經(jīng)纖維染色方法 神經(jīng)纖維 背景 老年斑扣結(jié) Holmes 神經(jīng)纖維 黑 灰紫 Bielschowsky 神經(jīng) 黑 紫 Von Braunmubl 神經(jīng)纖維，扣結(jié)，老年 黑 淺灰色 黑 Eager退變神經(jīng)纖維 黑色 淺棕色 神經(jīng) 髓鞘 染色 方法 髓鞘 背景 核仁 尼氏小體 Weigert 髓鞘染色方 黑紫 淡灰 Weil 髓鞘染色方法 藍(lán)黑 淡灰 Kultshitzky 髓鞘染 藍(lán)黑 淡黃 Luol fast blue 藍(lán) 紫 紫 髓鞘 脫髓鞘纖 背景 軸索間質(zhì) 變色酸 2R亮綠髓鞘 深紅 不著色 綠 色 Marchi 退變髓鞘染色方法 黑色（退變） 淺棕色 鋨酸α — 萘胺 黑色（變性） 紅色（正常） 紅細(xì)胞（淡紅） 結(jié)締組織 （藍(lán)色） 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞染色方法 原漿形及纖維 性星形細(xì)胞 神 經(jīng)膠 質(zhì)細(xì)胞少突膠質(zhì) 背景 小膠質(zhì) 細(xì)胞 Cajal 星形細(xì)胞（冷凍） 紫黑色 改良的 Cajal 染色 紫黑色 粉紅 Weil 及 Davenport 小膠質(zhì)細(xì)胞及少膠質(zhì)細(xì)胞 黑色 黃棕 Naou menko 及 Feigin 小膠質(zhì)細(xì)胞 灰 黑色 神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞染色 親（嗜）細(xì)胞 顆粒 細(xì)胞核 背景 胞質(zhì) 親銀反應(yīng) lillie — Masson 二胺銀 黑 紅 淡灰黃 GomoriBurtner 六胺銀法 黑 淺紅 嗜銀反應(yīng) De Grandi 改良硝酸銀反應(yīng) 棕黑色 紅 堿性重氮反應(yīng) 橘紅色至紅色 藍(lán)色 黃色 嗜鉻細(xì)胞染色 嗜鉻細(xì)胞 皮質(zhì)細(xì)胞 紅細(xì)胞 細(xì)胞核 Giemsa 改良 紅色至紫紅色 藍(lán) 粉紅 Wiesel 染色方法 黃綠色 藍(lán)（其他） 紅色 肥大 細(xì)胞 染色 肥大細(xì)胞 細(xì)胞核 紅細(xì)胞 其 他 甲苯胺藍(lán)改良 紅紫色 藍(lán)色 醛復(fù)紅法 深紫色 橘黃 黃 DNA 染色 DNA 細(xì)胞質(zhì) Feulgen 法 紫紅色 綠色 免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 標(biāo)記物應(yīng)具有以下的特點(diǎn)： ① 能與抗體形成比較牢固的共價鍵結(jié)合 ② 不影響抗體與抗原的結(jié)合 ③ 放大的效益高 ④ 發(fā)光火顯色反應(yīng)要在抗原與抗體結(jié)合的原位并且鮮明，有良好的對比。 理想的標(biāo)記酶： ① 酶的活性高并且穩(wěn)定 ② 終產(chǎn)物穩(wěn)定，不擴(kuò)散，有良好的定位 ③ 酶與抗體和結(jié)合不影響 Ag— Ab 的特異性反應(yīng) ④ 在組織與體液 中不存在內(nèi)源性的酶 底物 效果好又應(yīng)用最多的是辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶 異硫氰酸熒光素： 為明亮的黃綠色熒光 四甲基異硫氰酸羅丹明： 為橙紅色熒光 免疫組織化學(xué)主要染色方法的原理 （一）直接法 （又稱一步法） 特異性高，敏感性低 原理：用已知的特異性抗體與熒光素或酶結(jié)合，直接與待測組織中的抗原反應(yīng)。 特點(diǎn)：將熒光素或酶標(biāo)記在第一抗體上 （二）間接法 （又稱夾心法） 原理： 第一步：以未標(biāo)記的特異性抗體（第一抗體）與組織或細(xì)胞中的抗原反應(yīng)， 洗去未與抗原結(jié)合的第一抗體后 ， 第二步：再以熒光素或酶標(biāo)記 的第二抗體與第一抗體結(jié)合，如何進(jìn)行顯色或熒光檢查。 特點(diǎn)：將熒光素或酶標(biāo)記在第二抗體上 優(yōu)點(diǎn)： ① 不用標(biāo)記第一抗體 ② 第一抗體的工作稀釋度高 ③ 敏感性增強(qiáng) ④ 應(yīng)用范圍更廣 ⑤ 特異性低于直接法 （三）未標(biāo)記抗體法 1 酶橋法 酶橋法使用的三種抗體中的 第 1，第 3 兩種抗體為同種動物所產(chǎn)生。 在染色的關(guān)鍵是第 2 抗體（橋抗體）必須以較高的濃度過量使用 優(yōu)點(diǎn)：提高了反應(yīng)的敏感性，缺點(diǎn)：背景染色較重。 2 PAP 法 將游離酶和抗酶抗體在使用前先制成穩(wěn)定的酶 — 抗 酶抗體復(fù)合物，在稀釋后使用。 PAP 法的關(guān)鍵在于 ① PAP 復(fù)合物中的抗酶抗體必須與第一抗體為同種動物所產(chǎn)生。 ② 第 2 抗體（橋抗體）必須過量 （四）親和素 — 生物素方法 1 親和素 — 生物素 — 過氧化物酶復(fù)合物技術(shù)（ ABC） 通過 ABC 復(fù)合物中親和素橋梁的作用，將 ABC 復(fù)合物與生物素化的抗體結(jié)合在一起 ，達(dá)到檢測抗原的目的。 與 PAP 法比較， ABC 法最大的優(yōu)點(diǎn)是敏感性高，是 PAP 法的 2040 倍 其次是背景清晰。 SP 法與 ABC 法比較，特異性更高 2 酶標(biāo)親和素 — 生物素技術(shù)（ BA LAB） 制備生物素化抗體和酶標(biāo)親和素，利用生物素 — 親和素的親和作用，將酶標(biāo)親和素連接到抗原抗體復(fù)合物上，以顯示被檢測的抗原。 3 橋聯(lián)親和素 — 生物素技術(shù)（ BAB， BRAB） 是用生物素分別標(biāo)記抗體和酶，然后以親和素為橋，將兩者連接在一起 對照 常用的對照方法包括： 陽性對照，陰性對照，阻斷實(shí)驗(yàn)， 空白對照， 替代對照， 自身對照，吸收實(shí)驗(yàn) 陽性細(xì)胞的染色特征： 陽性細(xì)胞染色分布有 3 種類型：胞質(zhì)，細(xì)胞核，細(xì)胞膜表面 陽性細(xì)胞可分為灶 性和彌漫性 染色強(qiáng)度不一 可定位于單個細(xì)胞，且與陰性細(xì)胞相互交雜分布。 切片邊緣，刀痕或皺褶區(qū)域，壞死或擠壓的細(xì)胞區(qū)，膠原結(jié)締組織等表現(xiàn)為相同的染色強(qiáng)度，不能判斷為陽性 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色方法 熒光抗體法： 用熒光抗體示蹤 或檢查相應(yīng)抗原的方法 熒光抗原法： 用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法 對照：抗原對照，抗血清對照，滅活補(bǔ)體對照。 染色結(jié)果判讀 對照試驗(yàn)： ① 吸收實(shí)驗(yàn)：應(yīng)用尚無文獻(xiàn)報道的抗血清 /自己制備的抗血清進(jìn)行 IHC 染色 時，需用相應(yīng)的飽和抗原吸收血清后，在孵育標(biāo)本。判斷 結(jié)果的可信性 （結(jié)果應(yīng)為陰性） ② 交叉實(shí)驗(yàn) ③ 替代實(shí)驗(yàn) ④ 置換實(shí)驗(yàn) ⑤ 陽性對照 動物實(shí)驗(yàn)技術(shù) 實(shí)驗(yàn)動物的抓取 一 小鼠 用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，其余三指和手掌心夾住背部皮膚和尾部 小鼠的灌胃針長 45cm,直徑 34cm,常用灌胃量 皮內(nèi)注射量：最多不得超過 . 皮下注射部位：背部 肌內(nèi)注射：股部 腹腔注射： 靜脈注射：多用尾靜脈，用溫水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管擴(kuò)張， 4號細(xì)針 一次注射量為 ，盡可能從尾端開始向尾根部移動注射， 腦內(nèi)注射： 注射針垂直刺入 23mm, 二 大鼠 大鼠 捉持方法與小鼠相似。 大鼠容易被激怒咬人，捉持時左手應(yīng)戴防護(hù)手套。 另一種方法：張開左手虎口，迅速將拇指，食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中端，并使其保持仰臥位，之后調(diào)整左手拇指位置，緊抵在下頜骨上。 大 鼠的灌胃針長 68cm,直徑 . 插入深度為 46cm,常用灌胃量 14ml 皮內(nèi)注射量：最多不得超過 . 皮下注射部位：背部 ，左側(cè)下 腹部 肌內(nèi)注射：股部 腹腔注射： 12ml/100g 靜脈注射：多用尾靜脈，用溫水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管擴(kuò)張， 4號細(xì)針 一次注射量為 ，盡可能從尾端開始向尾根部移動注射， 腦內(nèi)注射： 注射針垂直刺入 23mm, 三 家兔 一 只手抓住兔頸背部皮膚，將兔輕輕提起，另一只手托住臀部，