疫上崗培訓ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-07 17:47 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 術提高了抗原抗體反應的敏感性 。 37 一 ﹑ 抗原 抗體反應的特點 抗原 抗體的結(jié)合是 特異性結(jié)合 抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價鍵結(jié)合 抗原抗體反應可分為兩個階段 特異性結(jié)合階段 可見的反應階段 抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見的反應現(xiàn) 象，于兩者的分子 比例 密切相關 38 抗原抗體比例對反應現(xiàn)象的影響 39 40 二 ﹑ 抗原 抗體反應受多種因素影響 ? 1 電解質(zhì) ：抗原 抗體反應通常應用%的氯化鈉作為稀釋液 ，以供給適應濃度的電解質(zhì)。 ? 2 溫度 ：一般常使用反應在 37度水浴 或孵育箱中進行。 ? ：抗原 抗體反應適應的酸堿度 為 PH68。 ? 41 第二節(jié) 抗原抗體的檢測方法 ? 凝集反應 ? 沉淀反應 ? 補體溶血反應和補體結(jié)合反應 ? 中和反應 ? 用標記抗體或抗原進行的抗原抗體反應 42 一 .凝集反應 (Agglutination) ? 細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結(jié)合后形成凝集 現(xiàn)象，稱為 凝聚反應 。 ? (1)、直接凝集：將細菌或紅細胞與相應的抗體直接反應，出現(xiàn)細菌凝集或紅細胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。 ? (2)、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面，與相應抗體反應出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象 。 43 血 球 凝 集 44 45 二 .沉淀反應 （ Precipitation) 血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組織浸液等 可溶性抗原 與相應抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，這一類反應稱為沉淀反應。沉淀反應可在液體中進行，如絮狀沉淀。大多沉淀反應是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。 46 47 48 49 50 三 .免疫標記技術 ? 用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì) 標記抗體（或抗原）進行抗原 抗體反應。標記物質(zhì)與抗體（或抗原）的化學連接未改變抗體（或抗原）的免疫學特性，同時標記物的性質(zhì)依然存在，因而極大的提高了反應的靈敏度，可以對微量物質(zhì)進行定量、定性或定位檢測。免疫標記技術主要有 四種基本類型： 免疫熒光技術、 免疫膠體金標記技術 、免疫酶技術和同位素標記技術。 51 ? 用 熒光素 （常用的有異硫氰酸熒光素），與抗體連接成熒光抗體，再與待測標本的抗原反應，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復合物散發(fā)出熒光，借此對標本中的抗原作鑒定和定位。 ? 包括直接熒光法、間接熒光法和補體法。 52 間接免疫熒光法示意圖 53 54 ? 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結(jié)合，用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，用于檢測或定位抗體，但是在實際工作中熒光抗原技術很少應用，所以人們習慣稱為熒光抗體技術，或稱為免疫熒光技術。 55 （ 1）時間分辨熒光免疫技術 ? 原理： TRFIA 是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如銪（ Eu3+) 來標記抗體、抗原，待反應體系發(fā)生后，用時間分辨熒光儀測定最后產(chǎn)物中的熒光強度，根據(jù)熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的。 56 ? 優(yōu)點： 技術集酶標記、同位素標記技術的優(yōu)點于一身，具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、標記物制備簡便、儲存時間長、無放射性污染、檢測重復性好、操作流程短、標準曲線范圍寬和應用范圍廣泛等優(yōu)點， 57 ? 注意： 所用試劑和器材務必防塵； ? Eu3+標記物的溶解和稀釋必須盡 ? 量準確，務必在加樣 1小時內(nèi)配制。 58 （ 2）電化學發(fā)光免疫分析技術 ? 原理： 電化學發(fā)光免疫分析技術是繼放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法、化學發(fā)光免疫分析法后的最先進的免疫分析方法。電化學發(fā)光（ ECL）是一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應，實際上包括了電化學和化學發(fā)光兩個過程。直接以 [Ru(bpy)3]2+標記抗體，反應時標記物直接發(fā)光。且 [Ru(bpy)3]2+在電極表面的反應過程可以周而復始進行，產(chǎn)生許多光子，使光信號得以增強。 59 ? 優(yōu)點： 非放射性標記物避免了放射性核素的污染；磁性微粒（ ）為固相載體表面積大，吸附率高，近似均相免疫反應； 鏈霉親和素與生物素是最特異及牢固的結(jié)合；應用范圍廣；檢測敏感度高；檢測所需樣本量少。 60 (Enzyme Immunoassay, EIA) ? 是用 酶 （常用的有辣根過氧化物酶 HRP和堿性磷酸酶 AP) 標記的抗體進行的抗原抗體反應。 EIA將抗原抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗和酶免疫組化法，前者測定可溶性抗原或抗體，后者測定組織或細胞表面的抗原 。 61 (1).酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) ? 將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應板）表面，使抗原抗體反應在固相表面進行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法BASELISA等。 (2) ELISA方法有 : / 抗原 夾心法 測抗原 / 抗體 : 包被在固相載體上的抗體 / 抗原與加入的待測抗原 / 抗體及酶標抗體 / 抗原
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