1什么是感受態(tài)？細菌處于0℃，01mcacl2低滲溶液中，使菌細胞膨脹成(編輯修改稿)
2024-09-27 14:24 本頁面
【文章內容簡介】 性迅速而準確，而線性的染色體 DNA 的兩條互補鏈彼此已完全分開，復性就不會那么迅速而準確，它們纏繞形成網狀結構，通過離心，染色體 DNA 與不穩(wěn)定的大分子 RNA，蛋白質 SDS 復合 物等一起沉淀下來而被除去。 有幾種 構型 ，轉化率如何？ 細菌質粒 DNA 有可以相互轉化的 3 種不同構型，即線狀、環(huán)狀、超螺旋。微生物常常通過質粒倡導從而在自然條件下發(fā)生基因重組，常見的方式有：接合、傳導、轉化 。超螺旋轉化率最高。 11. 加入溶液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ的目的和作用？ 堿裂解法提取質粒 DNA 的基本原理是溶液 I 使細胞懸浮，并且 EDTA 可以與 Ca2+和 Mg2+螯合，抑制 DNase 的活性；溶液 II 裂解細菌，變性蛋白質和少量質粒；溶液 III 使大部分蛋白質與細菌基因組 DNA 一起被共沉淀，質粒 DNA 復性。 限制性內切酶可特異地結合于一段被稱為限制酶識別序列的 DNA序列位點上并在此切割雙鏈 DNA。絕大多數限制性內切酶識別長度為 5 或 6 個核苷酸且呈二重對稱的特異序列，切割位點相對于二重對稱軸的位置因酶而異。一些酶恰在對稱軸處同時切割 DNA 雙鏈而產生帶平端的 DNA 片段，另一些酶則在對稱軸兩側相對的位置上分別切斷兩條鏈，產生帶有單鏈突出端（即粘端）的 DNA 片段。 13. 影響酶切效果的主要因素 （ 1） 內切酶 （ 2） ＤＮＡ （ 3） 反應緩沖液 （ 4） 酶解溫度與時間 （ 1） 濃縮的 限制性內切酶可在使用前以 1限制酶緩沖液稀釋，切勿用水稀釋以免酶變性。 （ 2） 購買的限制性內切酶多保存于 50%甘油中，于 20℃ 是穩(wěn)定的。進行酶切消化時，將除酶以外的所有反應成分加入后即混勻，再從 20℃ 冰箱中取出酶，立即放置于冰上。每次取酶時都應更換一個無菌吸頭，以免酶被污染。加酶的操作盡可能快，用完后立即將酶放回20℃ 冰箱。 （ 3） 盡量減少反應體積，但要確保酶體積不超過反應總體積的 10%，否則酶活性將受到甘油的抑制。 （ 4） 通常延長時間可使所需的酶量減少，在切割大量 DNA 時可用。在消化過程中可取少量反 應液進行微量凝膠電泳以檢測消化進程。 （ 5） 注意星號酶切活力。 DNA的基本原理 瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解， 45℃開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于 瓊脂糖的濃度。 DNA 分子在堿性環(huán)境中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動。 DNA 分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分子篩效應。不同 DNA，其分子量大小及構型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離
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