【正文】 ? 寄主：外來有害生物有了新的食物（寄主）或易感病寄主，導致大爆發(fā)； ? 人為因素：外來有害生物傳入初期由于人們沒有看到它的危害（危害有量變到質變的過程） ，沒有引起人們的足夠重視和防治，沒有防微杜漸，最后導致大爆發(fā)；人們對外來有害生物危害性認識不足，缺乏對其生物學特性的了解，缺乏防治的經驗和有效的方法和手段或沒有及時采取防治措施，導致外來有害生物的大爆發(fā)和危害。無論在主觀和客觀上都起到了技術性貿易壁壘的作用。 ? 美國的葡萄根瘤蚜傳入法國并造成了嚴重災害后，美國農業(yè)部于 1912年頒布了國家植物檢疫法令，以防止植物病蟲害在國際間的傳播。長期飲用“有抗奶”相當于經常低劑量服用抗生素，會增加人體耐藥性，對于過敏體質的消費者而言，還可能會引起皮疹、過敏性休克等反應。主要損害中樞神經系統(tǒng)的運動中樞、小腦、腦干和肝、腎、生殖系統(tǒng)，為致腫瘤物。 ? 貨物種類與特點 。 鏡檢計數 用常規(guī)孢子萌發(fā)測定法、分離培養(yǎng)法或紅四氯唑（ TTC） 染色法判定孢子死活。 培養(yǎng)皿吸水紙培養(yǎng)檢驗法實例 種子 1％ 2％次氯酸鈉溶液和抗菌 素表面消毒 510 min 植床于培養(yǎng)基平板上，在適宜 溫度和光照下培養(yǎng) 710d 手持放大鏡從培養(yǎng)皿兩面觀察，依 據菌落形態(tài)、色澤來鑒別真菌種類 必要時挑取培養(yǎng)物制片，用 高倍顯微鏡檢查 瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)檢驗 七、分離培養(yǎng)檢驗 ? 主要應用于檢驗潛伏于種子、苗木或其他之物產品內部，不易發(fā)現和鑒定的病原菌； ? 當種子、苗木或其他植物產品上雖有病斑，但無特殊的病原菌可供鑒定的場合。 ? 噬菌體法的主要優(yōu)點是簡便、快速，能直接用種子提取液測定。 分子檢測試劑盒 研究方法 ? 河北鴨梨黑斑病病原菌的鑒定 ? 番茄上兩種細菌性病害的診斷與防治 ? 梨火疫病菌噬菌體的初步研究 ? Biolog系統(tǒng)和 16SrDNA序列分析方法在植物病原細菌鑒定中的應用 第三節(jié) 植物病毒檢驗檢疫技術 ? 病毒 （ virus） 是一組 （ 一種或一種以上 ） DNA或RNA核酸分子 ， 包圍在蛋白或脂蛋白外殼內 ， 在合適的寄主細胞借助于寄主蛋白合成體系 、 物質和能量完成復制 ， 伴隨核酸突變發(fā)生變異 。 植物寄生線蟲的各種分離方法 直接解剖法 內生線蟲在體視顯微鏡下用解剖針直接解剖病組織 ? 簡易貝爾曼漏斗法 :分離少量植物材料中有活動能力的線蟲。熏蒸是當前應用最廣泛的檢疫除害方法。 ? 在各類有害生物中，昆蟲、螨類、雜草種子等已有較好的大量除害處理方法，而植物病原物多缺乏簡便、易行、效果較高的處理方法，需進一步研究。 研究方法 ? 出口盆栽植物栽培土的線蟲分離方法的比較 ? 進境木包裝松材線蟲的檢疫方法 ? 線蟲分離器的改進和松材線蟲分離特點 ? 香蕉穿孔線蟲及其檢測和防疫控制 ? rDNA_ITS_PCR技術在植物寄生線蟲分子診斷中的應用 檢疫處理的原則和方法 檢疫處理的原則： 高效、環(huán)保、快速、經濟、安全 方法： 檢疫處理可采取 除害 、 退回 ， 銷毀 等多種措施。其優(yōu)點是可檢測同種病毒的不同株系， 還可檢測類病毒、衛(wèi)星 ＲＮＡ 以及某些不能形成病毒粒體蛋白的病毒分離物； 缺點是同位素標記有放射性污染及安全問題。 特異性基因或 DNA序列用于檢測病原菌 ? 利用病原菌的致病基因 以病原菌的致病基因為目標，設計特異性引物，通過 PCR擴增進行病原菌特異性檢測 ? 例如土壤桿菌 Agrobacterium的菌株，所有致病菌株都有介導 DNA在細菌和寄主間轉導的毒性基因(Vir基因 )，詳細了解致病機制后，可以設計出許多針對該致病性基因序列的 DNA引物。 ? 操作：細菌溢膿或分離純化細菌 ―― 自然或人工接種 ―― 觀察 針刺接種法接種甘藍葉片中肋 如確系該菌，則接種部 位軟腐、維管束褐變 切片置于 ％水瓊脂平板上， 在 28℃ 和黑暗條件下培養(yǎng) 3d 生理生化及快速測定法 ? 生化測定試劑盒：鑒定某一類細菌的關鍵碳源、氮源、特殊酶和有機酸等并附有比較和檢索用的計算機數據庫。生長檢驗花費時間長，使其應用受到限制。 洗滌檢驗的操作程序 一定數量的種子樣品放入容器并加入定量蒸餾水或其它洗 滌液，振蕩 510 min，使孢子脫離種子，轉移到洗滌液中。 ? 每份送檢樣品量的規(guī)定：谷物、棉籽、瓜子、飼料類為 1000g；大粒種子（玉米、蠶豆等） 1000~1500g；小粒種子（芝麻） 500g；蔬菜、煙草： 10~100g；蔥頭、紅棗、馬鈴薯等： 2020~5000g。 ? 孔雀石綠是一種具有高毒、高殘留及“三致”（致畸、致癌、致突變）的殺菌劑。因此在動物、植物及其產品中有可能存在一定的藥物殘留。 ? 法國在從美國引進葡萄苗時導致葡萄根瘤蚜蔓延，約 1/3（ 10萬 ha）的葡萄園絕收，造成重大損失。 ? 1996年以來，美國紐約、芝加哥等地發(fā)生光肩星天牛的危害。 ? 現行的動植物檢疫就是通過對進出境貨物、運輸工具、郵寄物、人員攜帶物實施檢疫，防止外來有害生物傳入，保護農、林、牧、漁業(yè)生產和人體健康，促進對外經濟貿易的發(fā)展?？荚嚪绞? ? 12+24 ? 理論 6次課，實驗 6次大實驗。 二、植物檢疫的意義 外來有害生物的危害 ? 外來（有害）生物的傳入對農林業(yè)生產和人民身體健康造成危害，還將造成生態(tài)系統(tǒng)多樣性、物種多樣性、生物遺傳資源多樣性的喪失和破壞。據美國有關方面統(tǒng)計，光肩星天牛一旦在美國傳播開來，將對美國槭糖業(yè)、旅游業(yè)和生態(tài)環(huán)境造成約 1380億美元的直接經濟損失。為此法國政府于 1872年頒布了禁止從國外輸入葡萄枝條的法令。 ? 動植物生長期間在吸取養(yǎng)分和水分的同時有可能吸取了污染于其中的重金屬，導致體內重金屬含量超標。 ? 出口日本的活鰻。 取樣方法的依據 ? 有害生物的分布規(guī)律 ? 貨物的數量 ? 裝載方式等因素確定 樣品數量（容量）大小依據 ? 有害生物的帶有率 。 洗脫孢子 將孢子洗滌液移入離心管，低速離心（ 25003000r／ min） 1015min，使孢子沉集在離心管底部。 ? 保濕培養(yǎng)檢驗 優(yōu)點－設備簡單、操作方便、花費少、快速準確 。 ? Biolog 測定：美國 Biolog 公司研制的專門鑒定細菌的專家系統(tǒng)。 核糖體 DNA基礎的 PCR策略 ? 細菌核糖體 DNA的操縱子由 3個有功能的保守序列 16SrDNA, 23SrDNA和 5SrDNA組成，由可變異的轉錄間隔區(qū) (Internally Transcribed Spacer, ITS)分隔。 分子生物學和免疫學相結合檢測方法 ? 免疫捕獲反轉錄 PCR（ Immunocapture reverse transcript PCR, ICRTPCR） 反轉錄 PCR擴增 研究方法 ? 日本進口南瓜的病毒隔離檢疫和田間疫情監(jiān)測 ? 煙草環(huán)斑病毒的檢疫檢測方法 ? 番茄斑萎病毒的檢疫技術 ? 侵染觀賞南瓜的黃瓜綠斑駁花葉病毒的初步鑒定 第四節(jié) 植物病原線蟲的檢疫檢驗技術 ? 植物病原線蟲是軀體很小，而內部又有各種較復雜器官的低等動物，再加上其一些特殊的分布和生物學習性等，檢測方法有所不同。除害是檢疫處理的主