【正文】 細(xì)胞的增殖活力。,第七十頁(yè)，共七十二頁(yè)。)是一項(xiàng)集多學(xué)科知識(shí)綜合應(yīng)用的復(fù)雜儀器(y237。q236。,五、FCM對(duì)自身(z236。ngli224。n)受阻后呈克隆性異常增殖的結(jié)果，它的發(fā)病是多階段(jiēdu224。)技術(shù)基石之一。 shīd249。,2．PMT校準(zhǔn) 流式細(xì)胞儀在使用過(guò)程中，光電倍增管隨時(shí)間的增加，其放大功率會(huì)有所改變，對(duì)樣品檢測(cè)的靈敏度會(huì)產(chǎn)生影響。) 散射光信號(hào)是激光照在細(xì)胞上所產(chǎn)生的前向光和側(cè)向光信號(hào)。i)溶液中該細(xì)胞的百分比。ng)精度的指標(biāo)，通常用變異系數(shù)CV(Coefficient of Variation)值表示： (δ是分布的標(biāo)準(zhǔn)誤差，μ是分布的平均值) 或,第四十三頁(yè)，共七十二頁(yè)。,第三十八頁(yè)，共七十二頁(yè)。,第三十五頁(yè)，共七十二頁(yè)。o) 當(dāng)激光光束與細(xì)胞正交時(shí)，一般會(huì)產(chǎn)生兩種熒光信號(hào)。 因此，當(dāng)樣本速率選擇 高速時(shí)，處在樣本流不 同位置的細(xì)胞或顆粒， 受激光照射的能量不一 樣，從而被激發(fā)(jīfā)出的熒 光強(qiáng)度也不相同。tǒng)；信號(hào)檢測(cè)與存貯、顯示、分析系統(tǒng)(x236。 臨床型只有分析(fēnxī)功能，沒(méi)有分選功能，操作簡(jiǎn)便，易學(xué)易掌握。nh224。,第十二頁(yè)，共七十二頁(yè)。,進(jìn)入90年代，標(biāo)本制備儀和自動(dòng)進(jìn)樣器的問(wèn)世，以及適合臨床應(yīng)用的單克隆抗體的增加，使流式細(xì)胞儀不僅出現(xiàn)(chūxi224。,1965年Kamentsky用紫外吸收和可見(jiàn)光散射兩個(gè)參數(shù)同時(shí)測(cè)量未染色的細(xì)胞(x236。sh249。nf,80年代以來(lái)，流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)采集(cǎij237。,將懸浮分散(fēns224。nh224。,第十八頁(yè)，共七十二頁(yè)。,流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)可分為流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)(x236。o)區(qū)的時(shí)間僅為1μs左右，且細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號(hào)強(qiáng)弱，與被照射的時(shí)間和激發(fā)光的強(qiáng)度有關(guān)，因此細(xì)胞必須達(dá)到足夠的光照強(qiáng)度。,第三十頁(yè)，共七十二頁(yè)。,第三十四頁(yè)，共七十二頁(yè)。,2．邏輯電路 為了分選細(xì)胞，需要細(xì)胞在經(jīng)過(guò)測(cè)量(c232。,第四十二頁(yè)，共七十二頁(yè)。 分選純度指要分選的目的細(xì)胞占分選出細(xì)胞的百分比。)細(xì)胞間粘連重疊或細(xì)胞碎片過(guò)多，都會(huì)影響信號(hào)的收集及所收集信號(hào)的真實(shí)性，所以制備單細(xì)胞懸液是進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析最關(guān)鍵的第一步。)正交狀態(tài)，使儀器檢測(cè)時(shí)的變異減少到最小，從而控制儀器的CV值。10%。n chu225。adhesive T 細(xì)胞快速準(zhǔn)確地測(cè)定。,第六十五頁(yè)，共七十二頁(yè)。ngguāng)細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以及熒光(y237。在壓電晶體上加上頻率為30kHz的信號(hào)，使液柱斷裂成一連串均勻的液滴。q236。 li225。,第六十七頁(yè)，共七十二頁(yè)。h233。o)選擇地侵入人類(lèi)具有重要免疫功能的T淋巴細(xì)胞亞群中的輔助性T細(xì)胞，即Th細(xì)胞(CD4＋)，使具有重要免疫功能的T細(xì)胞群被破壞，繼而累及全身免疫器官，使機(jī)體免疫功能下降。ich該標(biāo)準(zhǔn)品是經(jīng)標(biāo)定的，如以計(jì)算1000個(gè)細(xì)胞為1ml，作為設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。,第五十頁(yè)，共七十二頁(yè)。q236。 當(dāng)細(xì)胞流過(guò)光束的速度超過(guò)FCM儀器響應(yīng)速度時(shí)，細(xì)胞產(chǎn)生的熒光信號(hào)就會(huì)丟失，這段時(shí)間稱(chēng)為儀器的死時(shí)間。采用List Mode方式可大量節(jié)約內(nèi)存和磁盤(pán)容量。 噴嘴的振動(dòng)頻率即每秒鐘產(chǎn)生水滴的數(shù)目。,（2）熒光信號(hào)的面積和寬度 熒光信號(hào)的面積是采用對(duì)熒光光通量進(jìn)行積分測(cè)量，一般對(duì)DNA倍體測(cè)量時(shí)采用面積，這是因?yàn)闊晒饷}沖的面積比熒光脈沖的高度更能準(zhǔn)確(zhǔnqu232。,（四）信號(hào)檢測(cè)與分析(fēnxī) 當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過(guò)激光照射區(qū)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)產(chǎn)生不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。,由右圖可知，空氣泵產(chǎn)生壓縮空氣，通過(guò)鞘流壓力調(diào)節(jié)器加在鞘液上一恒定的壓力，這樣鞘液以勻速運(yùn)動(dòng)流過(guò)流動(dòng)室，在整個(gè)(zhěngg232。 狹縫掃描流式細(xì)胞儀被檢細(xì)胞直徑大于激光光斑直徑，可計(jì)算出細(xì)胞直徑大小、核直徑大小、核漿比例等一系列的形態(tài)學(xué)信息的定量資料。,二、流式細(xì)胞(x236。tǐ)壓力的作用下，懸浮在樣品管中的單細(xì)胞懸液形成樣品流垂直進(jìn)入流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室，沿流動(dòng)室的軸心向下流動(dòng)。ngy242。ngw233。,第二頁(yè)，共七十二頁(yè)。):流式細(xì)胞儀是以激光為光源，集流體力學(xué)技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)以及細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技儀器。,1967年Van Dilla 和Los Alamos采用了CroslandTaylor設(shè)計(jì)的層流流動(dòng)室和氬離子激光器開(kāi)發(fā)出了液流束、照明光軸，檢測(cè)系統(tǒng)三者互相垂直的流式細(xì)胞儀，成為(ch233。應(yīng)用(y236。在氣體(q236。o)分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)，從而達(dá)到細(xì)胞分類(lèi)收集的目的。 前者的光斑直徑大于被檢細(xì)胞體