【正文】 18 0 1 2 3 4 5 6 7234567891011Temperature/℃Tim e /h 圖 連翹花原液 3℃ 降溫曲線 2 0 2 4 6 8 10 12 14 16 182530354045Temperature/℃Tim e /m in 圖 迎春花原液 45℃ 升溫曲線 19 2 0 2 4 6 8 10 12 14 16 182530354045Temperature/℃Tim e /m in 圖 連翹花原液 45℃ 升溫曲線 除雜前 提取液 吸收光譜的 測定 連翹花中主要含有連翹苷、連翹酯苷及黃酮類成分 ， 黃酮類成分主要是槲皮素 ；迎春花含丁香甙、迎春花苷、及黃酮類成分 ，黃酮成分主要是蘆丁 。經(jīng)過一段時間的離心操作，就可以實現(xiàn)密度不同物質(zhì)的有效分離。達到穩(wěn)定晶型需要足夠的時間 ， 延長結(jié)晶時間有利于穩(wěn)定晶型的形成和成長。李全宏等 [18]將離子交換層析應(yīng)用于濃縮蘋果汁中蛋白質(zhì)的提純。 (3)根據(jù)電荷不同進行分離純化 根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷即酸堿性質(zhì)不同分離蛋白質(zhì)的方法有電泳和離子交換層析兩類。例如 ， 在冰浴中磁力攪拌下 ， 在 4℃ 預(yù)冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇 (25℃ )， 可以使冰核蛋白析出 ， 從而純化冰核蛋白。因而可以通過調(diào)節(jié)溶液的 pH 值來分離純化蛋白質(zhì)。例如 ， 在從大米渣中提取蛋白質(zhì)的實驗中 ， 加入纖維素酶和 ? 淀粉酶進行預(yù)處理后 ， 再用離心的方法將有用物質(zhì)與分解掉的雜質(zhì)進行初步分離 [13]。我國是一個占世界人口四分之一的、具有 13 億人口的大國 ， 因此 ， 這樣多的人口 ， 要進 入 一日三餐的加工食品時代 ， 需要的食用天然色素是很大的。我國各天然色素生產(chǎn)企業(yè)一般規(guī)模都偏小 ， 產(chǎn)品單一 ， 在小量、低質(zhì)量、高損耗中徘徊 ， 經(jīng)濟效益不明顯 ， 抗風(fēng)險能力 差。 天然 產(chǎn)物 的 發(fā)展前景 隨著我國食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)的發(fā)展 ， 天然 產(chǎn)物 的市場需求量將大幅度增加 ， 新產(chǎn)品開發(fā)和應(yīng)用范圍的擴大 ， 使得天然產(chǎn)物 市場具有廣闊的發(fā)展前景。在色素分離中 ， 利用色素與雜質(zhì)分子大小的差異 ， 5 采用纖維超濾膜和反滲透膜 ， 可阻留各種不溶性大分子如多糖、蛋白質(zhì)等。微波萃取克服了超臨界萃取和溶劑萃取方法的上述缺陷 ， 既降低了操作費用 ， 又符合環(huán)境4 保護的要求 ， 表現(xiàn)出良好的發(fā)展前景和巨大的應(yīng)用潛力。通過對 天然產(chǎn)物 分子性質(zhì)的研究 ， 人們就可以更好地指導(dǎo)其在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用 ， 為 天然產(chǎn)物 工業(yè)的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)。 實驗結(jié)果表明對天然產(chǎn)物提取液進行冷凍、加熱、離心處理能夠有效除去提取液中的蛋白質(zhì)和脂肪等大分子雜質(zhì)。 我國天然 產(chǎn)物 的 研究和應(yīng)用現(xiàn)狀 天然 產(chǎn)物 的 研究方法 天然 產(chǎn)物 的獲得和生產(chǎn)主要有 三 條途徑 ： 一是直接提取 ； 二是人工合成 ； 三是利用生物技術(shù)生產(chǎn)。它兼?zhèn)溆袣怏w低粘度、高擴散和流體的高密度、大溶解度兩方面的特點 [8]。趙明波等建立了菊科植物紅花中的主要有效成分羥基紅花黃色素 A 的 HPLC 定量分析方法。其中 ： 焦糖每年產(chǎn)量約 萬 噸 ； 紅曲米及紅曲米粉每年約產(chǎn) 4000 多 噸 ；紅曲紅每年約產(chǎn) 200 多 噸； 辣椒油樹脂及辣椒紅每年約產(chǎn) 250 多 噸； 桅子黃色素每年約產(chǎn)10 噸； 高梁紅色素每年約產(chǎn) 45 噸； 可可殼棕每年約產(chǎn) 10 噸 ； 甜菜紅每年約產(chǎn) 20 噸 ； 蟲膠紅每年約產(chǎn) 20 噸 。我國 產(chǎn)物 生產(chǎn)行業(yè)雖有少數(shù)工廠擁有較好的生產(chǎn)技術(shù)、工藝和裝備 ， 但大多數(shù)企業(yè)在技術(shù)、工藝方面比較落后 ， 設(shè)備陳舊或簡陋 ，必須不斷創(chuàng)新提高 ， 才能使產(chǎn)品上檔次 ， 行業(yè)才有發(fā)展。又例如生產(chǎn)辣椒紅色素的工廠 ，用辣椒作為原料。它們經(jīng)常和鹽析、鹽溶方法聯(lián)合使用 ， 在進行鹽析或鹽溶后可以利用這兩 種方法除去引入的無機鹽。 (2)根據(jù)溶解度不同進行分離純化 影響蛋白質(zhì)溶解度的外部條件有很多 ， 比如溶液的 pH 值、離子強度、介電常數(shù)和溫度等。鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法 ， 如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法 ， 其中硫酸銨鹽析法廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)。采用雙水相系統(tǒng)濃縮目的蛋白 ， 受聚合物分子量及濃度、溶液 pH 值、離子強度、鹽類型及濃度的影響 [16]。帶有正電荷的為陰離子交換樹脂 ； 反之為陽離子交換樹脂。 影響冷凍脫脂的因素 影響冷凍脫脂的因素主要有 4 個方面。 對于兩相密度相差較小，黏度較大，顆粒粒度較細的非均相體系，在重力場中分離需要很長時間，甚至不能完全分離。 提取液的高效液相色譜分析 用高效液相色譜對純化后的 溶液進行分析 ， 流動相為 乙腈 ： 水 (： )， 流速為 minmL ， 柱溫為 室溫 ， 分離柱為 C18； 進樣量 20 L? ， 檢測波長為 ：迎春花 226nm?? ；連翹花 204nm?? 。 29 結(jié) 論 本課題利用蛋白質(zhì)分子的熱變性和低溫脫脂原理為理論依據(jù)，對迎春花和連翹花提取液先進行冷凍處理，經(jīng)高速離心后，再進行加熱離心處理，制備了經(jīng)不同條件處理的提取液。 提取液的高效液相色譜譜圖分析 迎春花與 連翹提取液處理前后高效液相譜圖見 圖 m in0 2 4 6 8 10 12m A U 0510152025303540 1.083 1.454 1.875 1.964 2.116 2.211 2.363 2.806 3.502 5.282 圖 稀釋 100 倍迎春花原液高效液相色譜圖 25 m in0 1 2 3 4 5 6 7m A U 010203040 1.078 1.447 1.802 1.882 2.114 2.200 2.364 2.803 3.504 5.286 圖 稀釋 100 倍迎春花冷凍處理高效液相色譜圖 m in0 1 2 3 4 5 6 7m A U 051015202530 1.067 1.451 1.847 1.978 2.121 2.222 2.818 3.511 5.293 圖 稀釋 100 倍迎春花加熱處理高效液相色譜圖 26 m in0 2 4 6 8 10m A U 020406080100120140 1.069 1.472 1.549 1.842 1.980 2.108 2.830 4.332 5.295 6.499 圖 稀釋 100 倍連翹花原液高效液相色譜圖 m in0 2 4 6 8 10m A U 020406080100 1.078 1.470 1.544 1.839 1.972 2.097 2.828 3.511 4.082 4.334 5.297 6.500 圖 稀釋 100 倍連翹花冷凍處理高效液相色譜圖 27 m in0 1 2 3 4 5 6 7m A U 020406080100120 1.075 1.468 1.541 1.829 1.965 2.091 2.823 3.511 4.331 5.300 6.500 圖 稀釋 100 倍連翹花加熱處理高效液相色譜圖 從 圖 圖 這些圖譜中可以看出，經(jīng)過一系列除雜后 ，主要成分的含量增加 ，但峰面積整體下降，證明在除雜過程中目標成分也有少量損失；雜質(zhì)峰的數(shù)目減少，說明大量雜質(zhì)被去除 。 14 第二章 實驗部分 實驗材料 連翹花提取液 ，總黃酮含量 %； 迎春花提取液 ：總黃酮含量 %； 均為本實 驗室自備， 于低溫冷藏備用。 高速離心分離技術(shù) 離心分離簡介 離心分離 (centrifugal separation)： 借助于離心力，使比重不同的物質(zhì)進行分離的方法。范繼業(yè)等利用殼聚糖親和層析提取的抑肽酶比活達到 71 428 1BAEE mg?? ， 純化回收率達到 %。孫臣忠 [17]等研究了聚丙烯酰胺電泳、等電聚焦電泳和等速提純電泳在分離純化蛋白質(zhì)中的應(yīng)用。雙水相萃取技術(shù) (Aqueous two phase extraction， ATPE)是指親水性聚合物水溶液在一定條件下形成雙水相 ， 由于被分離物在兩相中分配的不同 ， 便可實現(xiàn)分離 ， 被廣泛用于生物化學(xué)、細胞生物學(xué)和生物化工等領(lǐng)域的產(chǎn)品分離和提取。利用酸法提取得到的鰱魚魚肉蛋白質(zhì)無腥味、色澤潔白 ， 蛋白質(zhì)產(chǎn)率高達 90%。凝膠過濾的原理是當(dāng)不同蛋白質(zhì)流經(jīng)凝膠層析柱時 ， 比凝膠珠孔徑大的分子不能進入珠內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) ， 而被排阻在凝膠珠之外 ， 隨著溶劑在凝膠珠之間的空隙向下運動并最先流9 出柱外 ； 反之 ， 比凝膠珠孔徑小的分子后流出柱外。 透析和超濾是分離蛋白質(zhì)時常用的方法。一個原料多出好幾個產(chǎn)品 ， 物盡其用 ，提高經(jīng)濟效益。 (1)大力發(fā)展 “ 天然、營養(yǎng)、多功能 ” 的食用天然色素 今后在我國化學(xué)合成著色劑與天然色素并用的情況下 ， 應(yīng)當(dāng)大力發(fā)展 “天然、營養(yǎng)、多功能 ”的天然色素 ， 著力開發(fā)、研究、生產(chǎn)、使用既可以著色 ， 又有某些生理功能的天然色素例如天然價胡蘿卜素 ， 作為食品黃色著色劑 ， 進人人體后在加氧酶作用下能在肝臟或腸粘膜裂解成兩個分子的維生素 A， 而維生素 A 有使上皮細胞健全、保持正常視覺、提高免疫力等多種生理功能。我國食用色素的生產(chǎn)使用管理是改革開放以來食品工業(yè)快速發(fā)展而迅速發(fā)展壯大起來的。與傳統(tǒng)的萃取方法相比 ， ATPE 技術(shù)所形成的兩相大部分為水 ， 兩相界面張力很小 ， 為有效成分的溶解和萃取提供了適宜的環(huán)境 ， 相際間的質(zhì)量傳遞快 ， 操作方便 ， 時間短 ， 條件溫和 ， 易于工程放大和連續(xù)操作。蝦殼中的蝦青素大多與蛋白質(zhì)結(jié)合 ， 應(yīng)用堿液脫蛋白的原理 ， 當(dāng)用熱堿液煮蝦殼時 ， 蛋白質(zhì)溶出 ， 蝦青素也隨著溶出 ， 從而達到提取蝦青素的目的。本實驗在查閱大量文獻的基礎(chǔ)上進行，得出除雜效果好、操作簡便、經(jīng)濟、能耗低，適應(yīng)實驗室大多數(shù)相似天然產(chǎn)物的除雜需要的操作方法，為天然產(chǎn)物研究工作者提供參考。 Freezing。利用有機溶劑如甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等提取姜黃得姜黃色素 [7]， 將蝦殼用鹽酸浸泡 24h 后過濾 ， 濾渣用 95%乙醇浸泡提取液經(jīng)蒸餾后得到濃縮的粗制蝦青素提取物。結(jié)果表明 ， 采用分子蒸餾法 ，從脫蠟的甜橙油中一步提取的色素