【正文】 提供額外的好處：通過對腫瘤特異性肽或抗體運載工具的表面改性允許非特異性藥物有選擇性地選擇受體。因此，如果MOMIPP是以共價鍵結合到靶蛋白（S），有可能光起始劑反應中間體的形成是沒有必要的。在文獻中描述的所有具有細胞毒性的查耳酮類化合物中，與MOMIPP最相似的那個化合物含有一個連接到3,4,5 三甲氧基苯基基取代的取代吲哚環(huán)。像2 吡啶（化合物10），3 吡啶（化合物11和16），吡嗪（化合物17），或苯基類似物（化合物9）這些類似物是無效的。Figure 6. Comparison of the effects of MOMIPP (pound 19), 5azidoMIPP (pound 36), and 6azidoMOMIPP (pound 41) on morphology and viability of U251 glioblastoma cells. (A) The indicated pounds were added to the cells at concentrations of or 10 μM, and the cells were observed by phasecontrast microscopy after 48 h. (B and C) U251 cells were treated with varying concentrations of the indicated pounds for 48 h, and longterm cell viability was assessed by colonyforming assays. Each represents the counts from three dishes (mean 177。 (2) NaN3, 75% AcOH, 0 176。然而，在這一點上，我們的SAR研究還沒有發(fā)現(xiàn)任何非本質(zhì)的數(shù)據(jù)庫，可以鏈接到一個龐大的親和標簽庫（例如，生物素）或拴了沒有失去活性的堅實基體。到48小時，細胞活力減少約40％，而在類似的細胞密度下同期處理的MCF7乳腺癌細胞減少了70％（圖5F）。與可行性研究不同的是，在這些實驗中，該化合物在研究開始時被添加，并沒有持續(xù)的補充。 4 甲基（溴甲基）苯甲酸烷基化產(chǎn)物在相轉(zhuǎn)移條件下用于合成單 O被烷基化產(chǎn)品23。我們通過Vilsmeier哈克甲?；? 甲基5 甲氧基吲哚合成了關鍵中間體18，接著與4 乙酰吡啶耦合出化合物19（圖1C）。（3）48小時暴露在這些化合物中的細胞上顯示細胞集落形成方式（2周為限）。其中，化合物2（圖1）被選定做進一步研究。（6）這種死亡被認為是非細胞凋亡形式，因為其并非伴隨著核染色質(zhì)濃縮，細胞出泡，或核小體DNA片段。對吲哚類查耳酮作為新型非細胞凋亡形式——Methuosis的誘導劑的合成和評價methuosis是一種新的蛋白酶獨立細胞死亡的形式，從胞吞胞吐派生的空泡的大量積累，最終導致細胞脫離底層和破裂。這最終導致代謝活動減少，細胞膜破裂。（10）化學數(shù)據(jù)庫的檢索發(fā)現(xiàn)了相似性 75％的其他化合物。后添加新鮮化合物。因為比較化合物1215與MIPP表明吲哚環(huán)5位和2位的改變都會影響活性，我們從市售2 甲基5 甲氧基吲哚出發(fā)合成了2 甲基5 甲氧基類似物。市售的2 甲基5 甲氧基吲哚被BBr3甲基化產(chǎn)生22。為了獲得對每個化合物的活性持續(xù)比較的方法，5，或10μM的化合物處理下培養(yǎng)的細胞數(shù)量（圖2B）進行計數(shù)的方法來評估它們對細胞的生長和生存的影響。圖5E所示，在加入MOMIPP后24小時內(nèi)HMECs進行大范圍的細胞質(zhì)空泡化。確定藥物靶點的一個常用的方法是親和層析。C, 95%. Compound 33: H2, 10% Pd/C, EtOH, RT, 97%. Compound 34: (1) NaNO2。雖然比不上MOMIPP，5疊氮化合物在其生物活性方面明顯優(yōu)于6疊氮化合物。關于第二個芳基查耳酮架構系統(tǒng)，我們了解到，吡啶環(huán)的對位氮定位對活性是至關重要的。相反，大量類似于我們用MOMIPP處理時觀察到的胞內(nèi)空泡在用抗有絲分裂的查耳酮類化合物處理時并沒有出現(xiàn)。第二個可能使其適合受體識別MOMIPP的核心結構特征是其親電的α，β不飽和酮基，其可能對親核受體殘基的共價改造（如半胱氨酸）也有作用。因此，當 MOMIPP對抗藥性癌細胞的細胞毒性影響及其在體內(nèi)傳遞的可用途徑的范圍呈現(xiàn)時，我們認為MOMIPP可以作為寶貴的原型用于進一步臨床前測試。除光活性疊氮化合物36，MOMIPP的核心結構包含兩個其他的功能，可能會使其適合用于受體識別研究，從而有可能避開引入一個光活性疊氮化合物的需要。許多出版物已都出版證實查爾酮及相關分子可以作為抗有絲分裂劑，并且在認識他們的SAR方面已取得實質(zhì)性進展。在5位，不同的修改有相反的結果。疊氮化物通過甲?；玫?5，35與4 乙酰吡啶的濃縮產(chǎn)生36——5疊氮MIPP。Scheme 3. Synthesis of 5′ and 6′ Azido Derivatives of MIPPaa(A) Conditions and reagents: Compounds 28 and 29: (1) COCl2, DMF, 1,2DCE, 0 176。SD) from four separate wells.潛在的光親探針的合成及生物活性我們SAR的研究表明，MIPP或MOMIPP（例如，修改吡啶環(huán)）結構的非常微小的變化可以消除他們誘導methuosis的能力。SD) from three separate dishes, with the results expressed as percent of the mean of the parallel control dishes containing DMSO. (B) The effects MOMIPP (●) and MIPP (■) on colony formation were pared as in panel A, except that cells were exposed to the pounds for only 4 h instead of 48 h.為了確定誘導methuosis的化合物針對抗TMZ的神經(jīng)母細胞瘤是否有效，我們使用以前生成的基本上不受濃度高達100微米TMZ影響的抗TMZ膠質(zhì)瘤細胞系（10）（圖5A）如圖5b所示，MIPP和MOMIPP能夠誘導methuosis和降低抗TMZ細胞的細胞活性，但MOMIPP的效能明顯優(yōu)于MIPP。此后，我們將3 （5 甲氧基2 甲基1H吲哚3 基）1 （4 吡啶基）2丙烯1這種化合物縮寫為“MOMIPP”。我們在所有的反應中對在吡啶氮發(fā)生的烷基化反應進行了觀察。但當在集落形成實驗和細胞形態(tài)方面比較時,化合物13和14的活性類似MIPP。α，β不飽和酮的核心基礎類似物可以由吲哚3 carboxaldehydes和芳酮的ClaisenSchmidt縮合制備。然而，查耳酮已長期被廣泛應用于描述許多在此框架內(nèi)建立的合成衍生物。（5）我們相信，有可能開發(fā)新的方法通過誘導可替代的非細胞凋亡的細胞死亡形式來治療這類有抗藥性的癌癥，這種細胞死亡形式不以DNA損傷作為觸發(fā)。這些研究的潛在意義通過發(fā)現(xiàn)MOMIPP有效地降低了替莫唑胺耐藥性膠質(zhì)母細胞瘤和阿霉素耐藥乳腺癌細胞的生長活性而不斷被重視。最近，我們描述了一個原型查耳酮相關化合物，它能在抗TMZ和非抗GBM細胞以及來自乳腺癌，結腸癌，胰腺的其他癌癥細胞系以帶有methuosis的特征形式來誘導細胞死亡（10）。（10）此外，MIPP在抑制對TMZ有高抗的GBM細胞的生長和活力方面也非常有效。Scheme 1. Synthesis of Analogues of MIPP (Compound 2)aaThe specific substituents at R1, R2, R3, and Ar for each numbered pound are listed in the chart. For A–D, the specific conditions and reagents were as follows: (A) piperidine, CH3OH, reflux, 19–89%. (B) BBr3, CH2Cl2, ?78 176。5OH的化合物21，由BBr3去甲基化的19（1B計劃）形成，與5 甲氧基化合物19（見表1）相比，其表現(xiàn)出在活性上的顯著降低與先前觀察到的5OH在