【正文】 喜樹(shù) (Camptotheca acuminata Dee)屬紫樹(shù)科 (Nyssaeeae)，別名旱蓮木，是我國(guó)特有樹(shù)種之一，主要分布于我國(guó)長(zhǎng)江流域及以南地區(qū)，為我國(guó)闊葉樹(shù)中的珍品之一，具有很高的觀賞價(jià)值，是綠化、美化環(huán)境的優(yōu)良綠蔭樹(shù)和風(fēng)景樹(shù)，同樣也是非常重要藥用樹(shù)種之一 [1]。王學(xué)利得到水提取喜樹(shù)葉總黃酮的最優(yōu)提取方案：以 pH 值 10 的水為溶劑，提取溫度 91100℃ ，溶劑體積 5060 mL，提取時(shí)間 2537 min，可最大限度地提取喜樹(shù)葉中的黃酮 [4]。 中心復(fù)合設(shè)計(jì)仍然是當(dāng)前應(yīng)用得最多的 RSM 經(jīng)典設(shè)計(jì)方法 [12]。 5 實(shí)驗(yàn)方法 與步驟 樣品處理 將葉片剪成適當(dāng)長(zhǎng)度，再在 105℃ 烘至恒重。響應(yīng)面分析也是一種最優(yōu)化方法，它是將體系的響應(yīng)（如萃取化學(xué)中的萃取率）作為一個(gè)或多個(gè)因素（如萃取劑濃度、酸度等）的函數(shù)，運(yùn)用圖形技術(shù)將這種函數(shù)關(guān)系顯示出來(lái)，以 3 供我們憑借直覺(jué)的觀察來(lái)選擇試驗(yàn)設(shè)計(jì)中的最優(yōu)化條件。 2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀 近些年來(lái)國(guó)內(nèi)，從中草藥中提取分 離黃酮類(lèi)化 合 物的工作開(kāi)得較為廣泛。這些結(jié)論為提高喜樹(shù)葉黃酮利用率及其工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論參考。 10 論文篇幅 10000 字左右。 5 寫(xiě)作水平 論點(diǎn)鮮明；論據(jù)充分；條理清晰；語(yǔ)言流暢。本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)可能影響喜樹(shù)葉黃酮提取的五個(gè)因素：料液比，提取次數(shù)，乙醇體積分?jǐn)?shù)，提取溫度，每次提取時(shí)間進(jìn)行單因素試驗(yàn)，結(jié)果可以看出各因素與提取率的大致關(guān)系，并找出了三個(gè)顯著影響因素即料液比，乙醇 體積分?jǐn)?shù)，提取溫度。 。 三、張祖姣老師提問(wèn)：黃酮的最佳可見(jiàn)光吸收波長(zhǎng)是多少？影響黃酮提取的單因素有哪些？那個(gè)響應(yīng)面的分析軟件你會(huì)用嗎？ 我的回答： 510nm。 料液比的影響 取樣品 1g，乙醇體積分?jǐn)?shù) 70%， 70℃ 分別于 1: 1: 1: 1: 1:50 萃取， 回流提取 120min，測(cè)定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。 2 試驗(yàn)方法 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱(chēng)取約 20mg 蘆 丁標(biāo)準(zhǔn)品于稱(chēng)量瓶中置 105℃ 烘箱下烘干至恒重 ,干燥器中冷卻，精確稱(chēng)取 10 mg 蘆丁 標(biāo)準(zhǔn)品，用 70%乙醇定容至 100 ml 為標(biāo)準(zhǔn)液。黃酮類(lèi)化合物在植物體中通常與糖結(jié)合成苷類(lèi)，小部分以游離態(tài)（苷元）的形式存在。 （ 3）行文結(jié)構(gòu)合理，層次分明，格式規(guī)范。 能力要求 （ 1）通過(guò)完成畢業(yè)論文，掌握科研工作中查找文獻(xiàn)數(shù)據(jù)并學(xué)會(huì)閱讀文獻(xiàn)。絕大多數(shù)植物體內(nèi)都含有黃酮類(lèi)化合物，它在植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、開(kāi)花、結(jié)果以及 抗菌 防病等方起著重要的作用。 黃酮含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別取 0. 0、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0 mL的 0. 1mg/mL 蘆 丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于 6 支比色管中，分別加入 0. 3 mL 5%亞硝酸鈉，放置 6 min，加 0. 3 mL 10%硝酸鋁后放置 6 min,，再加1. 0mol/L NaOH ，加 70%乙醇定容至 10 mL，搖勻，放置 12min 得測(cè)定液。 不同粒度的影響 取樣品 1g，乙醇體積分?jǐn)?shù) 70%， 70℃ 分別于 20 目、 40 目、 60 目、 80 目萃取 ,回流提取120min，測(cè)定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。影響黃酮提取的單因素主要有：乙醇體積分?jǐn)?shù)，提取溫度，提取時(shí)間，提取次數(shù)，料液比，不同粒度。 學(xué) 生 簽 名： 20xx 年 3 月 5 日 指導(dǎo)教師簽名： 指導(dǎo)內(nèi)容 記錄 (六 ) 。然后以提取率為響應(yīng)值，進(jìn)行了經(jīng)典的三因素三水平BoxBenhnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)，并通過(guò) DesignExpert 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得到相關(guān)響應(yīng)面數(shù)據(jù)和分析結(jié)果。 15 寫(xiě)作規(guī)范 符合學(xué)術(shù)論文的基本要求。 5 實(shí)評(píng)總分 成績(jī)等級(jí) 22 評(píng)閱教師評(píng)審意見(jiàn)： 評(píng)閱教師簽名： 說(shuō)明：評(píng)定成績(jī)分為優(yōu)秀、良好、中等、及格、不及格五個(gè)等級(jí)，實(shí)評(píng)總分 90— 100 分記為優(yōu)秀， 80— 89 分記為良好， 70— 79 分記為中等， 60— 69 分記為及格， 60 分以下記為不及格。 【關(guān)鍵詞】 響應(yīng)面法 ； 喜樹(shù)葉 ； 黃酮提取 II Optimization of Extraction Process of Flavonoids from Camptotheca acuminata leaves Using Response Surface Methodology Abstract Studies have shown that the content of flavonoids in Camptotheca acuminata leaves is relatively abundant. In order to improve the extraction efficiency of flavonoids in Camptotheca acuminata leaves, studies of the paper used airdry Camptotheca acuminata leaves as raw material, ethanol as extraction agent. In this extraction process, the single factor experiment and response surface experimental design analysis method were applied to reflux extraction, to research reflux extraction conditions and their impact on the yield of flavonoids extraction results, and seek the optimal conditions. The single factor experiments first had five factors that may affect the yield of flavonoids extraction: solidliquid ratio, extraction times, ethanol concentration, extraction temperature and extraction time and the results had shown that the approximate relationship of the various factors and extraction rate, and three significant factors: solidliquid ratio, ethanol volume fraction, extraction temperature. Then the classic three factors and three levels BoxBenhnken experimental design was carried out to establish a quadratic regression model for the extraction efficiency of total flavonoids, and analysis of the experimental data was processed by the DesignExpert software. The optimal conditions of ethanol extract for flavonoids in Camptotheca acuminata leaves were obtained as follows: solidliquid ratio1:40, ethanol volume fraction 60%, extraction temperature 80 176。已有 從黃芩、水芹、銀杏葉、竹葉、龍柏葉、 楮樹(shù)葉 中提取分離了許多黃酮類(lèi)化合物 [4]。 顯然，要構(gòu)造這樣的響應(yīng)面并進(jìn)行分析以確定最優(yōu)條件或?qū)ふ易顑?yōu)區(qū)域，首先必須通過(guò)大量的量測(cè)試驗(yàn)數(shù)據(jù)建立一個(gè)合適的數(shù)學(xué)模型（ 建模 ），然后再用此數(shù)學(xué)模型作圖。采用 Soxhlet 提取法，以沸程為 30℃ 60℃ 的石油醚為脫脂劑于 45℃ 水浴中脫脂 3 次每次 2 小時(shí)，充分除去樣品 中脂類(lèi)和脂溶性色素。對(duì)于非線性體系可作適當(dāng)處理化為線性形式。從喜 樹(shù)中提取總黃酮的研究也鮮見(jiàn)報(bào)道。 camptotheca acuminata leaves。 2．廖陽(yáng)老師提問(wèn)： ①英文 標(biāo)題是什么意思，在我印象中是方法論，研究法的意思，你怎么解釋?zhuān)? 答：老師你是對(duì)的。 10 論文篇幅 10000 字左右。這些結(jié)論為提高喜樹(shù)葉黃酮利用率及其工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論參考。 學(xué) 生 簽 名： 20xx 年 3 月 7 日 指導(dǎo)教師簽名： 指導(dǎo)內(nèi)容 記錄 (七 ) 分組開(kāi)展。 會(huì)議主持人： 記 錄 人： 20xx 年 01 月 13 日 指導(dǎo)小組意見(jiàn) 負(fù)責(zé)人簽名： 年 月 日 系 意 見(jiàn) 負(fù)責(zé)人簽名： 年 月 日 注：此表由學(xué)生本人填寫(xiě)，一式三份，一份留系里存檔，指導(dǎo)老師和本人各保存一份 湖南科技學(xué)院畢業(yè) 論文 指導(dǎo)過(guò)程記錄表 畢業(yè)論文 題目 響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化喜樹(shù)葉黃酮提取工 藝 學(xué)生姓名 王凱 學(xué)號(hào) 20xx07002213 專(zhuān)業(yè)班級(jí) 生物工程 0902 指導(dǎo)教師 王宗成 職稱(chēng) 助教 系（教研室） 生化系 指導(dǎo)過(guò)程記錄 指導(dǎo)內(nèi)容 記錄 (一 ) ，特別是喜樹(shù)黃酮提取工藝的研究現(xiàn)狀。 利用 DesignExpert 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 樣品處理方法 將葉片剪成約 1 cm 長(zhǎng)度，用粉碎機(jī)粉碎，再在 105℃ 烘至恒重。大量研究顯示，黃酮類(lèi)化合物有強(qiáng)大的生理活性和藥用價(jià)值，具有抗腫瘤、護(hù)肝、抗炎、抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)等諸多功效，同時(shí)還能抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用、血小板凝集、毛細(xì)管滲透性以及脆性等 [3]。 （ 2）通過(guò)實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)形成嚴(yán)謹(jǐn) 科學(xué)的態(tài)度和一絲不茍的學(xué)習(xí)習(xí)慣。 論文要求 （ 1）經(jīng)過(guò)系列實(shí)驗(yàn)，獲取真實(shí)數(shù)據(jù)，保證論文論據(jù)﹑數(shù)據(jù)的真實(shí)性。 黃酮類(lèi) 化合物 （ flavonoids）是一類(lèi)存在于 自然界 的、具有 2苯基色原酮（ flavone）結(jié)構(gòu)的化合物。 主要試劑： 蘆 丁 標(biāo)準(zhǔn)品 、 95%乙醇 ， 石油醚等 其他試劑均為分析純。 取樣品 1g， 乙醇體積分?jǐn)?shù) 70%，在 70℃ 分別萃取，回流提取 30min、 60min、 90min、 120min、150min、 180min，測(cè)定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。 二、 劉小文老師提問(wèn)：你的實(shí)驗(yàn)中黃酮提取的主要方法是什么？ 我的回答：我的黃銅提取主要采用的是乙醇回流提取，利用分光光度計(jì)測(cè)吸光度，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線求黃酮提取率。 學(xué) 生 簽 名： 20xx 年 3 月 4 日 指導(dǎo)教師簽名： 指導(dǎo)內(nèi)容 記錄 (五 ) 。 湖南科技學(xué)院本科畢業(yè)論文評(píng)審表 論文題目 響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化喜樹(shù)葉黃酮提取工藝 作者姓名 王凱 所屬系、專(zhuān)業(yè)、年級(jí) 生化 系 生物工程 專(zhuān)業(yè) 20xx 年級(jí) 指導(dǎo)教師 姓名、職稱(chēng) 王宗成 助教 字 數(shù) 10000 定稿日期 18 中 文 摘 要 研究顯示，喜樹(shù)葉中黃酮類(lèi)化合 物含量相對(duì)豐富。 10 外文應(yīng)用 能力 能閱讀、翻譯一定量的本專(zhuān)業(yè)外文資料、外文摘要和外文參考書(shū)目（特殊專(zhuān)業(yè)除外）體現(xiàn)一定的外語(yǔ)水平。 15 寫(xiě)作規(guī)范 符合學(xué)術(shù)論文的基本要求。本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)可能影響喜樹(shù)葉黃酮提取的五個(gè)因素：料液比，提取次數(shù)，乙