【正文】 潔凈室管理，北京， 2023 微生物菌種保藏 ? 菌種 是進(jìn)行微生物學(xué)研究和應(yīng)用的基本材料，是發(fā)展生物工程的重要基礎(chǔ)條件之一，是國家的重要生物資源。 ? 滅菌 ? 121 ℃ ， 30min. 醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 保護(hù)劑的準(zhǔn)備 ? 保護(hù)劑： 12%脫脂牛奶蒸餾水溶液， 2～ 5ml/管； ? 滅菌鍋加熱至沸騰，將牛奶管放入鍋中， 113℃ 滅菌20min； ? 打開放氣閥緩慢排出蒸汽， 取出滅菌后脫脂牛奶試管，迅速放入涼水中冷卻； ? 30℃ 培養(yǎng) 2天，無菌檢查合格后備用。 冷凍速度非常快 ：細(xì)胞內(nèi)冰晶非常小或稱玻璃化狀態(tài)。 United States Pharmacopoeia (USP) provides that: to microbial inoculation to a fresh medium on / in each germination time is referred to as a generation, and provides that strains of the passages (from the original strain from freezedried powder) must not exceed 5 generation. “ 我國的 GMP認(rèn)證中也如此要求，并且中國藥典 2023年版藥典也已做出 “ 菌種的傳代次數(shù)（自原始菌種凍干粉起）不得超過 5代 ” 這個(gè)明確的規(guī)定。 ? 保藏 將預(yù)凍后的冷凍管轉(zhuǎn)移至液氮?dú)庀?(150℃ )或液相 (196℃ )。 醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 真空冷凍干燥法 ? 指將保藏的菌種細(xì)胞或孢子懸浮于保護(hù)劑中，經(jīng)預(yù)凍后在真空條件下使水分升華，再經(jīng)真空封存后保存的一種長期菌種保存方法。 醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 微生物菌種保藏 ? 微生物菌種保藏方法 ?基本原理 是在挑選優(yōu)良純培養(yǎng)物并使其處于休眠狀態(tài)基礎(chǔ)上，人為地創(chuàng)造一個(gè)有利于休眠的環(huán)境，使其長期保存后仍能保持菌種原有的優(yōu)良特性 。 醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 熔封 ? 將安瓿管的中上部用火焰燒軟 ， 拉成細(xì)頸； ? 將安瓿管裝到多歧管上 ， 用火焰在細(xì)頸處熔封； ? 拉管時(shí)注意火焰不要離菌體太近 。含有藻酸鈉的菌懸浮液加入氯化鈣后會(huì)形成藻酸鈣固定化細(xì)胞，細(xì)胞一旦固定化，便可采取傳統(tǒng)的凍干保藏方法進(jìn)行保藏。 Mycelium radiating from an alginate bead on an agar plate. 169。 醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 真空冷凍干燥法 ? 保藏、運(yùn)輸方便； ? 保藏時(shí)間長 (5 ～ 10年 )； ? 對設(shè)備要求高 (真空冷凍干燥機(jī)、多歧管 )，對人員操作水平要求高； ? 冷凍