【正文】 當(dāng)所致的假陰性；須注意的是，如果靶濃度很高，可致在靶核酸和 IC之間產(chǎn)生競爭，而使 IC受抑制，此時(shí) IC可為陰性。n 當(dāng) SI上限 和 SI下限 值之一 n3s對應(yīng)的值時(shí)，說明該質(zhì)控測定值的變化已超出 3s，屬 “失控 ”。 177。后來（二十世紀(jì)五十年代初）， LeveyJennings將其引入臨床檢驗(yàn)的質(zhì)量控制 。 質(zhì)控規(guī)則的功能 n 簡單地說就是用于判斷測定批的失控還是在控 。 統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn) n 檢驗(yàn)誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機(jī)誤差。 核酸樣本的制備、擴(kuò)增檢測及其質(zhì)量控制n 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理n 核酸的分離純化n 靶核酸提取的質(zhì)量 n 臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) n 核酸樣本制備及擴(kuò)增檢測的質(zhì)控 n 產(chǎn)物檢測的質(zhì)控 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理n 靶核酸可以與宿主細(xì)胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構(gòu)形存在于細(xì)胞內(nèi)，如測定的是病原微生物 ,則靶核酸存在于細(xì)菌、病毒、原蟲或真菌細(xì)胞內(nèi)，如果上述細(xì)胞破裂 ,則靶核酸亦可存在于細(xì)胞外。 n 如為提取核酸后用于 DNA擴(kuò)增分析的樣本，可于 10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(～ )緩沖液中 4 ℃ 下保存。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測定步驟n 標(biāo)本收集： 選擇測定項(xiàng)目、標(biāo)本收集和保存。 n 室內(nèi)質(zhì)量控制（ Internal Quality Control,IQC) 由實(shí)驗(yàn)室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。 定 義n 批 (Run) 在相同條件下所獲得的一組測定。標(biāo)本保存 n靶核酸 (尤其是 RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對于核酸擴(kuò)增測定的有效性極為重要。n 具體做法是將裝有 TE緩沖液并上加石蠟油的擴(kuò)增反應(yīng)管放置于擴(kuò)增儀各孔中，熱電偶探針透過擴(kuò)增反應(yīng)管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)行一個常規(guī)的PCR擴(kuò)增，加熱模塊如為 96孔，則至少要測定 12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個擴(kuò)增過程中，可移動熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測至少要有一個擴(kuò)增周期。 在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的一個空管 的功能n基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴(kuò)增抑制物，因而對污染的反映更為靈敏 ；n不能取代原血清陰性樣本 。 n 常用的 13S質(zhì)控規(guī)則，其中 1為原式中的 A， 3s為原式中的 L，表示均值 177。n 9X 九個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)處于均值（）的同一側(cè)。 Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法的特點(diǎn)n其是在 LeveyJennings質(zhì)控圖方法的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的，自然也就具有LeveyJennings質(zhì)控圖方法的優(yōu)點(diǎn)，可通過相似的質(zhì)控圖來進(jìn)行分析； n假失控和假告警概率低； n誤差檢出能力增強(qiáng) 。n 按下述公式計(jì)算 SI上限 和 SI下限 值； SI上限 =（ x最大值 － 均值） /s SI下限 =（ 均值－ x最大值 ） /sn 將 SI上限 和 SI下限 值與 SI值表中的數(shù)值比較。此類誤差的發(fā)生率在不同的實(shí)驗(yàn)室有所不同，一般要求小于 %，且應(yīng)均勻地分布于測定前、測定中和測定后的不同階段。 相對評分和絕對評分的例子n相對評分：英國 NEQAsn絕對評分：美國 CAP采用何種評分方法較好？n 建立一個質(zhì)評體系，上述絕對評分和相對評分的方法均可以采用，其實(shí)質(zhì)內(nèi)容并無太大的差別，只不過是表現(xiàn)形式的不同，尤其是在定量測定。 n 儀器的問題。 n 確定質(zhì)控規(guī)則 。2s為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受； 以 177。n R4S 同一批測定中，兩個不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的 差值超出 4s控制限。n 批內(nèi)變異 的測定；n 室內(nèi)質(zhì)控物的 測定準(zhǔn)確度 的評價(jià)。 n內(nèi)標(biāo)設(shè)置的必要性 ？統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制 n理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件n測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 n統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn) n統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件n 基質(zhì)與待測樣本一致；n 所含待測物濃度接近試驗(yàn)的決定性水平；n 穩(wěn)定；n 靶值或預(yù)期結(jié)果已定；n 無已知的生物傳染危險(xiǎn)性；n 單批可大量獲得；n 價(jià)廉測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序n 每次檢測究竟使用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標(biāo)本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實(shí)驗(yàn)的隨機(jī)和系統(tǒng)誤差，應(yīng)每隔幾份臨床標(biāo)本插入 1份質(zhì)控樣本，但考慮國內(nèi)目前的實(shí)際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的標(biāo)本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿足要求。 加樣器的校準(zhǔn)？帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢？離心機(jī)？熱循環(huán)儀？水浴箱和 /或恒溫干浴儀？酶標(biāo)儀和洗板機(jī)？基因擴(kuò)增儀器設(shè)備的質(zhì)控帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢n首先制備一個含 1～ 2%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為 100μl，則將加樣器吸取體積調(diào)至 110～ 120μl，再套上吸頭后吸取上述有色液體。一般來說，如果標(biāo)本的量對病原體培養(yǎng)夠用的話，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴(kuò)增檢測。對一分析物重復(fù)多次測定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏差即為測定的不準(zhǔn)確度。 準(zhǔn)確度不能直接以數(shù)