【正文】 PHB濃度： 194g/L， PHB占細胞干重： 90 % — 達到了國際上文獻報道的高指標 。已知 δ內毒素為 130~160KD的多肽 ,在伴孢晶體內是以原毒素的形式存在 ,經體外堿解或在昆蟲腸道內被蛋白酶水解成55~70KD或更小的多肽 ,與敏感昆蟲中腸道上皮紋緣細胞上的特異受體位點結合 ,并破壞紋緣膜細胞滲透壓平衡 ,使細胞裂解 ,殺死昆蟲。? 凝集素抗蟲的作用機制可能是在昆蟲腸腔部位與糖蛋白結合 ,降低膜透性 ,從而影響營養(yǎng)物質的正常吸收 ,同時誘發(fā)病灶 ,促進消化道內細菌繁殖 ,使昆蟲得病或引起拒食，生長停滯甚至死亡 來源于動物的抗蟲基因? 動物來源的抗蟲基因主要有 4類 ,一是絲氨酸 (Ser)蛋白酶抑制劑基因 ,二是昆蟲毒素基因 ,三是幾丁質酶基因 ,四是體激素基因。 AT富含區(qū)在高等植物中被認為是不能表達的內含子 ,ATTTA重復序列的 mRNA的穩(wěn)定性差 ,二者都不能在高等植物中編碼。利用植物基因中相應的增強子 ,構建嵌合基因 。將樣品基因組 DNA/RNA通過體外逆轉錄， PCR/RTPCR擴增等技術摻入標記分子后，與位于微陣列上的已知序列雜交，通過激光共聚焦熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進行掃描，檢測雜交信號強度，計算機軟件進行數(shù)據(jù)的比較和綜合分析后，即可獲得樣品中大量基因序列特征或基因表達特征信息。所以已經有多家制藥企業(yè)介入芯片的開發(fā)。如果藥物能抑制重要基因的表達，則對它的深入研究就值得考慮。藥物研究中的應用? 2 調查藥物處理細胞后基因的表達情況 Marton等人利用基因芯片構建了免疫抑制性藥物 FK506處理酵母細胞后的基因表達圖譜。用基因芯片可以同時反應數(shù)千甚至更多個基因的特性，我們就可以分析基因組中不同基因與性狀或疾病的關系?？哭D基因作物的逃逸或從作物雜交中獲取轉基因抗性的植物是否會對自然植物群落產生嚴重影響都是需進一步研究的問題。轉抗蟲基因植物存在潛在的 生態(tài)風險性 等。一般來說 ,表達量越高 ,抗蟲效果就越好。? 蛋白酶抑制劑類抗蟲基因? 蛋白酶抑制劑 (PI)基因表達 的蛋白酶抑制劑是一類存在于許多植物的貯藏器官 (如種子和塊莖中 )的蛋白質 ,最早發(fā)現(xiàn)于 1938年 ,其含量高達總蛋白的 1%~10%。? (6)育種周期短 ,成本低 ,目的性強。從而降低發(fā)酵的成本。n 其原因是： n ● 發(fā)酵水平低；n ● 發(fā)酵成本高：n ● 回收成本高： n 細胞可控裂解E. coli cell 透明顫菌血紅蛋白基因 λ 噬菌體裂解基因PHB 合成基因提高氧利用率高產率 低成本 新菌株構建 生產 PHB的 基因工程策略為提高合成 PHB的能力： 利用大腸桿菌快速生長和可利用廉價碳源等優(yōu)點，將合成 PHB的基因在大腸桿菌中克隆和表達，以達到提高產量、降低成本的目的。 因此，提高氧的利用率是生物發(fā)酵過程中出現(xiàn)的一大難題。一例生化工程問題n 通常的方法是加強攪拌和加大通氣量，甚至通富氧或在發(fā)酵液中加入可高溶氧的物質（氧載體），來滿足菌體對氧的需求。一個實例：n 以 聚 β 羥基丁酸酯（ PHB）n 的生產為例：n 這是一種用微生物發(fā)酵法生產的可生物降解的高分子材料，它還具有生物相容性、壓電性及低透氧性等許多獨特的優(yōu)點。 琥珀突變的 λ噬菌體裂解基因 （ SRRz）： 位于長度為 1466bp的 EcoRⅠ ClaⅠDNA 片段上 Lytic genes from phage λ(SRRz)功能：編碼可裂解細菌細胞壁的幾種酶 S — 改變細胞膜的通透性，形成多孔結構； R — 產生可溶于水的轉糖基酶，以分解細 胞壁的肽聚糖； Rz— 產生肽鏈內切酶，可以切割肽聚糖寡 糖間及肽聚糖與胞壁外膜間的交聯(lián)；特性： S 基因琥珀突變解決了細胞壁裂解與菌體生長和 PHB積累的矛盾。? (3)對害蟲的毒性具有專一性 。來源于鏈霉菌類的 膽固醇氧化酶 對棉鈴象甲幼蟲有極高的毒性 ,并能延緩美洲煙草夜蛾的生長。例如 PHB（ 聚羥基丁酸）是理化性質類似聚丙烯的天然可降解的熱塑性化合物，許多細菌可產生該物質，由于其天然可降解，所以不會產生污染。、解決途徑及展望? 目前 ,轉抗蟲基因植物的研究已取得很大進展 , 并在生產上展現(xiàn)出了良好的應用前景?？瓜x轉基因植物的直接生態(tài)效應是對靶標昆蟲種群的控制 ,但靶標昆蟲有無向其他寄主植物轉移的可能 。由于方法費時費力，不適于大規(guī)模 DNA芯片制作，因而實現(xiàn)自動化點樣就顯得尤為重要。基因組學、蛋白質組學和生物信息學（ bioinformatics） 將大大促進制藥工業(yè)的發(fā)展。 其它應用? 1 環(huán)境化學毒物的篩選　采用毒物檢測芯片（Toxchips） 可對環(huán)境中眾多化學物質對人類基因的潛在毒性進行篩選，探查毒物 “開啟 ”或 “關閉 ”哪些基因，研究 “環(huán)境如何改變我們的基因 ”。采用所謂 “譯碼器 ”策略（Decoder stra