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植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(留存版)

2025-09-15 19:43上一頁面

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【正文】 0%)、NaOH、HCl、6BA、NNA、無菌水;3. 儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)用具:高壓滅菌鍋、天平、pH計(jì)、超凈工作臺、電爐、酒精燈、鑷子、解剖刀、剪刀、燒杯、培養(yǎng)瓶、量筒、燒杯、玻璃棒、廣口試劑瓶、牛皮紙、濾紙、培養(yǎng)皿、藥勺、支架、打火機(jī)等。一般無機(jī)物質(zhì)的母液在冰箱中可保存半年以上,有機(jī)物質(zhì)的母液保存時(shí)間在半年以內(nèi),但若發(fā)現(xiàn)有沉淀或霉變,應(yīng)立即需重新配制。將其他需要滅菌的物品也放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi),如裝有蒸餾水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒杯、廣口瓶(以上物品都要用牛皮紙封口),用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿、剪刀、解剖刀、鑷子、濾紙、鉛筆等。因此,可在使用前用氨進(jìn)行中和。3. 接種及培養(yǎng)(同無菌苗的建立)4. 剔除長菌嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶,其余繼續(xù)培養(yǎng)5. 觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)果:組別材料染菌率枯死率存活率二馬齒莧100%(2)所有葉柄基部沒有散開,一起消毒75%酒精15s升汞:15min盤龍參 根00100%(2)盤龍參葉綠色0100%盤龍參葉基部050%(1)50%(1)苜蓿(花+葉)0花0葉50%花:100%葉:50%波斯菊葉00100%第一周(2016/4/8)材料馬齒莧盤龍參根結(jié)果材料盤龍參葉盤龍參葉基部結(jié)果材料苜?;?葉波斯菊葉結(jié)果第二周(2016/4/15)材料苜?;?葉波斯菊葉結(jié)果開始長愈傷組織無變化愈傷組織長勢良好實(shí)驗(yàn)分析:僅有無菌苗染菌:無菌苗本身染菌,但未被發(fā)現(xiàn); 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基凝固不徹底,粘到瓶子壁上; 培養(yǎng)基pH未調(diào)好; 操作時(shí),動作不正確 無菌苗僅用無菌水洗滌,未用酒精和升汞外植體有部分枯死:滅菌過度,時(shí)間過長盤龍參組織無變化:可能由于培養(yǎng)基中植物激素不適宜,培養(yǎng)室溫度、光照等不恰當(dāng)波斯菊長愈傷組織明顯,此培養(yǎng)基較適宜波斯菊不同植物對植物激素的要求不同,所以在同一濃度下出現(xiàn)不同的結(jié)果(六) 生根實(shí)驗(yàn)(類似扦插)(2016/4/15)1. 生根培養(yǎng)基配制(方法同(二)培養(yǎng)基的配制與滅菌)生根培養(yǎng)基(1/2MS)組別6BANNA貯備液Ⅰ貯備液Ⅱ貯備液Ⅲ貯備液Ⅳ蔗糖瓊脂二0%15g5g三%四%2. 無菌苗和外植體的處理1) 無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取出無菌苗,用無菌水洗凈培養(yǎng)基,保留部分幼嫩葉片,(材料盡量幼嫩),置于無菌培養(yǎng)皿備用;2) 外植體處理a 將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈;b 將洗凈植物切去老葉,保留頂端嫩葉、嫩莖,切成長約2 cm莖段,流水沖洗30min;c 將外植體置于培養(yǎng)瓶中,用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s,然后用無菌水沖洗d 用1%升汞處理13min,然后用無菌水沖洗3~4次,放入無菌培養(yǎng)皿中,置于酒精燈火焰下方,用無菌解剖刀切去兩端后()進(jìn)行接種。4) 工作由始至終要保持一定順序性,組織或細(xì)胞在未做處理之前,勿過早暴露在空氣中。4. 接種時(shí)嚴(yán)防超凈工作臺內(nèi)著火。3. 接種及培養(yǎng)1) 用酒精擦洗工作臺和手,對接種器具進(jìn)行灼燒滅菌;2) 打開培養(yǎng)瓶,瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒,用鑷子(90%酒精浸泡并灼燒)將培養(yǎng)材料置于培養(yǎng)基上,灼燒瓶口,蓋上瓶塞。幾秒鐘后,甲醛溶液即沸騰揮發(fā)。2. 培養(yǎng)基滅菌(高壓滅菌)1) 放培養(yǎng)瓶。定容,保存在棕色玻璃瓶內(nèi)。常用的細(xì)胞分裂素包括6卞基嘌呤(6BA)、激動素(KT)、異戊烯氨基嘌呤(2ip)、玉米素(ZT)等。MS培養(yǎng)基屬于富鹽平衡培養(yǎng)基,特點(diǎn)是:無機(jī)鹽濃度較高,元素間的比例適當(dāng),離子平衡性好,具有較強(qiáng)的緩沖性,因而在培養(yǎng)的過程中可維持較好的穩(wěn)定性;營養(yǎng)豐富,在一般培養(yǎng)中無須額外加入復(fù)雜的有機(jī)成分;微量元素種類全,濃度高。2. 植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件1.
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