【正文】 tion） 2. 基因置換（ gene replacement） 3. 基因增補（ gene augmentation） 4. 基因干預(yù)（ gene interference） 基本流程 1. 目的基因的選擇和制備 2. 靶細(xì)胞 的選擇 3. 目的基因的轉(zhuǎn)移方法 4. 外源基因的表達(dá)與檢測 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics ? 靶細(xì)胞的選擇 堅固、易增殖、易轉(zhuǎn)化、組織特異性 基因轉(zhuǎn)染途徑 物理法：電擊法 化學(xué)法 ：轉(zhuǎn)染試劑 病毒法： 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics 途徑 ? 生殖細(xì)胞 ? 體細(xì)胞 直接整合 體外整合 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics 其它方案 ? RNA修復(fù) ? 剪接控制 ? RNA調(diào)控 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics 1990年美國進(jìn)行了第一例人類體細(xì)胞基因治療。 PCR： 1985年， Kary Mullis發(fā)明了 PCR 表達(dá)譜芯片 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics ? Northern blot ， 1977年檢測 RNA的表達(dá)水平 mRNA 直接跑膠，轉(zhuǎn)膜，雜交。 分帶： Q， G, R, C, [熒光原為雜交 (FISH)] 分析：數(shù)目 (單體、多體 )、結(jié)構(gòu)（易位、缺失、倒位 ‥ ) ? 二、性染色質(zhì)檢查 數(shù)目和結(jié)構(gòu) 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics 染色體檢查指征： ① 明顯生長發(fā)育異常、多發(fā)畸形、智力低下者； ② 多發(fā)性流產(chǎn)和不育的夫婦； ③ 已經(jīng)生有染色體異?；純旱姆驄D； ④ 性腺以及外生殖器發(fā)育異常者； ⑤ 原發(fā)性閉經(jīng)； ⑥ 35歲以上的高齡孕婦； ⑦ 身材高大，性情粗暴的男性； ⑧ 惡性血液病患者； ⑨ 長期接受 X線、電離輻射的人員。 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics 第一節(jié) 手術(shù)治療 ? 手術(shù)修復(fù) ? 手術(shù)去除 ? 器官移植 修補、矯正、器官移植。相信未來伴隨基因轉(zhuǎn)移、 DNA 重組、基因克隆和表達(dá)等技術(shù)的迅猛發(fā)展， 基因治療將成為人類攻克遺傳病的一種常規(guī)治療手段。 Roth 等對 6例血友病 A患者實施基因治療：取患者的皮膚成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)，通過電穿孔把攜帶有刪除 B區(qū)域的 FⅧ 基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染皮膚成纖維細(xì)胞，體外培養(yǎng)后，篩選能產(chǎn)生 F Ⅷ 的細(xì)胞進(jìn)行克隆，然后在腹腔鏡幫助下注入患者的大網(wǎng)膜。 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics 可以是 任何有核細(xì)胞 ，包括： 外周血白細(xì)胞、口腔粘膜細(xì)胞 活檢標(biāo)本、石臘包埋的組織塊 沉淀細(xì)胞（唾液、痰液、尿液） 羊水細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、 進(jìn)入母體循環(huán)的胎兒細(xì)胞 (應(yīng)用 PCR，樣本可微量化到一個細(xì)胞 ) 分子診斷的材料 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics 1. 限制性片段長度多態(tài)性分析（ RFLP） 2. 核酸雜交 (Southern) 3. 聚合酶鏈反應(yīng) (PCR) 4. DNA測序 5. 基因芯片技術(shù) 6. 其它常用的技術(shù) （ 1） PCRRFLP （ 2） PCRASO （ 3） PCRSSCP 分子診斷的基本技術(shù) 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics Southern印跡雜交原理 基因組 DNA DNA片段 雜交 結(jié)果分析 酶切 探針 Southern流程 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics Southern blotting BamHI BamHI α2 α1 α2 10 kb 14 kb probe Southern診斷示例： ?地中海貧血 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics Southern blotting αα/αα αα/α αα/ α / / 14kb 10kb 正常 缺 1 缺 2 缺 3 缺 4 Southern診斷結(jié)果分析 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) Medical Geics RFLP原理 RFLP: Restriction Fragment Length Polym