【正文】 工作積累也要包括項(xiàng)目組成員的所有信息。 撰寫要求： 清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。為使差異 cDNA文庫具有代表性，我們采取以下解決方案： ①選擇各種類型老年性白內(nèi)障晶狀體的前囊膜、取足夠大量的標(biāo)本（擬取 50例標(biāo)本）作為建庫的 mRNA的來源。 基因芯片是在 1996年被提出并開始研制的，該技術(shù)是將成千上萬的 DNA探針集中到 1厘米見方的基片上，利用堿基互補(bǔ)原理， DNA探針中的已知堿基序列與被測定的未知 DNA分子雜交后由標(biāo)記分子標(biāo)記雜交體，經(jīng)自動閱讀設(shè)備分析雜交結(jié)果，從而 對檢測基因進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析，確定未知DNA分子。 波形纖維蛋白基因（ vimentin）、雜交的 Ⅲ 型中間纖維蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出白內(nèi)障，而且有隨小鼠年齡增加白內(nèi)障加重的趨勢。 E、提出本項(xiàng)目的研究設(shè)想。 多年以來許多學(xué)者的研究結(jié)果證實(shí)晶狀體上皮細(xì)胞在老年性白內(nèi)障發(fā)生中起重要的作用，但對其中進(jìn)一步的基因調(diào)控知之甚少。 基金申請技巧講座 第四軍醫(yī)大學(xué)科研部 蘇景寬 第一部分 如何撰寫申請書 一、摘 要（限 400字） 包括：研究方法、內(nèi)容、目標(biāo)、科學(xué)意義。如果從參與老年性白內(nèi)障 晶狀體上皮細(xì)胞變化的相關(guān)基因 入手，研究基因的生物學(xué)功能，有可能抓住引起白內(nèi)障發(fā)生、發(fā)展的主要環(huán)節(jié)。 防治白內(nèi)障必須針對其發(fā)病的主要環(huán)節(jié)。晶狀體改變的共同特點(diǎn)是晶狀體纖維細(xì)胞分化受抑制 [14,15]。 由于目前尚沒有針對白內(nèi)障研究的現(xiàn)成基因芯片，根據(jù)本研究的需要，我們將篩選到的差異表達(dá)的所有基因建立 cDNA文庫，再利用基因芯片技術(shù) 制備成基因芯片 ，以此 檢測多個樣本中白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞間差異表達(dá)的基因， 從中 進(jìn)一步篩選出白內(nèi)障特異的基因 ，它們中可能有已知基因，也可能有未知基因。 ②利用改良的消減雜交技術(shù)可快速、有效地獲得差異表達(dá)的完整 cDNA片段。 撰寫方法： — 以時間順序?yàn)橹骶€設(shè)計技術(shù)路線 — 以研究內(nèi)容為主線設(shè)計技術(shù)路線 — 分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。 （ 1）有關(guān)消減雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)的工作基礎(chǔ) : 本研究所用的基因篩選技術(shù)主要是改良的消減雜交技術(shù)，此技術(shù)是我們研究組成員主要參與建立的，并利用此技術(shù)從脂多糖刺激前后的人牙髓細(xì)胞的差異表達(dá)的基因中克隆到脂多糖刺激后特異表達(dá)的基因，其中 5個為新基因，有關(guān)此技術(shù)的研究論文有： ...... （ 2）有關(guān)基因轉(zhuǎn)染方面的研究工作基礎(chǔ)： ...... （ 3）有關(guān)老年性白內(nèi)障相關(guān)基因的研究基礎(chǔ)： ...... 工作條件 實(shí)驗(yàn)室整體實(shí)力和規(guī)模（地位、課題、成果等） 實(shí)驗(yàn)室所具備的與申請項(xiàng)目相關(guān)的主要儀器設(shè)備 實(shí)驗(yàn)室所在單位具備的申請項(xiàng)目所需的實(shí)驗(yàn)條件 項(xiàng)目組人員簡歷 所有人員均需介紹（重點(diǎn)是項(xiàng)目負(fù)責(zé)人） 介紹內(nèi)容根據(jù)在項(xiàng)目中的分工有所側(cè)重 列出與申請項(xiàng)目相關(guān)的研究論文及成果 第二部分 撰寫申請書時常見問題解析 對立論依據(jù)、實(shí)驗(yàn)方案、研究基礎(chǔ)應(yīng)闡述的內(nèi)容 以及三者關(guān)系的理解 立論依據(jù) ：闡述背景和理由，回答“為什么” 實(shí)驗(yàn)方案 ：是申請書的核心，回答“怎么做” 研究基礎(chǔ) ：展示積累和實(shí)力，回答“做了啥” 一、對部分撰寫內(nèi)容及其相互關(guān)系的理解 對研究目標(biāo)的確定 國內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的具體科學(xué)問題就是項(xiàng)目的研究目標(biāo)，研究目標(biāo)具體到什么程度，要 根據(jù)研究周期、資助強(qiáng)度來確定。完成編輯后，將該文件 命名保存 ?打開申請書文件 ，光標(biāo)定位在正文中需要插入內(nèi)容的位臵 ?選擇 “插入”下拉菜單中的“文件”插入功能 ，選擇包含申請書正文內(nèi)容的文件，將其內(nèi)容全部導(dǎo)入到申請書中（不要使用剪貼板功能進(jìn)行文件內(nèi)容導(dǎo)入） 2022年面上項(xiàng)目申請資助經(jīng)費(fèi) 30萬元 /項(xiàng) ?確認(rèn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人 申報資格 ?確認(rèn)申請書 為 2022版 ?確認(rèn)提交和打印電子文檔時 已“檢查保護(hù)” ?確認(rèn)電子版的 版本號與紙質(zhì)文件 完全一致 ?確認(rèn) 申報學(xué)科選擇正確 ， 項(xiàng)目信息 填報完整無誤 ?確認(rèn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和項(xiàng)目組成員 親自簽字 形式審查要點(diǎn)： 12個確認(rèn) ?確認(rèn)參與多個項(xiàng)目的 人員身份和提法一致 ?確認(rèn)項(xiàng)目組成員 統(tǒng)計人數(shù)與填報人數(shù)一致 ?確認(rèn)正文中 流程圖及插入圖片位臵、形式正確 ?確認(rèn)電子 郵箱暢通 ，以便及時查閱郵件 ?確認(rèn)所有附件 材料完整 并已經(jīng) 盡量電子化 ?確認(rèn) A3紙雙面 套印，蓋章頁放在最后 形式審查要點(diǎn)： 12個確認(rèn) 謝 謝！ 。 解決辦法包括：通過研究思路的設(shè)計巧妙 運(yùn)用最新出現(xiàn)的研究方法 通過不同方法各自優(yōu)點(diǎn)的有機(jī)結(jié)合 在進(jìn)行可行性分析時， 重點(diǎn)回答 能夠解決。 （ 1）人晶狀體上皮細(xì)胞的獲得： 老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞取自白內(nèi)障患者手術(shù)中取出的前囊膜（晶狀體上皮細(xì)胞緊貼于前囊膜），直徑約 5mm。 （ 2）制備基因芯片： 制備用于本研究的芯片是篩選老年性白內(nèi)障相關(guān)基因的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 綜上所述，分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展為研究白內(nèi)障發(fā)生過程中的功能基因及特異調(diào)控基因提供了有利武器。 雖然體外實(shí)驗(yàn)和白內(nèi)障轉(zhuǎn)基因小鼠都提示我們一些基因的變化與白內(nèi)障有關(guān)，但是，這些變化的基因是否與老年性白內(nèi)障形成有關(guān)，目前尚缺乏進(jìn)一步的報告。 就致病的環(huán)境因素講， 氧化因子、紫外線輻射、晶狀體周圍環(huán)境中離子濃度改變及一些生長因子、細(xì)胞因子的改變均與老年性白內(nèi)障的發(fā)生有關(guān)。 國內(nèi)外現(xiàn)狀分析（與綜述的區(qū)別） 存在問題： A、低水平重復(fù)： 不了解最新進(jìn)展，對國內(nèi)外現(xiàn) 狀缺乏真正了解，提出的問題別人已解決。 作用： 畫龍點(diǎn)睛 效果： 引發(fā)評議專家的興趣，使其產(chǎn)生探個究竟的好奇心