【正文】 Ⅰ Ⅲ Ⅳ 14 毛地黃皂苷處理 滲透破碎 去垢劑溶解處理和離子交換層析 復(fù)合體 Ⅰ ~Ⅳ amp。2. ATP合成 1978 NP in Chem. 30 只添加 ADP和 Pi時， 呼吸 (O2耗 )和 ATP 合成都很小 添加 e–供體如琥珀酸 則立即顯著增加 加入 氰化物 后又隨即 被抑制 ? 電子傳遞和 ATP合成 相偶聯(lián) 1918 已加入琥珀酸的線粒體，其呼吸 和 ATP合成只有在添加 ADP和 Pi 之后才能進(jìn)行 氧化磷酸化抑制劑 殺黑星霉素 /寡 霉素可因阻斷 ATP的合成而抑制 呼吸的進(jìn)行 解偶聯(lián)劑 2,4二硝基苯酚 (DNP) 使呼吸繼續(xù)進(jìn)行但不能合成 ATP 干擾 ATP合酶使其合成受阻 ? H+不能返回基質(zhì) ? H+梯度加大導(dǎo)致 H+泵停轉(zhuǎn) ? e–流停止 Cyt (a+a3) ? O2 31 2,4二硝基苯酚 (DNP) 疏水性小分子 (弱酸 ) 具有可解離 H+ 不影響 e–傳遞和 H+泵 可攜帶 H+跨越內(nèi)膜而 破壞其跨膜梯度，進(jìn) 而抑制 ATP合成 使 e–傳遞和 ATP合成相互分離 ? 解偶聯(lián)劑 (uncoupler) Dinitrophenol 電子離域作用使負(fù)電荷相應(yīng)分散，導(dǎo)致該陰離子表現(xiàn)為弱脂溶性的 雙 (羥 )香豆素 32 通過提供 H+重返基質(zhì)的另一條途徑， 褐色脂肪組織 線粒體的 解偶聯(lián)蛋白 /產(chǎn)熱素蛋白使質(zhì)子泵保存的能量以熱量形式發(fā)散出來 ? 解 偶聯(lián)線粒體的產(chǎn)熱反應(yīng) 1930 自學(xué) 33 將線粒體懸浮于 KCl的 pH 9 緩沖液，經(jīng)由滲透作用最終使基質(zhì) 與環(huán)境達(dá)到平衡 將線粒體移至 pH 7緩沖液，后者 含有 K+載體 纈氨霉素 但不含 KCl 緩沖液的改變使線粒體內(nèi)膜兩側(cè) 形成 2 pH單位差 (內(nèi)堿外酸 ) K+在纈氨霉素載運下順其梯度外泄 導(dǎo)致跨膜電荷不平衡 (內(nèi)負(fù)外正 ) 兩者形成的電化學(xué)勢即為 質(zhì)子動勢 PMF，足以在 缺乏 可氧化底物提供 e–流的條件下使 ATP的合成進(jìn)行 ? ATP合成中 質(zhì)子梯度 作用的證實 人工模擬的電化學(xué)梯度能夠在缺乏 可氧化底物作為電子供體的條件下 驅(qū)動 ATP的合成 1920 自學(xué) 34 F1= ?3?3??? (膜周蛋白 ) Fo= ab2c10~12 (膜整合蛋白 ) 轉(zhuǎn)軸 ? ATP合酶結(jié)構(gòu) (= FoF1復(fù)合體 ) Fo是跨內(nèi)膜疏水蛋白組成的 H+孔 道， 2b2亞基 與 F1的 ?及 ?亞基 緊 密結(jié)合而使之相對固定在內(nèi)膜上 嵌合在膜內(nèi)的 c亞基 柱狀體環(huán)繞 由 F1的 ?及 ?亞基 所組成的主莖 H+經(jīng)由 Fo從 P側(cè)跨膜流向 N側(cè)時， 柱狀體和主莖即發(fā)生相對旋轉(zhuǎn)， 使 F1的 ?亞基 依次與 ?亞基 接觸 而改變其構(gòu)象 1923f 自學(xué) (cf. Fig. 1217) 35 松散構(gòu)象 開放構(gòu)象 緊密構(gòu)象 每個 ?亞基在與其相鄰的 ?亞基交界處都有一個對催化活性極為關(guān)鍵的 腺苷酸 結(jié)合位點，但在任一給定時刻均分別處于不同構(gòu)象 緊密構(gòu)象 結(jié)合有 已合成的 ATP 松散構(gòu)象 與 ADP amp。3. 氧化磷酸化調(diào)節(jié) 42 ? 電子傳遞及氧化磷酸化的常見抑制劑作用部位 二環(huán)己基碳二亞胺 寡霉素 解偶聯(lián)劑： 2,4二硝基苯酚 雙 (羥 )香豆素 氟羰氰苯腙 魚藤酮 蝶啶 阿密妥 汞制劑 地美露 噻吩甲酰三氟丙酮 萎銹靈 抗霉素 氰化物 疊氮化物 CO 自學(xué) (cf. p338, 342 amp。