【正文】 1） ? 主要是 “ 三觀一檢 ” 即：靜態(tài)觀察、動(dòng)態(tài)觀察、飲食觀察和剔除病豬個(gè)體的檢驗(yàn)。 糞便干或稀，有血或粘液，尿少而色粽黃。 ? 病羊沉郁或不安，步態(tài)不穩(wěn)，行走搖擺或跛行，前肢跪地或麻痹，離群掉隊(duì)。 ? 健馬：昂頭站立，機(jī)警敏捷，稍有音響，兩耳豎起，兩眼凝視；多站少臥，若臥地則屈肢，平靜似睡；被毛整潔光亮，皮膚無腫脹，鼻眼干凈，外陰無異常；糞便球形，中等濕度。 93 ? 病魚：離群獨(dú)游或溜邊，急躁不安、跳出水面或打轉(zhuǎn)，浮沉困難；食欲不振，發(fā)育異常；失去健魚的正常體表特征，體色發(fā)黑或出血變紅；鰓蓋張開，鰓片發(fā)紺或變白，鰓絲末端腫大或腐爛，黏液增多并有不潔感。 ? 如巴氏桿菌病、結(jié)核病等傳染病多伴有心包炎，心包漿膜潮紅、混濁、粗糙、有多量漿液性或纖維素性滲出物積聚于心包腔中。 ? 敗血癥、急性經(jīng)過的傳染病時(shí)通常伴發(fā)全身性的 急性淋巴結(jié)炎 ，表現(xiàn)為淋巴結(jié)腫大、被膜緊張、切面膨隆、濕潤多汁，呈灰紅色或淡紅色，有出血時(shí)，呈暗紅色或黑紅色，切面有凝血樣光澤。 ? 糞便可用棉拭子采取，放入裝有生理鹽水或PBS 的試管內(nèi)。 124 A 糞便樣品 ? 應(yīng)采取新排出的糞便或直接從直腸內(nèi)采得，以保持蟲體或蟲體節(jié)片及蟲卵的固有形態(tài)。有關(guān)的理化性質(zhì)主要有： ?病毒的核酸類型 ? 可采用加入脫氧核糖核酸抑制劑、用 Dnase或 RNase處理，或借助于生化技術(shù)以及染色方法，來觀察病毒感染細(xì)胞的相應(yīng)變化，確定病毒的核酸類型是DNA還是 RNA。玻片法在潔凈的載玻片或玻璃板上進(jìn)行；試管法在潔凈的試管中進(jìn)行。 152 ? 間接凝集反應(yīng)若以紅細(xì)胞（多用綿羊紅細(xì)胞）做載體，稱為間接血凝反應(yīng)； ? 若以乳膠做載體，稱為乳膠凝集反應(yīng)。 ?操作步驟 (double gel diffusion test) ?應(yīng)用： Ag或 Ab Ab純度鑒定 170 平板法 171 ? 操作步驟 :在半固體瓊脂凝集板上按備好的圖形打孔，一般由一個(gè)中心孔和 6個(gè)周邊孔組成一組，中心孔徑 45mm，周邊孔徑 3mm。 ?間接免疫熒光試驗(yàn)：可以檢測抗原又可檢測抗體。見圖 189 E E E 酶標(biāo)抗原待測抗原 E 底物 E 顯色反應(yīng) 固相 抗體 E E E 酶標(biāo)抗原 底物 顯色反應(yīng) E E E E E E 圖 競爭法測抗原示意圖 固相抗體 190 補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 一、原理 CFT是根據(jù)任何抗原抗體復(fù)合物可激活、固定補(bǔ)體的特性，用一定量的補(bǔ)體與致敏紅細(xì)胞來檢測抗原、抗體間有無特異性結(jié)合的一類實(shí)驗(yàn)。 210 ? 用免疫印跡技術(shù)可定性、定量地檢測出待檢樣品中含量很低的特定病原體的抗原成分。 216 （ 3）動(dòng)物鋪墊材料、剩余飼料和排泄物等，由貨主及其代理人在檢疫人員的監(jiān)督下，做除害處理，如熏蒸、消毒、高溫處理等。 224 ? 若發(fā)現(xiàn)動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品未按規(guī)定進(jìn)行免疫、檢疫或檢疫證明過期的，應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)注、補(bǔ)檢或重檢。 B、運(yùn)出縣境的動(dòng)物產(chǎn)品，出具 《 出縣境動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明 》 。 ? 封存 。 207 （ 2）快速檢測其他疫病病原體 ? 致病性大腸桿菌毒素基因、牛胎兒彎曲桿菌、牛分支桿菌、炭疽桿菌芽孢、鉤端螺旋體、牛巴貝斯蟲和弓形蟲等。 186 酶標(biāo)抗體 固相抗原 待測抗體 E E E 圖 ELISA間接法示意圖 187 2． 雙抗體夾心法 此法常用于檢測抗原。 179 ? 根據(jù)抗原抗體結(jié)合的特異性和標(biāo)記分子的敏感性而建立的診斷檢測技術(shù)，稱為標(biāo)記抗體技術(shù)。 166 ? 液體內(nèi)沉淀試驗(yàn) 1）環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 2）絮狀沉淀試驗(yàn) ? 凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn) 3）單向擴(kuò)散試驗(yàn) 4）雙向擴(kuò)散試驗(yàn) ? 免疫電泳技術(shù) 5）免疫電泳 6）對流免疫電泳 167 A、環(huán)狀沉淀反應(yīng) ? 反應(yīng)在小試管中進(jìn)行，當(dāng)沉淀素血清與沉淀原發(fā)生特異性反應(yīng)時(shí)，在兩液面接觸出現(xiàn)致密、清晰明顯的白環(huán)，即環(huán)狀沉淀反應(yīng)陽性。 ? 通常以能與一定量的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（ ++）的血清最高稀釋度為血清凝集效價(jià)。因此，可利用抗原抗體已知的任何一方去檢測未知的另一方，以達(dá)到檢疫目的。 ? 用于細(xì)菌鑒別的血清學(xué)方法有凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、毒素中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。 ? 根據(jù)病料的性狀及檢疫的要求不同，應(yīng)做暫時(shí)的 冷藏 、 冷凍 或 其他處理 。 116 ② 內(nèi)臟組織 ? 應(yīng)在尸體解剖后立即采取。 106 ?胃腸 ： 首先觀察胃腸的膨滿狀態(tài)，漿膜面的變化，然后觀察胃內(nèi)容物與粘膜面的變化，內(nèi)容物的觀察主要是觀察內(nèi)容物的量、稠度、氣味、色調(diào)、性質(zhì)、異物、寄生蟲等，粘膜的觀察要注意是否有腫脹、發(fā)炎、出血、潰瘍、肥厚、水腫等。 99 （ 2） 體腔的剖開 ? 打開胸、腹腔后，應(yīng)注意觀察腔內(nèi)有無氣體排出和氣味；腔內(nèi)體液的多少、顏色、透明度；有無漿液性、粘液性、化膿性、纖維素性、血性滲出物、血液和血塊等；漿膜面有無出血點(diǎn)或出血斑等。 90 ③ 犬的臨診檢查要點(diǎn) ? 健犬：站立時(shí)，顯得自然、挺立；撲食物或玩具時(shí)，顯得很輕靈；被毛完整有光澤，摸起來有潤滑和舒服感；眼睛明亮、有神，對外界事物反應(yīng)靈敏，眼睛滴溜溜轉(zhuǎn)，很有靈氣；無眼屎，不流淚；唇部為粉紅色，鼻子摸起來潮濕、潤滑，有發(fā)涼的感覺。 83 禽的臨床檢疫要點(diǎn)（ 3） ? 個(gè)體檢查：重點(diǎn)是精神狀態(tài)、運(yùn)動(dòng)和姿勢、表被狀態(tài)（羽毛、冠髯、鼻、眼等）、嗉囊、飲欲、食欲、糞便等。 ? 主要以 口蹄疫、炭疽、牛肺疫、布魯氏菌病、結(jié)核病、副結(jié)核病、藍(lán)舌病、地方性白血病、牛傳染性鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉 黏膜病、牛肝片吸蟲病、錐蟲病、泰勒蟲病為檢疫對象。 粗糙，被毛臟亂 眼 明亮有神 發(fā)紅，或有眼屎。 62 （八）呼吸數(shù)測定 ? 宜在安靜狀態(tài)下測定。 57 ? 臨床上根據(jù)發(fā)熱的程度，可分為： ?體溫升高 1℃ ，稱為 微熱 ，見于鼻卡他、口腔炎、胃卡他等局限性炎癥和輕微的病程時(shí)。觸診按檢查的部位可分為： 體表觸診 ? 通過觸診，檢查患病動(dòng)物體表狀態(tài)。 ? 患病動(dòng)物的被毛和皮膚常發(fā)生不同的變化而提示某些疫病，在慢性消耗性疫?。ㄈ?結(jié)核病 ）或內(nèi)寄生蟲時(shí)，動(dòng)物往往被毛粗亂無光澤，脆而易斷、易脫毛； 44 ? 患 疥螨 和 濕疹 的動(dòng)物，患部脫毛，伴有皮膚增厚、變硬、擦傷和啃咬傷； ? 豬瘟 病豬在四肢、腹部及全身各部皮膚有指壓不褪色的小點(diǎn)狀出血，而 豬丹毒 病豬則呈現(xiàn)指壓褪色的菱形或多角形紅斑。 33 ： 脈搏，耳、皮溫度，淋巴結(jié)大小、形狀、硬度和有無腫脹，皮膚有無結(jié)節(jié)和出血點(diǎn)。 ? ： 指對群體檢查中發(fā)現(xiàn)的異常個(gè)體或抽樣檢查的個(gè)體進(jìn)行的系統(tǒng)的臨診檢查。 16 3 流行病學(xué)調(diào)查分析的方法 （ 1） 詢問調(diào)查 ：是流行病學(xué)調(diào)查中一個(gè)最基本、最主要的方法。 5 某些情況下的現(xiàn)場臨診檢疫內(nèi)容 （ 1）疫情調(diào)查 （ 2）病理剖檢 （ 3）實(shí)驗(yàn)室檢查 （ 4）消毒和病死動(dòng)物處理 6 （二）隔離檢疫 隔離檢疫的概念 ? 隔離檢疫是指將動(dòng)物放在一定條件的隔離場或隔離圈（列車箱、船艙）進(jìn)行的檢疫方式。動(dòng)物產(chǎn)品、供屠宰或育肥的動(dòng)物提前 3天報(bào)檢；種用、乳用或役用動(dòng)物提前 15天報(bào)檢。 ? 發(fā)病率能較完全的反映出疫病的流行情況，但還不能說明整個(gè)流行過程，因?yàn)槌Ｓ性S多動(dòng)物成隱性感染，而同時(shí)又是傳染源。 26 群體檢查 方法 ? 檢查方法 靜態(tài)檢查 動(dòng)態(tài)檢查 飲食狀態(tài)檢查 27 群體檢查 方法（ 1） ? 靜態(tài)檢查 ： 深入圈舍、車、船檢查動(dòng)物自然靜態(tài)下的表現(xiàn)，精神、外貌、營養(yǎng)、臥姿、呼吸、反芻狀態(tài)、 髯 、羽等情況，注意有無昏睡、咳嗽、氣喘、呻吟、流涎等反?，F(xiàn)象。 肉眼視診 ? 視診時(shí)一般先不要靠近動(dòng)物，也不宜進(jìn)行保定，應(yīng)盡量使動(dòng)物取自然的姿態(tài)。 ? 臨診時(shí)主要檢查眼結(jié)膜。 ? 叩診主要用于檢查含氣器官的含氣量及病變的物理狀態(tài)，以及對心臟、肝臟、脾臟等實(shí)質(zhì)器官進(jìn)行叩診。提示某些嚴(yán)重的急性傳染病，如急性馬傳染性貧血、傳染性胸膜肺炎、豬丹毒、炭疽、膿毒敗血癥以及日射病與熱射病等。 65 豬的臨床檢疫要點(diǎn)（ 2） 群體檢查 ? 動(dòng) （ 動(dòng)態(tài)檢查 ） ：自然活動(dòng)狀態(tài) ， 如起立 、運(yùn)動(dòng) 、 排泄 、 精神等有無異常 。 體溫 3840℃ 。 79 羊的臨床檢疫要點(diǎn)（ 3） ? 飲食 ：飼喂、飲水互相爭搶，放牧動(dòng)作輕快，邊走邊吃。 ? 病馬：睡臥不安，閉眼橫臥，起臥困難；站立不穩(wěn)，低頭耷耳，兩眼無神，姿態(tài)僵硬，精神委頓，對外界反應(yīng)遲鈍或無反應(yīng)；被毛粗亂無光，皮屑積聚，皮膚有局部腫脹，眼鼻流出黏性或膿性分泌物，外陰污穢；糞便干硬或拉稀，混有惡臭膿血；呼吸喘氣，噯氣。有時(shí)，可在體表或鰓內(nèi)等處發(fā)現(xiàn)寄生蟲。 102 ?肺臟 ： 首先觀察肺臟表面的色彩、性狀，表面是否有纖維素性或化膿性附著物，或塌陷的地方（無氣肺），再觸摸肺的各部，以查其有無結(jié)節(jié)或硬塊，必要時(shí)切下小塊肺臟作“浮沉試驗(yàn)”。 109 ? 慢性淋巴結(jié)炎 ：淋巴結(jié)體積增大，質(zhì)地變硬。 118 ④ 血液 ? 無菌采取抗凝血，供病原培養(yǎng)、抗體檢測和血液檢查之用。 ? 根據(jù)檢查方法的不同，取樣量差別較大。 ?病毒顆粒的大小 ? 病毒的大小可以通過過濾和電子顯微鏡的方法來測定。 140 ? 玻片法是一種定性試驗(yàn)方法。 153 ? 間接凝集反應(yīng)若用已知抗原吸附在載體上鑒定抗體，稱為 正向 間接凝集反應(yīng)；若用已知抗體吸附在載體上來鑒定抗原，稱為 反向 間接凝集試驗(yàn)。中心孔滴加已知抗原懸液，周圍孔滴加標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和被檢血清。 181 B、免疫酶技術(shù) 是把抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)與酶的高效催化作用原 理有機(jī)地結(jié)合起來，即把具有催化活性的酶類通過化 學(xué)的方法和抗體 (或抗原 )結(jié)合起來成為酶標(biāo)記物。 參與本實(shí)驗(yàn)的成分包括 ①已知抗原（或抗體） ②待檢抗體（或抗原） ③ SRBC ④ SRBC相應(yīng)的溶血素 ⑤補(bǔ)體 191 （ Ag+Ab） +補(bǔ)體 雙方不相對應(yīng)（或缺少一方）形不成 IC 不能激活并固定補(bǔ)體 加入 SRBC和溶血素 出現(xiàn)溶血 雙方相對應(yīng)形成 IC 激活并固定補(bǔ)體 加入 SRBC和溶血素 不出現(xiàn)溶血 補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 192 中和試驗(yàn) 原理：特異的抗病毒免疫血清（中和抗體）和病毒作用后，使病毒失去感染易感動(dòng)物、雞胚、細(xì)胞的能力。 ? 對于一些能感染細(xì)胞而細(xì)胞病變不易觀察的病原體的檢測也很有用。 （ 4）對入境動(dòng)物做群體臨診觀察，發(fā)現(xiàn)疑似感染傳染病動(dòng)物時(shí)，在貨主或者押運(yùn)人員的配合下查明情況，立即處理。 （ 1）補(bǔ)注：對未按規(guī)定預(yù)防接種或已接種但超過免疫有效期的動(dòng)物進(jìn)行的預(yù)防接種。 222 2）合格動(dòng)物產(chǎn)品 A、縣境內(nèi)交易遷移的動(dòng)物產(chǎn)品，出具 《 動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明 》 。對旅客攜帶的檢疫物，經(jīng)現(xiàn)場檢疫認(rèn)為需要除害或銷毀的，簽發(fā) 《 出入境人員攜帶物留驗(yàn) /處理憑證 》 。 204 PCR原理示意圖 205 PCR產(chǎn)物凝膠電泳檢測 206 （ 1）快速檢測病毒性疫病的病原 ? 用 PCR技術(shù)檢測的動(dòng)物病毒性疫病的病原有藍(lán)舌病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹瀉病毒、牛白血病病毒、馬鼻肺炎病毒、惡性卡他熱病毒、偽狂犬病病毒、狂犬病病毒、非洲豬瘟病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞傳染性喉氣管炎病毒、馬傳染性肺炎病毒、馬立克氏病毒、牛冠狀病毒、輪狀病毒、水貂阿留申病病毒、山羊關(guān)節(jié)炎 腦炎病毒、梅迪 /維斯納病毒、豬細(xì)小病毒、魚傳染性造血器官壞死病病毒等。其原理見圖。而有些物質(zhì)如酶、熒光素、放射性核素、化學(xué)發(fā)光劑等，即便在微量或超微量時(shí)也能用特殊的方法將其檢測出來。 （二） HI試驗(yàn)的操作步驟： 結(jié)果判定 (讀出血凝抑制價(jià) ) 165