【正文】 。顯然，區(qū)域擴(kuò)寬對分離是不利的，但又是不可避免的。每一塊塔板的高度用 H表示，稱為塔板高度，簡稱板高。/16： s?塔板理論是一種半經(jīng)驗性理論。Deemter（ 范第姆特）等在研究氣液色譜時，提出了色譜過程動力學(xué)理論 —— 速率理論 。u70 uDm式中： γ—— 彎曲因子，填充柱 γ 1 空心柱 γ = 1 Dm—— 組分在流動相中的擴(kuò)散系數(shù)由于組分在液相中的擴(kuò)散系數(shù)只有氣體中的1/105，因此在液相色譜中 B可以忽略。83對于填充柱，氣相傳質(zhì)阻力系數(shù) Cg為：式中 k為容量因子 。99粒度越細(xì)，板高越小，并且受線速度影響亦小。 103 R值越大，表明相鄰兩組分分離越好。16nαR它對 LC的分離能起到立竿見影的效果。u最佳 和 H最小 ,要對速率方程微分 ,即(1)αis和 t?R(Z)） /139二、定量分析 峰高乘 h（ =1471.149150 相對校正因子值只與被測物和標(biāo)準(zhǔn)物以及檢測器的類型有關(guān)，而與操作條件無關(guān)。Pi式中 Pi某些不需要定量的組分也必須測出其峰面積及 f?ims=/因為 ms=/)2==3445n 峰底寬度分別為 min和 min， 計算：（ 1）柱的分離度；（ 2）柱的平均塔板數(shù)；（ 3）達(dá)到 。 156 內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物 ，它 必須符合下列條件 ： （ 1） 內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是試樣中原來不存在的純物質(zhì)，性質(zhì)與被測物相近，能完全溶解于樣品中，但不能與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。100%152（三）定量計算方法1.則 fi?ms） ?（ As145 校正因子分為絕對校正因子和相對校正因子。AAi為被測組分 i的峰面積； 138 保留指數(shù)的物理意義在于 ：它是與被測物質(zhì)具有相同調(diào)整保留時間的假想的 正構(gòu)烷烴的碳數(shù)乘以 100。+（ lg 被測物的保留指數(shù)值可用內(nèi)插法計算。130（二）相對保留值法圖中橫坐標(biāo) l為記錄筆走紙距離。 5時，可在較短的分析時間，取得良好的分離度。/一般通過改變固定相和流動相的性質(zhì)和組成或降低柱溫，可有效增大 α值。1112.n/Y。tR1)這就是為什么在 HPLC中采用細(xì)顆粒作固定相的根據(jù)。分子擴(kuò)散項和傳質(zhì)阻力項對板高的貢獻(xiàn)252。82 氣相傳質(zhì)過程是指試樣組分從氣相移動到固定相表面的過程 。=縱向分子擴(kuò)散是由濃度梯度造成的。752.AY)2tR?(tR63在實際工作中，由公式 LA BA BKA/ =)它不僅隨柱溫、柱壓變化而變化，而且還與流動相及固定相的體積有關(guān)。但是兩峰間雖有一定距離，如果每個峰都很寬，以致彼此重疊，還是不能分開。34 ?即 峰寬的一半。tR1180。Fco28信號進(jìn)樣tR25 tR180。頂替法的流出曲線如下圖14 此法適于制備純物質(zhì)或濃縮分離某一組分；其 缺點是經(jīng)一次使用后，柱子就被樣品或頂替劑飽和 ，必須更換柱子或除去被柱子吸附的物質(zhì)后，才能再使用。最近，又有一種新分離技術(shù)，利用不同組分與固定相（固定化分子）的高專屬性親和力進(jìn)行分離的技術(shù)稱為 親和色譜法 ，常用于蛋白質(zhì)的分離。7216。80年代以后 出現(xiàn)毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電動色譜等一系列新的色譜分析方法。4 n在色譜法中，將填入玻璃管或不銹鋼管內(nèi)靜止不動的一相（固體或液體）稱為 固定相 ；n自上而下運(yùn)動的一相（一般是氣體或液體）稱為 流動相 ；n裝有固定相的管子（玻璃管或不銹鋼管）稱為 色譜柱 。液體為流動相的色譜稱 液相色譜（ LC） 同理液相色譜亦可分為 液固色譜（ LSC） 和液液色譜（ LLC） 。103. 按固定相的外型分類216。A B15167。 某組分的保留時間扣除死時間后，稱為該組分的 調(diào)整保留時間 ， 即 tR180。保留時間是色譜法定性的基本依據(jù)， 但同一組分的保留時間常受到流動相流速的影響，因此色譜工作者有時用保留體積來表示保留值。31 r2,1 某組分 2的調(diào)整保留值與組分 1的調(diào)整保留值之比，稱為相對保留值。= Y1/2即峰高一半處對應(yīng)的峰寬。這些峰的寬或窄是由組分在色譜柱中傳質(zhì)和擴(kuò)散行為決定的，即與色譜過程的動力學(xué)性質(zhì)有關(guān)。/ 43 k = ns / nm =CsVS / CmVm 式中 cs,cm分別為組分在固定相和流動相的濃度； Vm為柱中流動相的體積，近似等于死體積。/kVS/VMKt?Rn//因為在相同的色譜條件下，對不同的物質(zhì)計算的塔板數(shù)不一樣，因此，在說明柱效時，除注明色譜條件外，還應(yīng)指出用什么物質(zhì)進(jìn)行測量。但是 ，色譜過程不僅受熱力學(xué)因素的影響， 而且還與分子的擴(kuò)散、傳質(zhì)等動力學(xué)因素有關(guān)， 因此塔板理論只能定性地給出板高的概念，卻不能解釋板高受哪些因素影響；也不能說明為什么在不同的流速下，可以測得不同的理論塔板數(shù)，因而限制了它的應(yīng)用。+分子擴(kuò)散項 組分從柱入口加入，其濃度分布的構(gòu)型呈 “塞子 ”狀。2這一過程中試樣組分將在兩相間進(jìn)行質(zhì)量交換，即進(jìn)行濃度分配。較低線速時， 分子擴(kuò)散項起主要作用；較高線速時， 傳質(zhì)阻力項起主要作用 ；其中流動相傳質(zhì)阻力項對板高的貢獻(xiàn)幾乎是一個定值。當(dāng)然，固定相顆粒愈細(xì)，柱流速愈慢。/通常用 R=分離的標(biāo)志。 由 Y/分離度與選擇因子的關(guān)系112如果設(shè) ，4看出：當(dāng) k10時，隨容量因子增大，分離度的增長是微乎其微的。 1161175．基本色譜分離方程式的應(yīng)用 若欲得到 R=，有效塔板數(shù)應(yīng)為多少？色譜往要加到多長？119解： 先求出組分 2對組分 1的相對保留值 r2， 1（ 即α值）120求有效塔板數(shù) neff∵ Y1/2=Y/ w1=27/(3600/16)1/2= mm (w1)1/2＝ ＝ mmw2=30/(3600/16)1/2= mm (w2)1/2＝ ＝ mmR＝ 2(3027)/(+2)＝ 6/＝ 123 [例 183] 已知一色譜柱在某溫度下的速率方程的 A=。＝ 124 [例 184]它僅隨固定液及柱溫變化而變化，與其它操作條件無關(guān)。135 例如，若確定物質(zhì) i在某固定液 X上的 保留指數(shù) IiXt?R(i) 保留指數(shù)僅與固定相的性質(zhì)、柱溫有關(guān)，與其它實驗條件無關(guān)。fi為被測組分 i的校正因子。對稱峰的面積 ?= 一方面 由于精確測量絕對進(jìn)樣量困難；146 另一方 面峰面積與色譜條件有關(guān)，要保持測定 fi值時的色譜條件相同，既不可能又不方便。/Ai的數(shù)值與質(zhì)量為 mi的標(biāo) 準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積相等。歸一化法 把所有出峰組分的含量之和按 100% 計的定量方法稱為歸一化法。=（ 2） 內(nèi)標(biāo)物的峰位置應(yīng)盡量靠近被測組分的峰，或位于幾個被測物之峰的中間并與這些色譜峰完全分離。161解 =(60)2(R157內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點：（ 1） Aif?i%=但此法在實際工作中仍有一些限制，比如，樣品的所有組分必須全部流出，且出峰。通常所指的校正因子都是相對校正因子。這就是歸一法求算各組分百分含量的基礎(chǔ) 。）148為此提出相對校正因子的概念來解決色譜定量分析中的計算問題。fi??Y1/2142（ 2） 不 對稱形峰面積的測量 ——141v（ 一）峰面積測量方法只要柱溫與固定相相同，就可應(yīng)用文獻(xiàn)值進(jìn)行鑒定，而不必用純物質(zhì)相對照。t?R(Z+1)lg先選取兩個 正構(gòu)烷烴作為基準(zhǔn)物質(zhì)， 其中一個的碳數(shù)為 Z，另一個為Z+1，它們的調(diào)整保留時間分別為 t?R(Z)(5)已知物質(zhì) A和 B在一個 保留時間分別為 .不被保留組分通過該柱的時間為 .峰寬為 ,計算 : C=, 求最佳線速度 u和最小塔板高 H. 解 : 欲求 121而對于 LC， 只要改變流動相的組成，就能有效地控制 k值。α） ?（ ?=+Y2101 固定相粒度大小對板高的影響 102 第四節(jié) 分離度 分離度 R是一個綜合性指標(biāo)。在高線速度時， 固定相傳質(zhì)阻力項成為影響板高的主要因素 ，隨著速度增高，板高值越來越大，柱效急劇下降。C＝ Cm＋ Cs這樣使得試樣在兩相界面上不能瞬間達(dá)到分配平衡，引起滯后現(xiàn)象，從而使色譜峰變寬。