【正文】 物素化引物 PCR擴增 探針 親和固相介質(zhì) 檢測探針信號 7）原位ＰＣＲ 原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ In Still PCR， Is－PCR）是由 Haase等于 1990年首創(chuàng)。酶量過少影響反應(yīng)產(chǎn)量。 ? 但由于測序和引物合成的困難 ， 以及 70年代基因工程技術(shù)的發(fā)明使克隆基因成為可能 ， 所以 ， Khorana的設(shè)想被人們遺忘了 …… PCR技術(shù)簡史 ? DNA的復(fù)制 ? 核酸體外擴增的設(shè)想 ? 聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明 ? 1985年 ， 美國 PECetus公司的 Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng) （ PCR） ? 基本原理是在試管中模擬細胞內(nèi)的 DNA復(fù)制 ? 最初采用 Ecoli DNA聚合酶進行 PCR， 由于該酶不耐熱 ， 使這一過程耗時 ， 費力 ， 且易出錯 ? 耐熱 DNA聚合酶的應(yīng)用使得 PCR能高效率的進行 ，隨后 PECetus公司推出了第一臺 PCR自動化熱循環(huán)儀 ? 1993年 ， Mullis等因此項技術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎 Kary B. Mullis The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction 1989年美國 《 Science》 雜志列 PCR 為十余項重大科學(xué)發(fā)明之首 ,比喻 1989年為 PCR爆炸年 ,Mullis榮獲 1993年度諾貝爾化學(xué)獎。 ?？蛇M行細胞內(nèi)定位。 電泳 引物 4） LPPCR（ Labelled primers) 利用同位素、熒光素等對ＰＣＲ引物進行標(biāo)記，用以直觀地檢測目的基因。 （ 3） Taq DNA聚合酶（ thermus aquaticus) U/50 ?l 酶量增加使反應(yīng)特異性下降 。 生物樣品 DNA片段 基因診斷 基因治療 基因工程產(chǎn)品 法醫(yī)學(xué)檢測 人類學(xué)研究 …… 基因組 DNA 獲取特定 DNA片段 擴增特定DNA片段 DNA聚合酶 引物 引物 M13噬菌體 Sanger的測序技術(shù) 引物 DNA聚合酶 引物 引物 Mullis的構(gòu)思 DNA聚合酶 DNA聚合酶 特定 DNA片段 94℃ 變性 5065℃ 退火 XX℃ 延伸 94℃ 55℃ 37℃ Taq DNA聚合酶（ thermus aquaticus) 酶活性(%) 溫度 (℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 72℃ 94℃ 55℃ PCR循環(huán) PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點 標(biāo)準(zhǔn)的 PCR反應(yīng)體系 4種 dNTP混合物 各 200umol/L 引物 各