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正文內(nèi)容

蛋白質(zhì)和氨基酸的測(cè)定(1)(留存版)

  

【正文】 程控制均具有極其重要的意義 。 3. 吸收與滴定 1用 4%硼酸吸收,用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,指示劑用混合指示劑(甲基紅 — 溴甲基酚綠混合指示劑)國(guó)標(biāo)用亞甲基蘭 +甲基紅。 ⑨ 蒸餾前若加堿量不足,消化液呈藍(lán)色不生成氫氧化銅沉淀,此時(shí)需再增加氫氧化鈉用量。樣品不用消化 2. 方法特點(diǎn)及應(yīng)用范圍 本法靈敏度較低 , 但操作簡(jiǎn)單快速 , 故在生物化學(xué)領(lǐng)域中測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)常用此法 。它的應(yīng)用范圍比紙上層析更廣泛,常用來分析氨基酸、農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素等。 ④ 展開:點(diǎn)樣完了 , 放入密閉容器中 ( 展開槽 ) , 傾斜一定角度 10~ 30176。 , 定容 , 離心 , 比色 。 。再以點(diǎn)樣距扳子寬窄可點(diǎn)幾個(gè)點(diǎn)同時(shí) 展開,點(diǎn)與點(diǎn)之間間隔 1~ 2cm。 二者之差可計(jì)算氨基酸含量 (二)茚三酮的比色法 原理:氨基酸在一定條件下與茚三酮起反應(yīng),生成藍(lán)紫色化合物,可比色定量。 雙縮脲能和硫酸銅的堿性溶液生成紫色絡(luò)和物 , 這種反應(yīng)叫雙縮脲反應(yīng) 。 ⑥ 若取樣量較大,如干試樣超過 5 g 可按每克試樣 5 m1的比例增加硫酸用量。還可以加氧化汞、汞(均有毒,價(jià)格貴)、硒粉、二氧化鈦。 有多種氨基酸分析儀。 某些蛋白質(zhì)中還含有微量的 P、 Cu、 Fe、 I 等 。 ?一些蛋白質(zhì)的含氮量 一般為 15%~ %,有的上下浮動(dòng) 可以測(cè)出總氮 N 一、 凱氏定氮法 由 Kieldhl于 1833年提出,現(xiàn)發(fā)展為常量、微量、自動(dòng)定氮儀法,半微量法及改良凱氏法。 指示劑 紅色 綠色 紅色 (酸) (堿) (酸) 2 用過量的 H2SO4 或 HCl 標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收,再用 NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定過剩的酸液,用甲基紅指示劑。 氫氧化銅在 70~ 90℃ 時(shí)發(fā)黑。 本法亦適用于豆類 、 油料 、 米谷等作物種子及肉類等樣品測(cè)定 。 (一)原理: 取一定量經(jīng)水解的樣品溶液,滴在制好的薄層板上,在溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行雙向上行法展開, 樣品各組分在薄層板上經(jīng)過多次的被吸附、解吸、交換等作用,同一物質(zhì)具有相同的 Rf值,不同成分則有不同的 Rf值,因而各種混合物可達(dá)到彼此被分離的目的。 , 下端浸入展開劑 1cm, 千萬別讓溶劑浸過了樣點(diǎn) 。 : 例:日本島津 CS—— 910 型雙波長(zhǎng)薄 層色譜掃描儀 介紹離心薄層色譜儀: 1. LBG — 1型離心薄層色譜儀 北京產(chǎn) 2. 7924型離心薄層色譜儀 美國(guó) Harrison 公司研制 3. CLC — 5型離心制備液體色譜儀(日本日立公司,帶紫外檢測(cè)器、記錄器和自動(dòng)收集器,制備量可達(dá) 10g 。 ,在紫外光下觀察斑點(diǎn)。 (三)操作方法: ① 薄層板制備 ② 樣品液制備 ③ 點(diǎn)樣:距薄板底端 2cm處,用針畫一標(biāo)記作為 原點(diǎn)。
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