【正文】 總之，這四年的大學生活對我的一生將有著重要且積極的影響，是我人生成才的基石。所以整個試驗過程中雖然很辛苦，但也十分快樂。蛋白提取率會隨著反應時間加長而不斷 提高， 但是需要考慮到成本和方便操作等方面的問題以此來選取最適水平。同時，高溫環(huán) 境也會使大量的酶失活 ??13 。 黃酒糟蛋白提取工藝研究 9 3 結果與分析 蛋白質的標準曲線 圖 1 牛血清蛋白的標準曲線 根據(jù)數(shù)據(jù)得到牛血清蛋白標準溶 液和吸光度之間的一元線性回歸方程為： y= 其中 x:280nm處的吸光值； y:牛血清蛋白的濃度；經(jīng)過計算，相關系數(shù)為： R2 =，回歸極顯著。用 紫外分光光度法 測定 上清液的 吸光值， 進而算得 蛋白質含量 ，最后計算蛋白提取率 。 將得到的標準牛血清蛋白標準溶液精密吸取 ， ， ， ， ， ， 4mL刻度試管中，然后向每個刻度試管中各加入蒸餾水 ， ， ， ， ， 6min，在 280nm 處測吸光度。按照 28u/g的酶量添加纖維素酶，水浴振蕩 30min 結束 ； 在反應過程中不斷加堿，維持反應體系 pH 在設定值的 177。 在堿性環(huán)境下 (pH 為 9~12)催化蛋白質，主要生成物質為肽類及氨基酸。 但是目前技術 還 不成熟， 尚未 將其充分轉化為 更合理更有 價值的資源，大量的黃酒糟僅作低價飼料，甚至 可能會 霉爛污染環(huán)境。 彭濤利用黃酒糟通過連續(xù)發(fā)酵和 深層發(fā)酵來 生產(chǎn)食醋 ??5 。 黃酒糟的主要成分 酒糟的成分和原料大致相似，不過百分比有些許不同。 黃酒糟 的來源 ........................................................................... 錯誤 !未定義書簽。 黃酒糟的主要成分 ................................................................... 錯誤 !未定義書簽。因為從原料到酒精經(jīng)過了一系列的糖化、發(fā)酵等生物化學的復雜變化，而產(chǎn)生了一些新的物質成分。谷海先等 人研究 生產(chǎn)特鮮醬油的技術 時 應用 了 復合風味蛋白酶及麩曲酸性蛋白酶、麩曲糖化酶水解黃酒糟 ??6 。 黃酒糟營養(yǎng)價值豐富，研究其蛋白提取工藝不但能夠降低黃酒企業(yè)的生產(chǎn)成本，還能 有效 地 減少環(huán)境污染 ??12 。其最適溫度范圍為 40~55℃ ，添加量一般為 500~2500u/g。 之內(nèi)。以蛋白質濃度和對應的吸光值為對應坐標，繪制標準曲線。 （ 4） 反應時間對蛋白提取率的影響 準確稱取 經(jīng)處理過的黃 酒糟 ，按照 1:8 的料水比加水， 于 50℃ 的水浴鍋內(nèi)保溫，而后調整 pH 值到 11(采用 1mol/L的 NaOH 調整 )。故可以用該方法測量蛋白質的含量。因此，正交試驗中反應時間定為 3h。 在設定的反應溫度和 pH 范圍內(nèi)，蛋白的提取率 在反應時間 2h時最高 ， 在此條件下其蛋白提取率為 ％。 還有許多 不知名字的 人，也許他們只是我生命中 的 匆匆過客，但他們對我的支持和幫助依然在我 的心 中留 下 了深刻的印象。 再 此感謝 我們的學校 南陽理工，感謝所有可敬 可親的老師們 ，感謝我們班所有的同學，感謝所有信任我、幫助我的人，感謝你們，你們給我的 情 誼我會永遠珍惜 ! 五 月維夏，山有嘉卉。通過自己的學習與思考，我 也 基本形成了一套自己對人生的看法 和 追求。 同時 ， 我也十分感謝和我一起做試驗的幾個同學，試驗過程中遇到了許多不懂的，我們相互討論也克服了不少困難。 對于不顯著性因素反應溫度和反應時間來說，可以 綜合單因素及正交 試驗 的結果??13 ，堿性內(nèi)切蛋白酶的最適溫度 應該是 在 50℃ 左右。這是因為蛋白質水解是可逆反應， 積累的 這些物質會對酶解反應有一定的抑制作用。 總蛋白含量 （ %） = 氮含量 100% 蛋白質提取率（ %） = %1 0 0 ?原料中總蛋白質質量 加入的蛋白酶質量提取液中總蛋白質量 黃酒糟蛋白提取工藝研究 8 正交試驗設計 鑒于各因素 之間 的相互影響 ，在單因素試驗的基礎上，選取加酶量、 pH、反應溫度、反應時間 、料液比五個因素進行正交試驗，以蛋白質提取率為指標，并對結果進行方差分析，以獲得最佳提取工藝條件。反應結束后在沸水浴中加熱 15min進行酶滅活處理， 然后 調整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 ??3 。 準確稱取 25mg牛血清蛋白粉末， 于 小燒杯中 溶解 ，搖勻后加入到 25mL的容量瓶中，配置成 1mg/mL 的牛血清蛋白標準溶液 。 準確稱取 黃 酒糟濕基，按照 1:8 的 比例加水，在 50℃ 水浴鍋內(nèi)保溫，待 錐形瓶內(nèi)料液 溫度達 到 50℃ 后，調整 pH 值到 5(采用 1mol/L的 NaOH 來 調整 )。它能水解 蛋白質分子 肽鏈生成多肽或氨基酸，具有較強的分解蛋白質的能力 。 另外 它能改善口感、增加風味，所以它作為一種較為理想的 風味物質和 營養(yǎng)強化劑被廣泛地應用于飲料及 其他 相關 食品 行業(yè) ??11 。下面我將針對國內(nèi)外學者對黃酒糟的研究開發(fā)進行簡單論述。另外，發(fā)酵結束后，酵母細胞大量沉淀下來，經(jīng)壓榨殘留在酒糟中，絕大多數(shù) 營養(yǎng)物質也保存下來， 所以黃酒糟 的研究利用將會有十分廣闊的應用前景 ??3 。 extraction technology 黃酒糟蛋白提取工藝研究 I 目 錄 1 緒論 ......................................................................................................................................... I 黃酒糟簡介 ........................................................................................ 錯誤 !未定義書簽。 黃酒糟的研究現(xiàn)狀 .................................................................... 錯誤 !未定義書簽。一般來說 黃酒糟中的主要成分有乙醇、淀粉、糖、纖 維素、糊精、灰分、豐富的蛋白質和一些風味物質（揮發(fā) 酸 和不揮發(fā) 酸 等）等 ??4 。 楊國軍 生產(chǎn) “ 香糟鹵 ” 時 向黃酒糟中添加天然植物混合香辛料等調味成分 ??7 。 因此研究黃酒糟蛋白質的最佳 提取 工藝對其綜合利用具有重要的意義 。堿性 內(nèi)切 蛋白酶水解酒糟，因其適合的作用條件是在堿性環(huán)境下，這更有利于堿溶性蛋白谷蛋白等的溶解 。反應結束后在沸水浴中加熱 15min 進行酶滅活處理。 單因素試驗 （ 1） 加酶量對蛋白提取率的影響 準確稱取 經(jīng)處理過的黃 酒糟 ，按照 1:8 的 料水比 加水， 于 50℃ 水浴鍋 中 保溫，而后調整 pH值到 11(采用 1mol/L的 NaOH調整 )。按照 20xxu/g的加酶量添加堿性內(nèi)切 蛋白酶，水浴振蕩 1h、 2h、 3h、 4h，在反應過程中不斷加酸或堿，維持反應 液中pH 在設定值 11177。 原料中的 總 蛋白含量 黃酒糟 粉末 經(jīng)過水洗除雜和纖維素酶處理之后，使用微量凱氏定氮法 測得含氮量，經(jīng)進一步計算得到其 總蛋白含量為 %。 料液比對蛋白提取率的影響 圖 6 料液比對蛋白質提取率的影響 由圖 6 可 知，在最初的料液比為 1:8 時，蛋白質提取率為最大值，之后隨著加液量的增加，蛋白提取率持續(xù)降低。因此 總的來說，本試驗 選取 的最佳條件應該為 ，加酶量為 20xxu/g， pH值為 10， 反應 溫度 50℃ ，反應時間 2h。在此無法一一羅列，但對他們，我始終心懷感 恩 。 窗外 早已艷陽朝天，花滿枝頭，欣欣向榮。大學里 各 式 各樣的主題活動，各種各樣的思 維 探索，都影響著我的人生觀。 雖然他們沒有直接參與我的 試驗和 論文指導，但在 大學四年里 ， 他們的諄諄教導使 我 不斷成長， 收獲無數(shù)，卻無以回報 ，終生難忘。因此，加酶量應選擇20xxu/g、 pH 為 10。 總之， 前 3 h 內(nèi)，蛋白質的水解速度極快；當溶液中積累了一定量的多肽和氨基酸等水解產(chǎn)物時，蛋白質得率增長 減 緩。 再根據(jù)含氮量計算得到總蛋白含量。0 .1 范圍 內(nèi)。常用的標準蛋白質為牛血清蛋白（ BSA）。因此 還 需要用纖維素酶將纖維素降解，以便解除蛋白質與纖維素的結合，釋放蛋白質，提高蛋白質的提取率。 堿性 內(nèi)切 蛋白酶是由造育的地衣芽孢桿菌 發(fā)酵 而得，主要成分為枯草桿菌蛋白酶，是一種內(nèi)肽酶，催化 部位為絲氨酸，分子量約為 27300。 經(jīng) 過蛋白酶水解 后變?yōu)?水解蛋白 ， 該水解蛋白 具有人體代謝和生理調節(jié)功能，易消化吸收，食用安全性高，可被用作保健食品的原料 。 在少數(shù)的黃酒糟研究中，黃酒 糟 蛋白的研究更是寥寥無幾 ??3 。同時，在糖化 、發(fā)酵過程中發(fā)生一系列復雜的生物化學變化，從而又增加了一些新的代謝產(chǎn)物。 extraction rate of protein。 黃酒糟蛋白的開發(fā)價值 .................................................................... 錯誤 !未定義書簽。其中含有 30%~40%左右的蛋白質，是具有開發(fā)潛力的蛋白飼料資源，但含水量高，不易久置，易造成環(huán)境污染。 王 素萍進行酵母蛋