【正文】 13:46:4413:46:4413:462/11/2023 1:46:44 PM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 13:46:4413:46:4413:46Saturday, February 11, 2023 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 丙型肝炎的分子診斷 45 HCV 5’ UTR gene Second PCR product=257bp Scheme A Cleavage with BsrBⅠ ,HinfⅠ and HaeⅡ 93 and 91bp Genotype 2a and 2b 257bp Genotype 3b,4a and 5a 127 and 91bp 104,74bp 160,74bp 2a 2b 160,74bp 234bp 3b 4a and 5a Cleavage with HaeⅢ Scheme C Cleavage with ApoⅠ 183,74bp 257bp 4a 1b 197bp Genotype 1a, 1b and 6a 166/169 and 91bp Cleavage with BstUⅠ Scheme B 1a 227bp 5a Genotype 3a 6a 257bp HCV 5’非編碼區(qū) ABC程序復(fù)合酶切分型法流程圖 北京大學(xué)人民醫(yī)院肝病研究所提供 46 ? 抗 HCV的確認(rèn)實(shí)驗(yàn) ? 確認(rèn)的重要性（灰區(qū)的遺漏） 目的：解決血液篩查實(shí)驗(yàn)（如 ELISA）的非特異性問題 方法： 例如： ? PCR – 活動(dòng)性病毒血癥的檢測是一個(gè)很好的檢測方法 ? RIBA – 抗體的確認(rèn) ? 新流程： 丙型肝炎的分子診斷 47 抗 HCV篩查檢測 報(bào)告 陰性 或 根據(jù) S/Co比值判定為陽性 所有陽性結(jié)果 高 S/Co比值陽性 * 報(bào)告 低 S/Co比值陽性 * RIBA HCV檢測 或 陽 性 報(bào)告 陰 性 報(bào)告 不 確 定 報(bào)告 陽性 陰 性 RIBA HCV檢測 HCV RNA的 NAT檢測 陽 性 報(bào)告 陰 性 報(bào)告 不 確 定 報(bào)告 報(bào)告 *以 S/Co (OCD HCV ELISA ) 或 (OCD VITROS ECi/ECiQ HCV)為“界值”。 18 PCR 循環(huán) 第二步 – 引物與靶序列退火 引物與解為單鏈的 DNA上互補(bǔ)序列雜交在一起，稱之為退火。adrq+。 16sDNA， 584bp. ?舉例 結(jié)核分枝桿菌 (TB) 的分子診斷 TB 檢測 50 ? 標(biāo)本處理 ：痰液化，抑制物去除 ? 試劑質(zhì)控及靈敏度 ?注意事項(xiàng) 結(jié)核分枝桿菌 (TB) 的分子診斷 TB 檢測 51 結(jié)核的 PCR臨床主要應(yīng)用 ?臨床評價(jià) 結(jié)核分枝桿菌 (TB) 的分子診斷 TB 檢測 52 ? PCR方法與痰涂片及 TB培養(yǎng)的比較 應(yīng)做比對研究 ?臨床評價(jià) 結(jié)核分枝桿菌 (TB) 的分子診斷 TB 檢測 53 ? RFP（利福平） ? INH（異煙肼） ? SM（鏈霉素） ? EMB（乙胺丁醇） ? PZA（吡嗪酰胺） ? 喹諾酮類 ?已確定的耐藥的抗結(jié)核藥物 結(jié)核分枝桿菌 (TB) 的分子診斷 耐藥監(jiān)測 54 ?單耐藥基因檢測 耐利福平： ? 突變一般發(fā)生在 RNA聚合酶 B亞單位編碼基因（ rpoB基因） ? 突變位點(diǎn)： 531位 絲氨酸 ?亮氨酸 526位 組氨酸 ?酪氨酸 ? 突變導(dǎo)致 RFP 不能與 RNA聚合酶 B亞單位結(jié)合 耐異煙肼： 與三種基因突變有關(guān) ? katG基因（突變位點(diǎn)： 463位 精氨酸 ?亮氨酸） ? inhA基因（突變位點(diǎn)： 94位 絲氨酸 ?丙氨酸） ? ahpC基因 結(jié)核分枝桿菌 (TB) 的分子診斷 耐藥監(jiān)測 55 ? 同時(shí)對利福平、異煙肼這兩種或以上的抗結(jié)核藥物耐藥 ? 大多數(shù)耐多藥菌株是各種藥物作用靶分子的編碼基因逐步突變所致 。 下午 1時(shí) 46分 44秒 下午 1時(shí) 46分 13:46: 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 2023年 2月 11日星期六 下午 1時(shí) 46分 44秒 13:46: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 2月 11日星期六 下午 1時(shí) 46分 44秒 13:46: 1楚塞三湘接，荊門九派通。