【正文】 本設計重點研究了卵丘細胞在卵母細胞體外成熟過程中的作用，初步篩選了有卵丘細胞和無卵丘細胞兩種情況下，卵母細胞中差異表達的基因，并且進一步研究卵丘細胞的不同形態(tài)對豬卵母細胞體外成熟的影響，為提高卵母細胞的體外成熟效率提供了依據，將有助于更好的利用卵母細胞來為胚胎工程乃至克隆技術服務。%胎牛血清的DPBS洗滌3次，然后用成熟培養(yǎng)液洗滌3次，最后按實驗設計分別移入含有成熟培養(yǎng)液滴的直徑35mm培養(yǎng)皿中。盡管動物卵母細胞能夠在體外自發(fā)完成細胞核成熟，但卵母細胞成熟質量遠不如體內成熟卵母細胞，其受精后胚胎發(fā)育能力較差。具有多層的卵丘細胞（致密或分散）的卵母細胞55％以上到達染色質結構雙線期，具有體外發(fā)育完全的最大潛力。卵丘擴展常用作判斷卵母細胞體外成熟的特征，Hunter和Moor根據卵丘細胞擴展情況制定了牛卵母細胞體外成熟的判斷標準：1級成熟卵為“卵丘細胞完全擴展”；卵丘細胞團至少擴展倍于裸卵直徑（300181。處于成熟階段的卵母細胞，卵丘細胞通過大量充滿肌纖維蛋白的帶狀結構緊密包裹著透明帶，保持卵母細胞和卵丘細胞之間縫隙聯系，進行離子交換和一些小的代謝物質的交換。目前已經證實，EGF 可以促進豬卵母細胞的核成熟。尤其對于LH 的添加存在爭議，有研究者認為LH 在卵母細胞培育過程中并未發(fā)揮作用，Izadyar 等認為在不含血清的成熟培養(yǎng)液中，只有FSH 能影響卵母細胞的成熟，而LH 沒有作用；Bevers 等認為小于8mm 的牛卵泡中，顆粒細胞上只有FSH 受體mRNA，而沒有LH 受體mRNA。不同動物的卵母細胞所需要的體外成熟培養(yǎng)時間因動物種類的不同而有所不同，大多數哺乳動物所需要的體外培養(yǎng)時間為22~24h，但是對豬而言，卻需要更長的時間，一般，豬卵母細胞體外成熟培養(yǎng)的時間為44h。大多數哺乳動物的卵母細胞被卵丘細胞包裹形成COCs）。從初情期前的青年母豬卵巢中獲得的豬卵母細胞經過體外成熟培養(yǎng)后可得到IVP 后代，但是，成功的效率不如經產母豬卵巢體外成熟的卵母細胞。 關鍵詞：卵丘細胞；豬卵母細胞；體外成熟燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書目 錄第一部分 文獻綜述 1 1 1 12. 影響豬卵母細胞體外成熟的因素 2 2 卵巢來源豬的年齡、品種及健康狀況 2 2 3 3 3 體外成熟培養(yǎng)條件 4 4 4 4 4 5 5 6 6 7 7 8 9 10第二部分 課程設計部分 11 11 卵巢 11 實驗用的儀器 11 實驗試劑 12 12 卵丘卵母細胞復合體（COCs）的收集 12 12 13 133. 設計 13 13 13 14 14 14 15參考文獻 16燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書第一部分 文獻綜述卵母細胞成熟是指卵母細胞恢復和完成第一次減數分裂，進入并停滯于第二次減數分裂中期，此間伴隨著胞漿成熟，即卵母細胞的成熟包括其核成熟和胞漿成熟兩個方面[v]。核成熟是核膜破裂，同源染色體分離和排出第一極體；胞漿成熟是胞漿內各種蛋白組成達到一定水平及線粒體的有效重排。不同的國家和地區(qū)之間，豬的品種必定存在著遺傳因素、飼養(yǎng)環(huán)境和氣候條件等等的因素而帶來品質上的差異，從而影響豬卵母細胞的質量進而對體外成熟培養(yǎng)也產生一定的影響。排卵之前，卵丘細胞擴展，合成大量胞外基質，并富含透明質酸（Hyaluronic：HA），有利于排卵后進入輸卵管，同時保證了卵母細胞正常的受精和胚胎發(fā)育潛力，所以，卵丘細胞的擴張對卵母細胞成熟，特別是卵母細胞胞質成熟起著重要作用。Sosnowki 等研究發(fā)現培養(yǎng)40~48 h 與30~36 h 對豬卵母細胞體外成熟率差異顯著，但是分析染色體核型發(fā)現，隨著體外培養(yǎng)時間的延長，染色體異常率會隨之增加。但彭禮繁等卻認為LH 對豬卵母細胞體外成熟的促進效果要強于FSH。Abeydeera的研究表明，EGF 能提高卵母細胞成熟過程中蛋白質的合成，從而提高卵母細胞胞質的質量，IGF 對細胞具有促分裂、分化及促代謝等生物學功能，是一個具有多種生理功能的生長因子，因此，同樣能促進豬卵母細胞的成熟，并能提高所得胚胎的發(fā)育能力。卵母細胞所需的營養(yǎng)物質依賴卵丘細胞提供，兩者間通過縫隙連接進行信號傳導，進而調節(jié)卵母細胞的生長和成熟。m）；,級成熟卵為“卵丘細胞中等擴展”，卵丘細胞向外擴展約,倍于裸卵直徑（200181。李榮鳳等實驗，以皮層顆粒（CG）單層分布于質膜下做為卵母細胞質成熟的指標，分別于成熟培養(yǎng)前后觀察各類卵子的CG分布情況。目前認為，這可能是由于體外成熟的卵母細胞胞質成熟不充分造成的。每個液滴50μL并覆蓋石蠟油，每滴放COCs10~15枚。本次課程設計我選的題目是《卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟的影響》，回想起這些天緊張而又充實，正如趙老師說的，此次設計時間緊任務重。本研究結果表明，包裹卵母細胞的卵丘細胞層的存在與其層數對卵母細胞的體外成熟和孤雌激活后胚胎發(fā)育的能力具有重要作用。C級：裸卵或卵丘細胞雖為1～2層或多層，但是不完整，部分裸露。第二部分 課程設計部分卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟的影響獲取高質量的體外成熟卵母細胞是成功進行人類體外受精、動物胚胎生產和克隆的關鍵。這些結果與Abdoon的報道一致，他也發(fā)現大部分的卵母細胞有5層或更多層的卵丘細胞，并且具有均勻致密的卵質。卵丘細胞是否成熟是卵母細胞成熟的重要標志，只有兩者均成熟時，精子才能有效地穿透卵子并進而發(fā)生卵裂［10］。卵泡中的縫隙連接使壁層顆粒細胞、卵丘細胞和卵母細胞共同形成一個結構和功能上的合胞體[1]。與卵母細胞體外成熟相關的細胞生長因子主要包括表皮生長因子(Epidermal growth factor，EGF)，胰島素樣生長因子(insulinlike growth factors，IGF)、成纖維細胞生長因子(Fibroblast Growth Factor，FGF)、轉化生長因子(transforming growth factor，TGF )及神經生長因子(nerve growth factor，NGF)等，這些細胞生長因子之間相互作用，對卵母細胞的成熟、受精與卵裂起著重要作用。在豬卵母細胞體外成熟研究中，許多學者都選擇添加PMSG,有人還認為添加PMSG 和hCG 的組合對豬卵母細胞核成熟的促進作用優(yōu)于添加FSH 和LH。另外，要保證所用氣體的無毒。但在特別大的卵泡中有些卵母細胞有嚴重退化的現象。2. 影響豬卵母細胞體外成熟的因素 卵巢來源豬的年齡、品種及健康狀況同一種動物在不同年齡段其卵母細胞在體外成熟的情況也有所不同。為提高卵母細胞的質量，使體外受精、細胞核移植、轉基因及胚胎干細胞等技術研究的順利進行，而作為這些研究基礎環(huán)節(jié)的卵母細胞體外成熟技術尤為重要。卵母細胞體外成熟（IVM）是指在體外人工給定的條件下，哺乳動物