【正文】 本研究也發(fā)現(xiàn)親本數(shù)目較少的P3群體雖然等位基因數(shù)量與P7群體相同，但基因型數(shù)量少于P7群體。對(duì)于成體來(lái)說(shuō)，往往組織量較大，因此可以在一定程度上彌補(bǔ)DNA在抽提過(guò)程中的丟失。177。Hs為種群內(nèi)的基因多樣性。 伸：72℃，1分鐘；⑤本研究采用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)，分析了由不同數(shù)目親本所產(chǎn)生的兩個(gè)中間球海膽群體的遺傳結(jié)構(gòu)，建立了稚膽材料的固定、DNA裂解及PCR技術(shù)，豐富了中間球海膽分子遺傳學(xué)研究?jī)?nèi)容。譚杰等[5]運(yùn)用微衛(wèi)星DNA技術(shù)對(duì)仿刺參煙臺(tái)群體、威海群體大連群體的3個(gè)野生群各20個(gè)個(gè)體進(jìn)行了遺傳分析,結(jié)果表明威海群體和大連群體之間親緣關(guān)系較近,煙臺(tái)群體與前兩群體親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。, 177。所有海膽稚膽期采用直接裂解法提取基因組DNA，裂解液直接進(jìn)行微衛(wèi)星擴(kuò)增。 and 177。在海膽?zhàn)B殖及雜交育種等方面，王麗梅等[1213]進(jìn)行了中間球海膽與光棘球海膽的雜交的研究。3. 加入1μl蛋白酶K（）4. 55℃恒溫裂解3h后，升溫到85℃保持15min以滅活蛋白酶K。⑤ 8%PAGE膠制備30%丙烯酰胺 5TBE Buffer 超純水 10%過(guò)硫酸銨 TEMED 灌膠：8%PAGE膠配置好后，后立即灌膠，室溫凝膠1小時(shí)以上，膠厚約為1mm。其中引物INTS20在部分海膽個(gè)體的擴(kuò)增電泳結(jié)果見(jiàn)圖1。177。另外，該方法不但可以將微小的幼蟲(chóng)階段納入到分子標(biāo)記的研究中來(lái), 便于更全面的掌握海膽整個(gè)生命周期內(nèi)的遺傳結(jié)構(gòu)變化動(dòng)態(tài),擴(kuò)大了海膽遺傳育種學(xué)的研究范圍和研究?jī)?nèi)容，也為海膽標(biāo)記輔助育種等遺傳學(xué)研究工作提供了早期取樣研究的實(shí)例，大大簡(jiǎn)化該方向的研究步驟，且節(jié)約了人力、物力及寶貴的時(shí)間。秦老師淵博的專業(yè)知識(shí)，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，精益求精的工作作風(fēng)，誨人不倦的高尚師德，嚴(yán)以律己、寬以待人的崇高風(fēng)范，樸實(shí)無(wú)華、平易近人的人格魅力對(duì)我影響深遠(yuǎn)。本實(shí)驗(yàn)所用海膽稚膽群體雜合度水平處于中等，但是用于產(chǎn)生這些個(gè)體的親本數(shù)均較少，推測(cè)將會(huì)存在不同程度的等位基因丟失、雜合度下降等的情況。177。10個(gè)位點(diǎn)在兩個(gè)群體中分別擴(kuò)增出23個(gè)等位基因，177。微衛(wèi)星產(chǎn)物電泳結(jié)果經(jīng)肉眼觀察，將每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因依據(jù)片斷大小分別命名為A、B、C、按照共顯性標(biāo)記進(jìn)行基因型統(tǒng)計(jì)，帶型不清晰或多次擴(kuò)增未見(jiàn)產(chǎn)物的個(gè)體用“..”表示。 性：94℃，40秒；③ 常亞青等[20]曾利用 RAPD 技術(shù)對(duì)5種經(jīng)濟(jì)海膽基因組多態(tài)性進(jìn)行了分析。李琪等[1]采用磁珠雜交選擇和 PCR篩選法,從長(zhǎng)牡蠣DNA選擇片段文庫(kù)中 ,快速分離含有微衛(wèi)星序列的陽(yáng)性克隆。177。177。斑馬魚(yú)作為脊椎動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)的模式動(dòng)物,已經(jīng)構(gòu)建了以微衛(wèi)星為主的遺傳連鎖圖譜。Addison 等[19 ]利用4個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記分析了從大西洋北部至太平洋東北部11個(gè)取樣地點(diǎn)的綠海膽的遺傳結(jié)構(gòu)。變④ 用純水沖洗，停止染色。100bp200bp300bp Amplification results of locus INTS20 in some individuals of sea urchin表3. P7和P3海膽稚膽群體10個(gè)位點(diǎn)的等位基因頻率 Allele frequency of 10 microsatellite loci in eightarmed P7 and P3 puerile sea urchin population位 點(diǎn)群體類型ABCINST01P7P3PINST02P7P3PINST04P7P3PINST10P7P3PINST12P7P3PINST14P7P3PINST19P7P3PINST20P7P3PST16P7P3PST24P7P3P Genotype frequency of 10 microsatellite loci in P7 and P3 urchin population位 點(diǎn)群體類型AAABBBACBCCCINTS01P7P3INTS02P7P3INTS04P7P3INTS10P7P3INTS12P7P3INTS14P7P3INTS19P7P3INTS20P7P3ST16P7P3ST24P7P3基因型數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)形成矩陣，輸入Popgene32軟件，經(jīng)統(tǒng)計(jì)計(jì)算出兩個(gè)群體的平均有效等位基因數(shù)、平均香濃氏指數(shù)以及雜合度等指標(biāo)，見(jiàn)表5。177。丁君等研究結(jié)果顯示，雜合度的平均觀察值都低于雜合度的平均期望值，結(jié)果顯示3個(gè)蝦夷馬糞海膽?zhàn)B殖群體的遺傳多樣性較低，這可能與海膽?zhàn)B殖群體育苗時(shí)所取父母本海膽較少，且進(jìn)行累代繁殖有關(guān)，海膽育苗、養(yǎng)殖過(guò)程中的這些問(wèn)題將導(dǎo)致海膽子代群體中親緣關(guān)系較近，一些雜和位點(diǎn)丟失，建議海膽育苗、養(yǎng)殖單位在較大范圍內(nèi)，選擇數(shù)量較多的親本海膽繁育后代，以保證養(yǎng)殖群體的雜和度保持在一個(gè)較高水平。不僅使我掌握了基本的研究方法，還使我明白了許多待人接物與為人處世的道理。雜合度作為反映群體遺傳變異的重要