【正文】 老師作為年輕新晉的老師，對(duì)科研與教學(xué)充滿了無(wú)限的熱情，對(duì)待學(xué)生悉心教導(dǎo)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，都給我留下了極其深刻的印象；最令我難忘的是老師對(duì)學(xué)生不僅僅局限于傳授學(xué)生知識(shí)和解答疑惑，更注重教導(dǎo)學(xué)生做人的道理。第三章 結(jié)果與分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析蛋白濃度測(cè)定結(jié)果蛋白濃度計(jì)算公式：蛋白濃度（g∕L）=（測(cè)定 OD 值空白 OD 值）/（標(biāo)準(zhǔn) OD值空白 OD 值）標(biāo)準(zhǔn)品濃度（） 。試劑五：粉劑4 支，20℃保存，用時(shí)每支加蒸餾水 650ul，用不完的試劑放20℃以下保存。 研究目的與意義植物細(xì)胞質(zhì)雄性不育在雜種優(yōu)勢(shì)利用上的重要價(jià)值一直是人們研究的熱點(diǎn)，第一章 引言6并且是研究核質(zhì)互作的好材料，對(duì)了解植物生命活動(dòng)機(jī)制有重要意義。外膜與宿主膜比較一致，特別是和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜很相似；內(nèi)膜則分別同細(xì)菌和藍(lán)藻的膜相似。這種理論認(rèn)為線粒體起源于好氧性細(xì)菌（很可能是接近于立克次體的變形菌門(mén)細(xì)菌） ，而葉綠體源于內(nèi)共生的光合自養(yǎng)原核生物藍(lán)藻。 與細(xì)胞質(zhì)雄性不育有關(guān)的線粒體基因或片段水稻 BTCMS 不育系統(tǒng)的線粒體的 DNA 含兩個(gè) atp6 基因，而保持系只有第一章 引言3一個(gè)。一般推測(cè)，植物 CMS 形成機(jī)理有兩種：第一種線粒體基因組中新的嵌合閱讀框與其相鄰近的保守基因共轉(zhuǎn)錄，造成保守基因的單順?lè)醋愚D(zhuǎn)錄本減少，從而減少了保守基因編碼的蛋白量 致使植物的某些功能異?；騿适Ф挥坏诙N新的嵌合閱讀框編碼了一個(gè)毒性蛋白，該蛋白干擾保守基因的生物活性或干擾花藥發(fā)育中的生理生化過(guò)程從而中斷花粉發(fā)育形成雄性不育。用于三系雜交水稻避免人工去雄，具有很高的實(shí)用價(jià)值。 保密□，在 年解密后適用本授權(quán)書(shū)。隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展更新，特別是細(xì)胞器分離技術(shù)和離體翻譯體系的建立，極大地推進(jìn)了在分子水平對(duì)植物細(xì)胞質(zhì)雄性不育機(jī)理的研究，豐富了人們對(duì) CMS 現(xiàn)象的認(rèn)識(shí)。 確定細(xì)胞質(zhì)雄性不育有關(guān)的線粒體基因或片段的方法確定與細(xì)胞質(zhì)雄性不育相關(guān)基因或基因片段，可采用以下幾種材料：1)不育系和保持系；2)不育系和育系的自發(fā)回復(fù)突變體；3)組培或原生質(zhì)體融合分化產(chǎn)生的不育和可育植株。 大腸桿菌與線粒體有類似的遺傳體系 細(xì)菌的內(nèi)共生學(xué)說(shuō)第一章 引言4由美國(guó)生物學(xué)家馬古利斯（LynnMargulis）于 1970 年出版的《真核細(xì)胞的起源》一書(shū)中正式提出?？股乜梢砸种萍?xì)菌和藍(lán)藻的生長(zhǎng)，也可以抑制真核生物中的線粒體和葉綠體的作用，這也說(shuō)明線粒體與細(xì)菌、葉綠體與藍(lán)藻是同源的。因此,糖酵解的速度正相關(guān)于以上幾種物質(zhì)的含量。 （如果樣品量少，可以將 再分成 23 管放20℃以下保存，每次取一管用，以免反復(fù)凍融） ?？瞻坠?標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管雙蒸水（ml）（ml）樣品（ml）考馬斯亮藍(lán)顯色劑（ml）00003．000表Ⅰ混勻，靜置 10 分鐘，于 595nm 處，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)各管 OD 值。本次實(shí)驗(yàn)只是研究水稻細(xì)胞質(zhì)雄性不育的形成機(jī)理的方向之一，是在以前師兄有氧條件下 orfH79 基因轉(zhuǎn)化細(xì)菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究的，第四章 實(shí)驗(yàn)討論15由師兄實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知導(dǎo)入 orfH79pET28a 的大腸桿菌生長(zhǎng)受到抑制，可知有氧條件下 orfH79 基因?qū)?xì)菌的生長(zhǎng)是抑制的，本實(shí)驗(yàn)則是具體研究不育基因?qū)?xì)菌有氧呼吸過(guò)程的酶的影響，綜合來(lái)看，可以知道不育基因?qū)?xì)菌有氧呼吸產(chǎn)生抑制，使細(xì)菌能量供應(yīng)不足，從而影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。當(dāng)然老師在我的選題到進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以及最后的論文寫(xiě)作上，都傾入了極大的心血；并且在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的親力親為，對(duì)我的實(shí)驗(yàn)悉心指導(dǎo)。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知 28a 的酶的活性明顯大于 Na6 和 Na12 的酶的活，表明導(dǎo)入orfH79pET28a 的大腸桿菌對(duì)丙酮酸激酶的酶活性起抑制作用，而丙酮酸激酶作為有氧呼吸過(guò)程中的關(guān)鍵酶，可知不育基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白對(duì)有氧呼吸過(guò)程有抑制作用。試劑二：蛋白標(biāo)準(zhǔn)，1 支，4℃保存 1 個(gè)月（如要延長(zhǎng)時(shí)間將標(biāo)準(zhǔn)液分裝后20℃冷凍保存 6 個(gè)月）4）蛋白提取裂解液（10ml）：8mol/L 尿素，2mol/L 硫脲，4%(w/v)CHAPS，l%(w/v)DTT，%(w/v)，35mmol/LTris，5mmol/LEDTA。本課題以大腸桿菌這一與線粒體類似的遺傳體系來(lái)系統(tǒng)的研究水稻紅蓮型雄性不育基因 orfH79 對(duì)大腸桿菌抑制機(jī)理，同時(shí)避開(kāi)了線粒體體外培養(yǎng)的難題，為研究 CMS 分子機(jī)理提供了一個(gè)新的思路。這些成分與細(xì)胞質(zhì)相應(yīng)成分不同，第一章 引言5而與細(xì)菌的比較相似，不受細(xì)胞核控制，且與大腸桿菌一樣都具有多順?lè)醋拥霓D(zhuǎn)錄線粒體遺傳體系和大腸桿菌有很多相似的地方，如：（1）DNA 結(jié)構(gòu)為環(huán)狀，無(wú)內(nèi)含子；（2）核糖體為 70S 型；（3）RNA 聚合酶不被放線菌素 D 所抑制，溴化乙錠可抑制；（4）氨?；鵷RNA 合成酶、tRNA 與細(xì)胞質(zhì)中不相同；（5）N甲酰甲硫氨酰 tRNA 是蛋白質(zhì)合成的起始氨酰基 tRNA，其對(duì)細(xì)菌蛋白質(zhì)合成的抑制劑氯霉素敏感而對(duì)細(xì)胞質(zhì)蛋白合成的抑制劑放線菌酮?jiǎng)t不敏感。有一種草履蟲(chóng)，其體內(nèi)有小的藻類與之共生，并能進(jìn)行光合作用；過(guò)去說(shuō)澳洲白蟻消化道內(nèi)生活著一種所謂混毛蟲(chóng)，實(shí)際由兩種螺旋體、兩種真細(xì)菌和一種纖毛蟲(chóng)組成，它們能分泌有關(guān)的酶，消化纖維素。水稻野敗型不育系和保持系除前述發(fā)現(xiàn)線粒體 DNA 酶切帶譜有著差異。這表明第一種解釋并不理想。然而細(xì)菌基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯及能量合成方式與線粒體具有較大的相似性。本人完全意識(shí)到本申明的法律后果由本人承擔(dān)。關(guān)鍵詞：細(xì)胞質(zhì)雄性不育；orfH79 基因；大腸桿菌；丙酮酸激酶酶活A(yù)bstractIIorfH79 transformed e. coli enzyme determination of pyruvate kinaseAbstractThe phenomenon of cytoplasmic male sterility (CMS) is widespread in plants， performance of abortive male, but female gamete and vegetative growth normal. It is used for threeline hybrid rice to avoid artificial emasculation, has the very high practical male sterility (CMS) is the nucleus interactions, however as a result, to study on molecular mechanism of karyoplasm interaction provides a good material. Mitochondrial genome within molecules form abnormal chimeric gene is the basis of CMS to produce, because the rice anther mitochondrial mitochondria in vitro culture and plant the limitation of direct conversion technology, rice CMS molecular mechanism research progress has been slow. However, bacterial gene transcription and translation and energy synthesis method and mitochondria has great similarities. Mitochondrial genes orfH79 type is redviolet rice cytoplasmic male sterile genes. So this study will research sterility gene into e. coli. Mitochondria, the central is a matrix, matrix contains all the required enzymes and the Krebs cycle, the lining of respiratory chain enzymes and ATP enzyme plexes. This experiment is to study the effect of orfH79 gene of pyruvate kinase, namely by measuring the enzyme activity