【正文】 應(yīng) 添加 含氮物質(zhì)（氮源） ．培養(yǎng)時(shí)要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上，其目的是 為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供充足的氧氣 ． （ 2）進(jìn)行分離、純化培養(yǎng)時(shí)，要先將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，制成平板．此時(shí)所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時(shí)有所不同，其中添加了一定量的 瓊脂 ．倒平板時(shí)，要待高壓滅菌后的培養(yǎng)基 冷卻至 50℃ 左右（或冷卻至不燙手） ，再在 酒精燈火焰 附近操作．平板冷凝后，需置于恒溫箱中 1﹣ 2 天后再用于接種，目的是 選出沒(méi)被微生物污染的平板 ． （ 3）分離純化培養(yǎng)后，得到 8 種形態(tài)特征有所不同的單菌落．經(jīng)染色鑒定，其中 3 種能產(chǎn)生 PHB．那么如何進(jìn)一步篩選出高產(chǎn) PHB 的菌種呢？請(qǐng)說(shuō)出你的實(shí)驗(yàn)思路． 將能產(chǎn)生 PHB 的三種菌分別接種到相同的培養(yǎng)基上，在相同且適宜的條件下培養(yǎng)相同時(shí)間，檢測(cè)和比較三種菌的 PHB 生成量 ． 【考點(diǎn)】 微生物的分離和培養(yǎng)；培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用． 【分析】 培養(yǎng)基按功能分： 種類 制備方法 特征 用途 選擇 培養(yǎng)基 根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì) 加入青霉素分離得 培養(yǎng)基 中加入某種化學(xué)成分 某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選率 到酵母菌和霉菌 鑒別培養(yǎng)基 加 入某種試劑或化學(xué)藥品 依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì) 鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌 純化微生物常用的方法 ① 平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面． ② 稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)． 【解答】 解：（ 1）自生固氮菌是一類能獨(dú)立固定氮?dú)獾募?xì)菌，因此富集培養(yǎng)時(shí)，為達(dá)到篩選自生固氮菌的目的， 在配制培養(yǎng)液時(shí)不應(yīng)添加含氮物質(zhì)（氮源）．培養(yǎng)時(shí)要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上，其目的是為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供充足的氧氣． （ 2）進(jìn)行分離、純化培養(yǎng)時(shí)，要先將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，制成平板．此時(shí)所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時(shí)有所不同，為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)皿中需添加了一定量的瓊脂．倒平板時(shí)，要待高壓滅菌后的培養(yǎng)基 冷卻至 50℃ 左右（或冷卻至不燙手），再在酒精燈火焰附近操作．平板冷凝后，需置于恒溫箱中 1﹣ 2 天后再用于接種，目的是選出沒(méi)被微生物污染的平板． （ 3）分離純化培養(yǎng)后，得到 8 種形態(tài)特征有所不同的單菌落．經(jīng)染色鑒 定，其中 3 種能產(chǎn)生 PHB．進(jìn)一步篩選出高產(chǎn) PHB 的菌種的實(shí)驗(yàn)思路為：將能產(chǎn)生 PHB的三種菌分別接種到相同的培養(yǎng)基上，在相同且適宜的條件下培養(yǎng)相同時(shí)間，檢測(cè)和比較三種菌的 PHB 生成量． 故答案為： （ 1）含氮物質(zhì)（氮源） 為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供充足的氧氣 （ 2）瓊脂 冷卻至 50℃ 左右（或冷卻至不燙手） 酒精燈火焰 選出沒(méi)被微生物污染的平板 （ 3）將能產(chǎn)生 PHB 的三種菌分別接種到相同的培養(yǎng)基上，在相同且適宜的條件下培養(yǎng)相同時(shí)間，檢測(cè)和比較三種菌的 PHB 生成量 【點(diǎn)評(píng)】 本題考查微生物的分 離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分、種類及功能；識(shí)記培養(yǎng)基的制作過(guò)程，能結(jié)合題中信息準(zhǔn)確答題． 【生物 選修 3：現(xiàn)代生物科技專題】（ 15 分） 12．（ 2017?佛山一模）復(fù)合型免疫缺陷癥（ SCID）患者缺失 ada 基囚．利用基因療法將人正常 ada 基因轉(zhuǎn)入患者自身 T 細(xì)胞．可改善患者的免疫功能．如圖顯示該基因療法的兩個(gè)關(guān)鍵步驟．回答下列問(wèn)題： （ 1）圖中所示獲取正常 ada 基因的方法是 從基因文庫(kù)中獲取目的基因 ，若要大量獲取該基因，可通過(guò) PCR 技術(shù)迸行擴(kuò)增．與細(xì)胞內(nèi) DNA 復(fù)制過(guò)程相比，PCR 技術(shù)的不同點(diǎn)有 不 需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶 （答出兩點(diǎn)） （ 2）步驟 ② 是 構(gòu)建基因表達(dá)載體 ．在該步驟中，病毒作為 運(yùn)載體 起作用，需使用的工具酶有 限制酶和 DNA 連接酶 ． （ 3）完成步驟 ② 后，在體外將人正常 ada 基因?qū)牖颊咦陨淼?T 細(xì)胞．此后，在將該 T 細(xì)胞重新輸入患者體內(nèi)之前，還必須完成哪兩項(xiàng)操作？ 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與表達(dá) ． 【考點(diǎn)】 基因工程的原理及技術(shù)． 【分析】 基因工程技術(shù)的基本步驟： （ 1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增和人工合成． （ 2）基因表 達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等． （ 3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法． （ 4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)： ① 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA 是否插入目的基因﹣﹣ DNA 分子雜交技術(shù)； ② 檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA﹣﹣分子雜交技術(shù)； ③ 檢測(cè)目的基因是否翻 譯成蛋白質(zhì)﹣﹣抗原﹣抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等． 分析題圖：圖示顯示基因療法的兩個(gè)關(guān)鍵步驟，其中 ① 表示獲取目的基因，② 表示構(gòu)建基因表達(dá)載體． 【解答】 解：（ 1）圖中所示獲取目的基因的方法是從基因文庫(kù)中獲取目的基因；與細(xì)胞內(nèi) DNA 復(fù)制過(guò)程相比， PCR 技術(shù)的不同點(diǎn)有：不需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶． （ 2）步驟 ② 是構(gòu)建基因表達(dá)載體．在該步驟中，病毒作為運(yùn)載體起作用；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要限制酶切割運(yùn)載體和含有目的基因的外源 DNA 分子，其次需要 DNA 連接酶將目的 基因與運(yùn)載體連接形成重組 DNA 分子． （ 3）基因工程的基本操作步驟主要包括四步： ① 目的基因的獲?。?② 基因表達(dá)載體的構(gòu)建； ③ 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞； ④ 目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．因此完成步驟 ② 后，在體外將人正常 ada 基因?qū)牖颊咦陨淼?T 細(xì)胞．此后，在將該 T細(xì)胞重新輸入患者體內(nèi)之前，還必須完成的兩項(xiàng)操作為：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與表達(dá)． 故答案為： （ 1）從基因文庫(kù)中獲取目的基因 不需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶 （ 2）構(gòu)建基因表達(dá)載體 運(yùn)載體 限制酶和 DNA 連接酶 （ 3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與表達(dá) 【點(diǎn)評(píng)】 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、概念、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)． 。