【正文】 應(yīng) 添加 含氮物質(zhì)（氮源） ．培養(yǎng)時要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上，其目的是 為細菌的生長提供充足的氧氣 ． （ 2）進行分離、純化培養(yǎng)時，要先將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，制成平板．此時所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時有所不同，其中添加了一定量的 瓊脂 ．倒平板時，要待高壓滅菌后的培養(yǎng)基 冷卻至 50℃ 左右（或冷卻至不燙手） ，再在 酒精燈火焰 附近操作．平板冷凝后，需置于恒溫箱中 1﹣ 2 天后再用于接種，目的是 選出沒被微生物污染的平板 ． （ 3）分離純化培養(yǎng)后，得到 8 種形態(tài)特征有所不同的單菌落．經(jīng)染色鑒定，其中 3 種能產(chǎn)生 PHB．那么如何進一步篩選出高產(chǎn) PHB 的菌種呢？請說出你的實驗思路． 將能產(chǎn)生 PHB 的三種菌分別接種到相同的培養(yǎng)基上，在相同且適宜的條件下培養(yǎng)相同時間，檢測和比較三種菌的 PHB 生成量 ． 【考點】 微生物的分離和培養(yǎng)；培養(yǎng)基對微生物的選擇作用． 【分析】 培養(yǎng)基按功能分： 種類 制備方法 特征 用途 選擇 培養(yǎng)基 根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對 加入青霉素分離得 培養(yǎng)基 中加入某種化學成分 某化學、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率 到酵母菌和霉菌 鑒別培養(yǎng)基 加 入某種試劑或化學藥品 依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計 鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌 純化微生物常用的方法 ① 平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面． ② 稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)． 【解答】 解：（ 1）自生固氮菌是一類能獨立固定氮氣的細菌，因此富集培養(yǎng)時，為達到篩選自生固氮菌的目的， 在配制培養(yǎng)液時不應(yīng)添加含氮物質(zhì)（氮源）．培養(yǎng)時要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上，其目的是為細菌的生長提供充足的氧氣． （ 2）進行分離、純化培養(yǎng)時，要先將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，制成平板．此時所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時有所不同，為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)皿中需添加了一定量的瓊脂．倒平板時，要待高壓滅菌后的培養(yǎng)基 冷卻至 50℃ 左右（或冷卻至不燙手），再在酒精燈火焰附近操作．平板冷凝后，需置于恒溫箱中 1﹣ 2 天后再用于接種，目的是選出沒被微生物污染的平板． （ 3）分離純化培養(yǎng)后，得到 8 種形態(tài)特征有所不同的單菌落．經(jīng)染色鑒 定，其中 3 種能產(chǎn)生 PHB．進一步篩選出高產(chǎn) PHB 的菌種的實驗思路為：將能產(chǎn)生 PHB的三種菌分別接種到相同的培養(yǎng)基上，在相同且適宜的條件下培養(yǎng)相同時間，檢測和比較三種菌的 PHB 生成量． 故答案為： （ 1）含氮物質(zhì)（氮源） 為細菌的生長提供充足的氧氣 （ 2）瓊脂 冷卻至 50℃ 左右（或冷卻至不燙手） 酒精燈火焰 選出沒被微生物污染的平板 （ 3）將能產(chǎn)生 PHB 的三種菌分別接種到相同的培養(yǎng)基上，在相同且適宜的條件下培養(yǎng)相同時間，檢測和比較三種菌的 PHB 生成量 【點評】 本題考查微生物的分 離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的成分、種類及功能；識記培養(yǎng)基的制作過程，能結(jié)合題中信息準確答題． 【生物 選修 3：現(xiàn)代生物科技專題】（ 15 分） 12．（ 2017?佛山一模）復合型免疫缺陷癥（ SCID）患者缺失 ada 基囚．利用基因療法將人正常 ada 基因轉(zhuǎn)入患者自身 T 細胞．可改善患者的免疫功能．如圖顯示該基因療法的兩個關(guān)鍵步驟．回答下列問題： （ 1）圖中所示獲取正常 ada 基因的方法是 從基因文庫中獲取目的基因 ，若要大量獲取該基因，可通過 PCR 技術(shù)迸行擴增．與細胞內(nèi) DNA 復制過程相比，PCR 技術(shù)的不同點有 不 需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶 （答出兩點） （ 2）步驟 ② 是 構(gòu)建基因表達載體 ．在該步驟中，病毒作為 運載體 起作用，需使用的工具酶有 限制酶和 DNA 連接酶 ． （ 3）完成步驟 ② 后，在體外將人正常 ada 基因?qū)牖颊咦陨淼?T 細胞．此后，在將該 T 細胞重新輸入患者體內(nèi)之前，還必須完成哪兩項操作？ 將目的基因?qū)胧荏w細胞、目的基因的檢測與表達 ． 【考點】 基因工程的原理及技術(shù)． 【分析】 基因工程技術(shù)的基本步驟： （ 1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用 PCR 技術(shù)擴增和人工合成． （ 2）基因表 達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等． （ 3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法． （ 4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測： ① 檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA 是否插入目的基因﹣﹣ DNA 分子雜交技術(shù)； ② 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA﹣﹣分子雜交技術(shù)； ③ 檢測目的基因是否翻 譯成蛋白質(zhì)﹣﹣抗原﹣抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等． 分析題圖：圖示顯示基因療法的兩個關(guān)鍵步驟，其中 ① 表示獲取目的基因，② 表示構(gòu)建基因表達載體． 【解答】 解：（ 1）圖中所示獲取目的基因的方法是從基因文庫中獲取目的基因；與細胞內(nèi) DNA 復制過程相比， PCR 技術(shù)的不同點有：不需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶． （ 2）步驟 ② 是構(gòu)建基因表達載體．在該步驟中，病毒作為運載體起作用；構(gòu)建基因表達載體時，首先需要限制酶切割運載體和含有目的基因的外源 DNA 分子，其次需要 DNA 連接酶將目的 基因與運載體連接形成重組 DNA 分子． （ 3）基因工程的基本操作步驟主要包括四步： ① 目的基因的獲??； ② 基因表達載體的構(gòu)建； ③ 將目的基因?qū)胧荏w細胞； ④ 目的基因的檢測與表達．因此完成步驟 ② 后，在體外將人正常 ada 基因?qū)牖颊咦陨淼?T 細胞．此后，在將該 T細胞重新輸入患者體內(nèi)之前，還必須完成的兩項操作為：將目的基因?qū)胧荏w細胞、目的基因的檢測與表達． 故答案為： （ 1）從基因文庫中獲取目的基因 不需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶 （ 2）構(gòu)建基因表達載體 運載體 限制酶和 DNA 連接酶 （ 3）將目的基因?qū)胧荏w細胞、目的基因的檢測與表達 【點評】 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、概念、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)． 。