【正文】 ase)外,還需要PKC的激活來使絲氨酸和蘇氨酸磷酸化。 [!]　　受wholecell技術(shù)約束, 許多免疫細(xì)胞還不易用膜電容記錄。在融合孔閃爍過程中,其電導(dǎo)通常＜1 ns, 并且在開和關(guān)兩種狀態(tài)的大小是一致的, 這表明中性粒細(xì)胞的融合孔在低電導(dǎo)時(shí)不存在細(xì)胞膜脂質(zhì)的流動(dòng)。 　　lollike等［2］應(yīng)用細(xì)胞貼附式膜片鉗技術(shù)在中性粒白細(xì)胞研究了免疫細(xì)胞脫顆粒的動(dòng)力學(xué), 包括單個(gè)囊泡融合的動(dòng)力學(xué)特性, 用這種方法, 他們可以分辨出1 fF的階梯狀電容變化(對(duì)應(yīng)單個(gè)囊泡分泌事件)。2 免疫細(xì)胞分泌抗體或細(xì)胞因子的研究 　　經(jīng)過適當(dāng)處理, 免疫細(xì)胞可應(yīng)用膜片鉗測(cè)量細(xì)胞膜電容。 [!]　　目前, Ca2 作為細(xì)胞內(nèi)較早激活的一個(gè)重要的第二信使已被接受, 但其后續(xù)信號(hào)過程尚不清楚。Na通道僅存在于少數(shù)T細(xì)胞、 T細(xì)胞株和自然殺傷細(xì)胞。但是它易受Mg2 結(jié)合的影響。1amp。 　　1amp。施加的電壓可為恒電位或三角波循環(huán)電壓,前者的優(yōu)點(diǎn)是時(shí)間分辨率高, 后者的優(yōu)點(diǎn)是能區(qū)分不同的信息分子。這一方法為研究單個(gè)小囊泡的分泌活動(dòng)如膜融合孔開閉動(dòng)力學(xué)、膜融合事件的分子調(diào)控等提供了強(qiáng)有力的工具。 　　1amp。將膜電容測(cè)量、電化學(xué)測(cè)量、 光學(xué)測(cè)量、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子光解等生物物理方法引入免疫學(xué)領(lǐng)域, 可能為免疫細(xì)胞分泌的調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究提供大量有意義的數(shù)據(jù), 從而盡快填補(bǔ)該領(lǐng)域的研究空白。故而有關(guān)細(xì)胞分泌活動(dòng)的研究近年在國(guó)際上形成一個(gè)新的熱點(diǎn)。 Sinamp。細(xì)胞分泌的最后一步是囊泡膜與胞漿膜融合的過程,當(dāng)分泌發(fā)生時(shí)細(xì)胞膜的表面積會(huì)增加, 而細(xì)胞膜的電容大小正比于細(xì)胞膜的表面積(～1 μF/cm2),因此細(xì)胞膜電容的增加就代表細(xì)胞分泌量。 　　1amp。 [!]　　電化學(xué)技術(shù)監(jiān)測(cè)分泌的最大優(yōu)點(diǎn)是時(shí)間分辨率高(ms級(jí)), 能監(jiān)測(cè)單個(gè)囊泡的釋放以及囊泡中 的遞質(zhì)含量, 且較膜電容測(cè)量更為直觀。FM143和FM464等是有效的研究分泌活動(dòng)的選擇性膜表面熒光標(biāo)記物,它們?cè)谒嘀袥]有熒光, 當(dāng)它們插入脂質(zhì)膜后則顯示較強(qiáng)的熒光, 囊泡膜胞吐后會(huì)使細(xì)胞表面熒光增加, 而胞吞回收的囊泡因吞進(jìn)細(xì)胞周圍的染料而被熒光標(biāo)記,這樣便能夠?qū)崟r(shí)觀察細(xì)胞的胞吐及胞吞過程。神經(jīng)遞質(zhì)的分泌與細(xì)胞鈣離子濃度緊密偶聯(lián)(與鈣離子濃度的3～4次方成正相關(guān))。 　　2 免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞和分子機(jī)制 　　2amp。絲裂酶原刺激后24 h可使K電流增大。鈣信號(hào)的頻率特性可通過幾種非線性反饋系統(tǒng)來調(diào)控, 如PKC介導(dǎo)的CD3γ亞基的磷酸化負(fù)反饋(可反饋抑制TCR/CD3的功能)、 ca2 信號(hào)放大正反饋(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2 的釋放和同時(shí)發(fā)生的CRAC以及PLC的進(jìn)一步激活)、 ca2 離子的自身負(fù)反饋。人的中性粒白細(xì)胞是成功應(yīng)用wholecell和oncell膜片鉗法進(jìn)行研究的少數(shù)免疫細(xì)胞之一［10］。46。關(guān)于膜融合孔調(diào)控的分子機(jī)制研究還剛剛起步。 　　2amp。46。小囊泡由于其Ca2 閾值高和分泌速率快, 瞬間升高的Ca2 信號(hào)更能有效地觸發(fā)其分泌。 　　最近, Paumet等［23］在RBL2H3肥大細(xì)胞株上對(duì)細(xì)胞胞吐的SNARE分子機(jī)制進(jìn)行了研究, 發(fā)現(xiàn)了幾種SNARE蛋白質(zhì)復(fù)合體的異構(gòu)體表達(dá),其中一種23 kDa的SNAP (SNAP23)對(duì)SNARE的形成非常重要。在抗syntaxin抗體中,只有syntaxin 2抗體可以抑制致密囊泡的釋放, 免疫沉淀印跡的結(jié)果證明在體內(nèi)2個(gè)syntaxin 2和SNAP23結(jié)合形成一個(gè)復(fù)合體。而生長(zhǎng)激素(GH)對(duì)幾乎所有免疫細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、 NK細(xì)胞、 胸腺細(xì)胞等都有促進(jìn)分化和加強(qiáng)功能的作用。內(nèi)容總結(jié)
（1）摘要：細(xì)胞分泌活動(dòng)涉及一系列復(fù)雜的分子活動(dòng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程, 它是許多重要生命活動(dòng)如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、 內(nèi)分泌激素分泌、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等的基礎(chǔ)
（2）另一種方法是通過基因轉(zhuǎn)染方法將熒光基因如綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞中并選擇性地在囊泡中表達(dá),然后用激光掃描共聚焦熒光顯微鏡等檢測(cè)囊泡的運(yùn)動(dòng)過程［5］
（3）區(qū)分不同囊泡動(dòng)力學(xué)特性和Ca2 依賴性有助于了解不同分泌囊泡的分泌調(diào)控機(jī)