分解尿素的細(xì)菌的分離(更新版)
【正文】 從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。 ㈢ .設(shè)置對(duì)照： 第十五頁(yè)，共三十五頁(yè)。第二位同學(xué)統(tǒng)計(jì)的三個(gè)菌落數(shù)相差太大，說(shuō)明操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。 V) M 其中， C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)， V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)， M代表稀釋倍數(shù)。 瓊脂 尿素 葡萄糖 MgSO4`7H2O NaH2PO4 KH2PO4 土壤中分解尿素的細(xì)菌的別離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基： ① 從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類(lèi)？ 固體培養(yǎng)基 ② 從用途看此培養(yǎng)基屬于哪類(lèi)？ ③ 從化學(xué)成分看此培養(yǎng)基屬于哪類(lèi)？ 選擇培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基 第七頁(yè)，共三十五頁(yè)。 一 .研究思路 ㈠ .篩選菌株 ㈡ .統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 ㈢ .設(shè)置對(duì)照 第四頁(yè)，共三十五頁(yè)。 一、課題背景 尿素的利用 尿素 是一種重要的 農(nóng)業(yè)氮肥。 DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒错懯且环N在體外將少量 DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫〔 930C〕的 DNA聚合酶。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 ②為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30—— 300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算出菌落 平均數(shù) ③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的 實(shí)際數(shù)目低 。 原因： ⑴ 土樣不同 ， ⑵ 培養(yǎng)基污染或操作失誤 (或者是混入了其他的含氮物質(zhì) ) 如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明呢？ 第十六頁(yè)，共三十五頁(yè)。 ㈡ .制備培養(yǎng)基： 制備以尿素為唯一氮源的 選擇培養(yǎng)基 。 第二十一頁(yè)，共三十五頁(yè)。 細(xì)菌： 30～ 37℃ 培養(yǎng) 1～ 2d 放線(xiàn)菌： 25～ 28℃ 培養(yǎng) 5～ 7d 霉菌： 25～ 28℃ 的溫度下培養(yǎng) 3～ 4d。 第二十六頁(yè)，共三十五頁(yè)。 〔 〕 70－ 80度熱泉中別離到耐高溫的 TaqDNA聚合酶 5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為 M MM M M5，以 M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值 驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度 ，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類(lèi)最多。 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液〔如雞胚和牛胚浸液〕。結(jié)果預(yù)測(cè)：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，那么證明 A
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