級(jí)碩士高級(jí)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述(更新版)
【正文】 recipitation）免疫沉淀法用于蛋白質(zhì)混合物中特定抗原的定性與定量。細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)物分析法： IL1刺激 T細(xì)胞產(chǎn)生 IL2等。應(yīng)用： 檢測(cè) 免疫缺陷病、觀察腫瘤患 者免疫功能、療效和 預(yù)后。 補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（ ，）：抗體與細(xì)胞表面的原結(jié)合后可激活補(bǔ)體化的經(jīng)典途徑，使細(xì)胞膜損傷甚至溶解，細(xì)胞被殺死后容易著色根據(jù)死細(xì)胞多少可以判斷毒活性的強(qiáng)弱。刺激48~72小時(shí)細(xì)胞 增殖試 驗(yàn)（（ 3摻入法） 摻入法） 原理 原理 ：： 淋巴細(xì)胞被有絲分裂原 或激活后，進(jìn)入細(xì)胞周期進(jìn)行有絲分裂，當(dāng)細(xì) 胞進(jìn)入 S期，細(xì)胞合成 DN明顯增加，在培 養(yǎng)液中加入 標(biāo)記的 合成原料脫氧胸 腺嘧啶核 苷 ()，則 作為合成 的原料被攝入細(xì)胞，摻 入新合成的 中，根據(jù)同位素?fù)饺爰?xì)胞的量則可推測(cè)淋巴細(xì)胞對(duì)刺激物的應(yīng)答水平。免疫標(biāo)記技術(shù)用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗體（或抗原）進(jìn)行抗原 抗體反應(yīng)。 高度特異性 ? 可大量生產(chǎn)，當(dāng)?shù)玫椒€(wěn)定分泌 mAb的雜交瘤細(xì)胞系后，可置液氮中長(zhǎng)期保存，需要時(shí)取出復(fù)蘇，既可在體外培養(yǎng)中收獲 mAb，也可將雜交瘤細(xì)胞接種入同系小鼠腹腔內(nèi)，然后從荷瘤小鼠的腹水中收獲大量 mAb。 ?研究的特色與創(chuàng)新之處：本研究闡述了 XX與肺癌的關(guān)系，并提出 XX可作為肺癌的血清學(xué)診斷標(biāo)志物，研究發(fā)現(xiàn) XX可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，并闡述了其作用機(jī)制。 ?研究的特色與創(chuàng)新之處：主要科學(xué)貢獻(xiàn)。（ ，如能完成可在本周五上交） ?談?wù)勀銓?duì)本次免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的看法。 ? 穿白大衣 。 ? 關(guān)掉手機(jī)或設(shè)置為振動(dòng)狀態(tài) 。） 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) ?應(yīng)用免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法，設(shè)計(jì)與自己專業(yè)的課題。本研究采用人肺癌細(xì)胞，利用流式細(xì)胞術(shù)分析 XX誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞凋亡作用，通過(guò)分析 Caspase3,8,12等確定 XX誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制。但由于多克隆抗體含有針對(duì)多個(gè)抗原表位的抗體成分，也可能包括抗原變性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗體在檢測(cè)變性抗原 ——如采用 Western Blot檢測(cè)蛋白時(shí)，其效果比單克隆抗體更敏感。 純度要求 ?單克隆抗體在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的篩選，因此應(yīng)根據(jù)不同的應(yīng)用目的選擇不同單克隆抗體亞類，如標(biāo)明供 ELISA檢測(cè)用的單克隆抗體，可能不適合Western Blot檢測(cè)。M還可對(duì)同一細(xì)胞的多種參數(shù)（如DNA、R、蛋白質(zhì)和細(xì)胞體積等）進(jìn) 蛋白質(zhì)和細(xì)胞體積等）進(jìn) 行多信息分析，是當(dāng)代生命科學(xué)研究領(lǐng) 行多信息分析，是當(dāng)代生命科學(xué)研究領(lǐng) 域中廣泛使用的一項(xiàng)新技術(shù)。 細(xì)胞 增殖試 驗(yàn)不溶性 是人 細(xì)胞的高效促分裂 原，對(duì) 細(xì)胞無(wú)刺激作用。 的細(xì)胞毒活性是評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的指標(biāo)。生物活性檢測(cè)依賴細(xì)胞株增殖法：某些腫瘤的細(xì)胞株必須依賴于某種細(xì)胞因子才能在 體外增殖，并且增殖程度與細(xì)胞因子含量成正比。?酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA））?放射免疫測(cè)定法放射免疫測(cè)定法 (RIA)?酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法 (ELISPOT)?免疫印跡法免疫印跡法 (Western blot) 放射免疫測(cè)定法(RIA)示意圖 g* AbAg標(biāo)記抗原 特異性抗體 待測(cè)抗原g*+g) 抗原抗體復(fù) 合物分離 和游離從標(biāo)準(zhǔn)曲線上 讀知待測(cè)抗 原含量測(cè)定 和游離 放 射性細(xì)細(xì) 胞胞 因因 子子 的的 檢檢 測(cè)測(cè) 細(xì)胞因子抗體包被的反應(yīng)板 細(xì)胞因子抗體包被的反應(yīng)板 細(xì)胞因子細(xì)胞因子加入底物 加入底物 加入淋巴細(xì)胞加入淋巴細(xì)胞 加入酶標(biāo)細(xì)胞因子抗體 加入酶標(biāo)細(xì)胞因子抗體(ELISPOT)(ELISPOT)分子雜交應(yīng)用細(xì)胞因子核酸探針，通過(guò)分子雜交檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子mRNA的
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