【正文】 9 9 7 ， Fi g 1 4 . 2 2 )滾環(huán)復制 滾環(huán)復制的電鏡照片 ② Hfr F Crosses chromosome Hfr strain integrated F plasmid F plasmid integration Formation of Hfr strain F+ strain Mechanism of Hfr x F Crosses 缺刻螺旋酶 Hfr部分基因組轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移頻率比 F+ F高 1000倍以上，為高頻重組 轉(zhuǎn)移時首先在 oriT開始，然后小部分 F因子，接著染色體基因組，最后是大部分 F因子， Hfr全部基因組轉(zhuǎn)移很難，所以 Hfr F仍為 F細胞。 (二 )細菌接合的三種方式 F plasmid donor cell (F+) F pilus The Fpilus is used for cellcell attachment recipient cell (F) chromosome chromosome ① F+ F Crosses replication and transfer of ssDNA F+ exconjugant F+ Note that the recipient cell bees F+ oriT 胞質(zhì)橋 ① F因子一條單鏈在 oriT（轉(zhuǎn)移和合成位點）打開， 5 ′端通過通道進入受體 ②受體細胞和供體細胞中兩個單鏈采取滾環(huán)復制， F因子全部轉(zhuǎn)移。 Lederberg 和 Tatum將培養(yǎng)過一種營養(yǎng)缺陷型細菌的培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌、過濾，然后加入到另一營養(yǎng)缺陷型菌培養(yǎng)物中。如何判斷兩個基因是不是連鎖關系 ？ ?根據(jù)轉(zhuǎn)化子的產(chǎn)生和供體 DNA的濃度關系進行判斷。小孔自動恢復原狀 . ? 該法適合于 原核細胞和真核細胞。 A. Transformation Transfer of free DNA to a bacterial genome. free DNA free DNA recipient cell general rebination 一般重組 (同源重組 ) Transformant 轉(zhuǎn)化子 chromosome General rebination is not necessary because plasmids have origins of replication transformant free DNA (plasmid) TB Griffith in 1928, 肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化現(xiàn)象 自然轉(zhuǎn)化的原核生物種類 ? 大腸桿菌 ? 肺炎雙球菌 ? 枯草芽孢桿菌 ? 流感嗜血菌 一、轉(zhuǎn)化作用的發(fā)現(xiàn) Griffith轉(zhuǎn)化研究 (1928) 二、轉(zhuǎn)化作用過程 受體細胞感受態(tài)出現(xiàn) 轉(zhuǎn)化因子的吸附和滲入 轉(zhuǎn)化因子的整合 感受態(tài)出現(xiàn) ?感受態(tài) (Competence) ：細菌從周圍環(huán)境吸收 DNA 分子，并且不易被細胞內(nèi)的限制性內(nèi)切酶分解時所處的一種特殊生理狀態(tài)。 感受態(tài)特異蛋白 細胞分泌小蛋白 ,而導致細菌 感受態(tài)的形成 ,在營養(yǎng)缺乏的 饑餓狀態(tài)下，細胞易產(chǎn)生感 受態(tài)因子 在自然轉(zhuǎn)化中感受態(tài)因子與細胞表面 受體相互作用產(chǎn)生自溶素，自溶素可 使細胞表面的 DNA 結(jié)合蛋白和核酸酶 裸露。 ? 共轉(zhuǎn)化頻率可以用共轉(zhuǎn)指數(shù)代表。 異核體和雜合二倍體的排除 A＋ B— A— B＋ A＋ B— A— B＋ A＋ B＋ 異核體 雜合二倍體 單倍重組體 異核體和雜合二倍體的遺傳性狀不穩(wěn)定，在傳代過程中會發(fā)生性狀分離，但事實恰恰相反，原養(yǎng)型菌落的基因型是穩(wěn)定的，證明是單倍重組體。 5 39。因子能專一導入 F細胞使受體成為 F180。 ? 2)在雜交過程中，按照特定時間間隔取樣，用高速攪拌器將雜交的 Hfr和 F分開，涂補于不同選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)。吸附幾分鐘后將感染的細菌稀釋到抗噬菌體血清中以除去游離的噬菌體，接著又稀釋到培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中取樣測定噬菌斑數(shù)。 ? 在噬菌體中最先發(fā)現(xiàn)的突變型有快速溶菌(rapidlysis， r)、寄主范圍 (host range, h)和小形噬菌斑 (minute plaque， m)等。非溶源性細菌接觸溫和噬菌體時可以發(fā)生裂解反應或溶源化反應。 ? 這種噬菌斑是由繁殖到達一定數(shù)量后的少數(shù)溶源性細菌所自發(fā)釋放的噬菌體感染敏感細菌后形成的 。限制缺陷型 r的出斑率是 1，進一步說明出斑率的下降是限制酶作用的結(jié)果。例如：大腸桿菌溫和噬菌體 λ 只能轉(zhuǎn)導大腸桿菌的 gal和 bio基因 E. coliλ噬菌體 gal bio gal bio gal bio gal bio gal bio bio attp attb ? 2） Campbell 1962年提出轉(zhuǎn)導模型 ? 溫和噬菌體 λ 是局限性轉(zhuǎn)導的典型代表，該噬菌體含有一個線狀的雙鏈DNA分子，其二端為互補的 12個核苷酸單鏈 (即粘性末端 cos位點 )，當 λ感染細胞時通過其粘性末端形成環(huán)狀分子。 106 雙重溶原菌 ２ .普遍性轉(zhuǎn)導 （ generalized transduction) １）定義：在噬菌體感染末期，細菌染色體被 核酸酶 斷裂成許多小片段，在裝配成熟噬菌體的過程中，少數(shù)噬菌體錯誤的將相應大小的細菌 DNA包裝形成 轉(zhuǎn)導 噬菌體。并且，每經(jīng)過一次分裂，就受到一次“稀釋”。 將兩個不同營養(yǎng)缺陷型混合培養(yǎng)，使基內(nèi)菌絲融合； 一個菌絲的 部分染色體 進入另一菌絲形成 局部雜合核 。 天藍色鏈霉菌與大腸桿菌致育類型的區(qū)別： 3 ） 大腸桿菌： F+ F育后代為 F+， Hfr F后代 F ， ? 天藍色鏈霉菌： IF UF后代 IF ， NF UF后代 NF，說明 NF染色體轉(zhuǎn)移包括致育因子 SCPI ? 在 NF UF中，以 SCPI整合位點為中心，帶動染色體高頻雙向轉(zhuǎn)移，每次轉(zhuǎn)移都包括 SCPI區(qū)域基因， ? 或者是環(huán)形染色體在 SCPI一端斷裂，從帶有 SCPI一端開始轉(zhuǎn)移。 受體 UF 供體 NF 兩次單交換 實現(xiàn)整合 ?放線菌基因重組 ?天藍色鏈霉菌性別體制 天藍色鏈霉菌與大腸桿菌致育類型的區(qū)別： 遺傳重組 異質(zhì)系產(chǎn)生