【正文】 歸 一 化 液相色譜定量的精密度 精密度的衡量 準(zhǔn)確度的衡量 影響準(zhǔn)確度的因素 校正曲線的檢測(cè)范圍 。 含 量 在 0. 5% ? 2% 的 雜 質(zhì) ，峰 面 積 的 RSD應(yīng) 小 于 5 % 。 （ 2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。 理論塔板數(shù)可達(dá) 8萬(wàn) /米 4. 檢測(cè)器 ? 要求 : 靈敏度高，噪音低，線形范圍寬，響應(yīng)快 , 對(duì)溫度和流速的變化不敏感 ? 檢測(cè)器類(lèi)型 (UVD) (FD) （ ELSD） (RID) (ED) (CD) 1. 紫外 — 可見(jiàn)光度檢測(cè)器： ① 固定波長(zhǎng)： 254nm ， 低壓汞燈 。 使基線穩(wěn)定，提高信噪比。 （一）高效液相基礎(chǔ)知識(shí) 高志國(guó) （ ） 2022年樣品檢測(cè)組操作技能培訓(xùn) ? 色譜法原理與 分類(lèi) ? HPLC的組成 ? HPLC的應(yīng)用 ? HPLC色譜圖名詞 術(shù)語(yǔ) ? HPLC定量分析原理 高效液相色譜基礎(chǔ)知識(shí) ? 什么是色譜法 ? 色譜法溯源 ? Tswett（ 茨維特 )的實(shí)驗(yàn) ? 色譜法原理 ? 色譜法的分類(lèi) 色譜法原理及分類(lèi) ? 色譜法是一種現(xiàn)代的分離分析 方法 ? 1906年正式命名 (見(jiàn)諸文獻(xiàn) ) ? 20世紀(jì) 30年代開(kāi)始廣泛研究和 應(yīng)用 ? 高效液相色譜法的廣泛應(yīng)用始于 20世紀(jì) 70年代 什么是色譜法 ? 100多年前俄國(guó)植物學(xué)家 Tswett(茨維特 )分離植物色素時(shí)采用的實(shí)驗(yàn)方法 ? 他將植物色素的石油醚提取液倒入裝有碳酸鈣的直立玻璃管 ,再加入石油醚使其自由流下 ,結(jié)果色素中各組份互相分離形成各種不同顏色的譜帶 ? Tswett用希臘語(yǔ) chroma(色 )和 graphos(譜 )描述他的實(shí)驗(yàn)方法，即現(xiàn)在的 ? Chromatography(色譜法 ) 色譜法 (Chromatography)溯源 ? 一根長(zhǎng)玻璃管填充碳酸鈣 的顆粒 ? 將碾碎之植物葉片的提取液灌入柱 中 ? 隨著石油醚提取液向下流過(guò)柱子，現(xiàn)出展寬的 色帶 ? 分離出不同的 化合物 Chromato 顏色 Graphy 圖象 Tswett（ 茨 維特 )的 實(shí)驗(yàn) ? 是 利用混合物中各組份在不同的兩相中溶解 ,分配 ,吸附等化學(xué) 作用性能 的差異 ,當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí) ,使各組分在兩相中反復(fù)多次 受到上述 各作用力而達(dá)到相互 分離 ? 兩相 中有一相是固定的 ,叫作固定相 (Stationary Phase) ? 有 一相 是 流動(dòng)的 ,稱(chēng)為流動(dòng)相 (Mobile Phase),流動(dòng)相又叫洗脫劑 ,溶劑 色譜法原理 ? 相 (Phase): 物理化學(xué) 術(shù)語(yǔ) ,特指在某一系統(tǒng)中 ,具有相同 成 分 及相同物理、 化學(xué)性質(zhì) 的均勻物質(zhì)部分。 防止氣泡引起尖峰。 柱溫一般為室溫或接近室溫 勻漿法填充柱： 將填料制成懸浮液 ， 在高壓泵的作用下壓入裝有洗脫 液的色譜柱 。 ? 伏安計(jì)、安培計(jì)、庫(kù)侖計(jì)和電導(dǎo)計(jì)等 , 首選安培計(jì) ? 可用于在工作電極的工作電壓范圍能還原或氧化的物質(zhì) ? 電極表面易中毒 溫 度： 10～ 30℃ ； 相對(duì)濕度： 80％； 最好是恒溫、恒濕 遠(yuǎn)離高電磁干擾、高振動(dòng)設(shè)備，有良好的通風(fēng)設(shè)施 HPLC的日常維護(hù)與保養(yǎng) HPLC的日常操作條件： ? 1 Alliance液相色譜系統(tǒng)日常維護(hù)：開(kāi)機(jī)程序 ? 2 Alliance液相色譜系統(tǒng)日常維護(hù)：開(kāi)機(jī)程序 HPLC的日常操作 選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題： （ 1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 對(duì) 照 除 另 有 規(guī) 定 外 ，通 常 含 量 低 于 0 .5 % 的 雜 質(zhì) ， 峰 面 積 的相 對(duì)標(biāo) 準(zhǔn)偏 差（ RSD)應(yīng) 小 于 10