【正文】 四節(jié) 微生物的菌種選育 ? 在微生物工業(yè)應(yīng)用中 ， 微生物菌種工作主要包括以下四方面： ? ① 菌種的分離篩選：挑選符合生產(chǎn)要求的菌種 ， 這是選種工作的任務(wù) 。 二、真核微生物的基因重組（二）準(zhǔn)性生殖 ? 準(zhǔn)性生殖是一種類似于有性生殖但比它更為原始的一種生殖方式 。 溶源轉(zhuǎn)變與轉(zhuǎn)導(dǎo)在本質(zhì)上的不同 ， 首先是它的溫和噬菌體不攜帶有任何供體菌的基因 ， 其次這種噬菌體是正常的完整的 ， 而不是異常情況下產(chǎn)生的缺陷型噬菌體 。 2． 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) 由溫和噬菌體侵染而形成的某一溶源細(xì)菌群被誘導(dǎo)裂解時 ， 其中極少數(shù)個體的 DNA 可能與噬菌體 DNA 發(fā)生若干特定基因的交換 ， 從而被整合到噬菌體的基因組上 ， 當(dāng)該噬菌體再次感染受體細(xì)菌時 ， 就使受體細(xì)菌獲得了這一特定遺傳性狀的現(xiàn)象 ， 稱為局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) ，它的轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率為 106。 供體菌的 DNA 片段稱為轉(zhuǎn)化因子 。 也稱切除修復(fù)作用 。 ? 吖啶類染料及其化合物是移碼突變的有效誘變劑 ， 例如三氨基吖啶 ， 吖啶黃 ，吖啶橙 ， 5氨基吖啶 。 ① 堿基類似物作用 ， 引起堿基配對的錯誤 。 （ 5） 誘變性 。 ? （ 4） 抗性突變型 。 二、遺傳物質(zhì)在細(xì)胞中的存在方式 （ 一 ） 細(xì)胞水平 ? 從細(xì)胞水平來看 ， 細(xì)胞核；除此之外 ， 在細(xì)胞質(zhì)中存在著一些能自我復(fù)制的遺傳物質(zhì) ， 一般稱這部分 DNA 為質(zhì)粒 。 ? 先用含有 35S 和 32P 兩種元素的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，然后讓 T2 噬菌體侵染培養(yǎng)后的大腸桿菌，從而使 T2 噬菌體打上 35S 和 32P 的標(biāo)記。 ? 關(guān)于微生物基因重組的基本原理 （ 方式和特點(diǎn) ） 。 而優(yōu)良菌種的選育是在微生物遺傳變異的基礎(chǔ)上進(jìn)行的 。 ? 關(guān)于營養(yǎng)缺陷型突變菌株的篩選方法和具體應(yīng)用 。 煙草花葉病毒的拆開與重組實(shí)驗 ? 1956 年 ， 美國的法朗克 康勒特 (FraenkelConrat) ? 將煙草花葉病毒拆成 RNA(因該病毒不含 DNA)和蛋白質(zhì) ， 并分別對煙草進(jìn)行感染實(shí)驗； ? 結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有 RNA能感染煙草 ， 并在感染后的寄主中分離到完整的具蛋白質(zhì)外殼的煙草花葉病毒 。 ? 四種核苷酸 ， 按其排列組合方式的不同 ， 可編出三聯(lián)密碼 43＝ 64個 ，用于決定組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸順序 。 二、基因突變的特點(diǎn) 整個生物界 ， 由于它們遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)是相同的 ， 因此顯示在遺傳變異的本質(zhì)上都具有相同的規(guī)律 ， 這在基因突變的水平上尤其突出 。 三 、基因突變的機(jī)理 （一）誘發(fā)突變及其機(jī)理 1 堿基對的置換 ⑴ 直接引起置換的誘變劑 （亞硝酸類、烷化劑類） ⑵ 間接引起置換的誘變劑 （堿基類似物） 2 移碼突變 3 染色體畸變 （二）自發(fā)突變的機(jī)制 1 背景輻射和環(huán)境中多因素低劑量的誘變效應(yīng) 2 微生物自身代謝產(chǎn)物的誘變效應(yīng) 3 互變異構(gòu)效應(yīng) 4 環(huán)狀突出效應(yīng) 堿基對的置換 ? 堿基對的置換可分成兩個亞類：一類是 DNA 鏈上的一個嘌呤被另一個嘌呤或是一個嘧啶被另一個嘧啶所置換 ，稱為轉(zhuǎn)換；另一類是 DNA 鏈上的一個嘌呤被另一個嘧啶或是一個嘧啶被另一個嘌呤所置換 ， 稱為顛換 ? A： T T： A A T ? ? ? C： G G： C C G ? 雙鏈 DNA 單鏈 DNA ? （實(shí)線代表轉(zhuǎn)換，虛線代表顛換） 直接引起置換的誘變劑 ? 亞硝酸是一種對含有氨基的堿基對直接作用而誘發(fā)堿基對轉(zhuǎn)換的誘變劑 。它們的作用是通過活細(xì)胞的代謝活動摻入到 DNA 分子中后，引起堿基對的置換，因此是間接的。 染色體畸變 ? 染色體畸變是指由誘變劑引起 DNA 分子的大損傷 ， 它包括染色體結(jié)構(gòu)上的缺失 、 重復(fù) 、 易位及倒位等 。 ? 重組是分子水平上的概念 ， 可以理解成是遺傳物質(zhì)分子水平上的雜交 ， 而一般所說的雜交是細(xì)胞水平上的概念 。 ?④ 進(jìn)入受體細(xì)胞的 DNA 單鏈與受體菌染色體組上同源區(qū)段配對，而受體菌染色體組的相應(yīng)單鏈片段被切除，并被進(jìn)入受體細(xì)胞的 DNA 單鏈所取代，于是形成了雜種 DNA 區(qū)段； ?⑤ 受體菌染色體進(jìn)行復(fù)制，其中雜種區(qū)段被分離成兩個，一個恢復(fù)，一個形成一個轉(zhuǎn)化子。發(fā)現(xiàn)能夠進(jìn)行接合現(xiàn)象的大腸桿菌有雄性與雌性之分，而決定它們性別的是由是否存在 F 因子所決定。 二、真核微生物的基因重組（一）有性雜交 ? 在微生物的有性繁殖過程中 ， 不同的性細(xì)胞間的接合 ， 并隨之發(fā)生染色體的重組 ， 從而產(chǎn)生新遺傳型后代的現(xiàn)象 ， 稱有性雜交 。 ? 2． 形成異核體 兩個單倍體細(xì)胞經(jīng)聯(lián)結(jié)后 ， 使原有的兩個單倍體核集中到同一個細(xì)胞中 ， 形成雙相的異核體 。 ? ④ 退化菌種的復(fù)壯： 如果發(fā)現(xiàn)菌種的生產(chǎn)性能下降 ， 就要設(shè)法使它恢復(fù) ， 這便是菌種復(fù)壯工作的任務(wù) 。 ? 對作為載體的細(xì)菌質(zhì)粒或噬菌體 DNA可采用與處理目的基因同一種類的限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行處理 ， 使其形成并暴露出與目的基因相應(yīng)的粘性末端 。 第五節(jié) 微生物菌種的保藏和復(fù)壯 一、菌種的保藏 ? 1． 低溫保藏法 斜面菌種直接放入 0～ 4℃ 冰箱中保藏 ， 保存時間不宜過長 ， 一般為 3～ 6個月； 用 20℃ 以下的超低溫冰箱或干冰 、 液氮 （ 195℃ ） 凍結(jié)保藏 ， 長達(dá)數(shù)