【正文】 。mA給予NP后的第三腦室室周區(qū)；B 給予LfNP后的第三腦室室周區(qū)；C 給予NP后的大腦皮質(zhì)；D給予LfNP后的大腦皮質(zhì)；E 給予NP后的紋狀體區(qū)域；F給予LfNP后的紋狀體區(qū)域Fig. 5 Distribution of NP and Lf–NP in mouse brain after . 60 mg/kg nanoparticles in mouse caudal vein, visualized using the FITC filter 1h. The magnification bar is 50 181。,它具有多種內(nèi)皮細(xì)胞的性質(zhì):表達(dá)von Willebrand因子,具有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體并可以內(nèi)吞乙?；牡兔芏戎鞍椎萚20]。有文獻(xiàn)報(bào)道在某些病理?xiàng)l件下（如帕金森病和Alzheimer’s?。㎜f受體在腦內(nèi)的表達(dá)量會(huì)增加[2325]，雖然這種現(xiàn)象的機(jī)理還沒(méi)有明確，我們卻可以借助Lf的這種性質(zhì)利用LfNP更好的治療這些疾病在進(jìn)行新型藥物傳遞系統(tǒng)開(kāi)發(fā)過(guò)程中，一個(gè)非常重要的方面就評(píng)價(jià)其生物相容性和對(duì)于靶細(xì)胞的毒性，對(duì)于腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)更是如此。感謝復(fù)旦大學(xué)的趙慧玲老師和戴維林老師指導(dǎo)進(jìn)行了TEM和XPS的分析。NNERDAL B. Mammalian lactoferrin receptors: structure and function [J]. Cell Mol Life Sci, 2005, (62):25602575.[14] HUANG R Q, KE W L, QU Y H, et al. Characterization of lactoferrin receptor in brain endothelial capillary cells and mouse brain [J]. J Biomed Sci, 2007, 14:121128.[15] JI B, MAEDA J, HIGUCHI M. Pharmacokinetics and brain uptake of lactoferrin in rats [J]. Life Sci, 2006, 78:851855.[16] OLIVIER J C. Drug transport to brain with targeted nanoparticles [J]. NeuroRx174。此外，PEG的毒性也很低[28]。因此。 B periventricular region of the third ventricle after LfNP administration。這說(shuō)明LfNP通過(guò)不同于NP的機(jī)理轉(zhuǎn)運(yùn)入腦。C incubation for 30 min 圖3 37 186。C孵育1h后的攝取情況；B10 μg/ml Lf–NP和NP在37 186。LfNP的攝取量高于NP，提示由于Lf的引入LfNP可能存在不同于NP的內(nèi)吞機(jī)理。 E NP stained with antiLf primary antibody and 10nm colloidal gold labeled rabbit antigoat IgG sequentially. LfNP腦內(nèi)遞藥特性和生物相容性的體外評(píng)價(jià)，各時(shí)間點(diǎn)LfNP的攝取量均高于NP。%；透射電鏡下可以清楚的觀察到，LfNP表面標(biāo)記有黑色的膠體金顆粒（圖1C），而未加入山羊抗Lf抗體孵育的LfNP（圖1D）和NP表面（圖1E）未見(jiàn)膠體金顆粒，證實(shí)該納米粒表面連接有Lf。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)采集3只小鼠樣品。用 1% TritonX 100 400 μl溶解細(xì)胞。 LfNP腦內(nèi)遞藥特性和生物相容性的體外評(píng)價(jià) ，置于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)1天。2. 實(shí)驗(yàn)方法 NP和LfNP的制備及表征馬來(lái)酰亞胺基聚乙二醇聚乳酸和甲氧基聚乙二醇聚乳酸1：9混合以復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備NP [19]?，F(xiàn)已證明多種生物BBB表面均存在Lf受體（LfR），能夠介導(dǎo)Lf轉(zhuǎn)運(yùn)[1214]。局部侵入給藥（腦內(nèi)直接注射/滴注）易引發(fā)感染，手術(shù)費(fèi)用高且有效遞藥面積有限[3]。結(jié)論 LfNP能顯著增加藥物的腦內(nèi)遞送且具有較好的生物相容性，有望作為一種新型的腦內(nèi)遞送系統(tǒng)輸送蛋白多肽和基因等大分子藥物入腦。采用透射電鏡技術(shù)，免疫電鏡技術(shù)，動(dòng)態(tài)光散射分析，X射線光電子能譜分析及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)LfNP的形態(tài),粒徑和表面Lf的連接進(jìn)行鑒定和表征。 結(jié)果 制得的LfNP形態(tài)圓整，粒徑在110 nm左右。 Coumarin6。目前最具代表性的受體介導(dǎo)腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)OX–26結(jié)合的免疫脂質(zhì)體成功用于小分子藥物及基因藥物的腦內(nèi)遞送，證實(shí)了受體介導(dǎo)途徑優(yōu)良的腦內(nèi)遞藥能力[6, 7]。采用聚乙二醇聚乳酸納米粒與Lf連接是基于納米粒相對(duì)于脂質(zhì)體的諸多優(yōu)點(diǎn)：具有較好的穩(wěn)定性，處方中輔料種類較少，制備相對(duì)簡(jiǎn)單，具有一定的緩釋能力便于慢性疾病的治療[16]。成初乳前有機(jī)相中加入香豆素6，制備載香豆素6的 NP和LfNP，以Sepharose CL4B除去未包封的香豆素6。分別加入樣品濃度為0－ mg/ml 的Lf、NP和LfNP的PBS溶液，37℃孵育4 h，溶液用110 μl 新鮮的培養(yǎng)液（含CCK8 10 μl）替換，37℃孵育4 h。由各時(shí)間點(diǎn)三個(gè)樣本的平均藥物濃度經(jīng)劑量校正后對(duì)相應(yīng)的時(shí)間作圖，得藥時(shí)曲線，梯形法計(jì)算藥時(shí)曲線下面積（AUC0t）。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明載香豆素6的LfNP和NP在pH pH %，因此，香豆素6可以作為熒光探針示蹤納米粒。C，呈溫度依賴性（圖2A）。C，給予相同濃度的LfNP和NP后， 細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度隨著時(shí)間的推移而增強(qiáng)，在30min，1h和2h， LfNP組的熒光均顯著強(qiáng)于NP組。C and 4 186。mA/I h；D/L h；B/J NP孵育1 h；E/M LfNP孵育1 h；C/K NP孵育2 h；F/N LfNP孵育2 hFig. 3 Fluorescent microscopy photographs of cells exposed to 15 μg/ml Lf–NP and NP at 37 186。Lf的引入增加了納米粒在腦內(nèi)的濃集，這可能是連接在表面的Lf通過(guò)其在BBB上的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)增加了納米粒入腦。 E striatum region after NP administration F striatum region after LfNP administration圖6小鼠尾靜脈注射60 mg/kg納米粒后血和腦中的香豆素6的藥時(shí)曲線，n=3Fig. 6 Blood and brain concentrationtime profiles of coumarin6 following . injection of coumarin6 loaded Lf–NP and NP at a dose of 60 mg/kg in mice. n=3.4. 討論粒徑大小直接影響微粒系統(tǒng)被腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)吞的能力，通常用于腦內(nèi)遞藥的納米粒和脂質(zhì)體的粒徑都在200nm以下。Garr233。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果表明，給予NP，Lf和LfNP后，各組細(xì)胞活力無(wú)顯著差異，體外證實(shí)了LfNP良好的安