【正文】 細(xì)定位 ； （ 該部分研究內(nèi)容已完成 ） 2） BmNPV LEF11 蛋白 過表達(dá)對宿主細(xì)胞 蛋白表達(dá)影響 ① 利用 LEF11 蛋白過表達(dá)后 ， 以 LEF11 為誘餌蛋白， 通過檢測蛋白條帶變化鑒定宿主細(xì)胞蛋白表達(dá)量差異的 變化。同時(shí)，以上關(guān)鍵技術(shù)所涉及的儀器本單位都能提供和滿足。 本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處。結(jié)果顯示：感染后 12 h，在細(xì)胞核內(nèi)可以檢測到LEF11 以聚集的形式存在。本研究室是我國蠶學(xué)學(xué)科唯一的國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，并有特種經(jīng)濟(jì)動物飼養(yǎng)全國重點(diǎn)學(xué)科為支持。如果獲得專項(xiàng)資金資助，我將履行項(xiàng)目負(fù)責(zé)人職責(zé)，嚴(yán)格遵守有關(guān)規(guī)定，認(rèn)真開展工作，按時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。 簽字： 日期： 五、 導(dǎo)師推薦意見 (請學(xué)生導(dǎo)師填寫意見，并承擔(dān)監(jiān)督本項(xiàng)目執(zhí)行的責(zé)任 ) 導(dǎo)師（簽字）： 日期： 六、 學(xué)院（所、中心）審查意見 已按有關(guān)規(guī)定和申報(bào)通知要求對申請人的資格和申請書內(nèi)容進(jìn)行了審核。擁有核酸分析、蛋白質(zhì)分離純化、細(xì)胞培養(yǎng)與染色體研究、轉(zhuǎn)基因動物、微生物和生物信息分析的專用實(shí) 驗(yàn)室，擁有 遺傳分析儀、飛行時(shí)間質(zhì)譜儀、蛋白質(zhì)雙向電泳系統(tǒng)、顯微注射儀、Dige Enabled Typhoon、 流式細(xì)胞儀 、 SNP 分析儀和激光共聚焦顯微鏡等各類儀器設(shè)備 3100 余臺 /套，設(shè)備總價(jià)值 4000 萬元 。結(jié)合 LEF11 表達(dá)時(shí)相，我們推測 LEF11 不直接參與病毒 DNA 復(fù)制起始，可能調(diào)控基因組復(fù)制起始后的擴(kuò)大（圖 1）。因此， 研究方法具有特色 。（相關(guān)數(shù)據(jù)已經(jīng)發(fā)表在病毒學(xué)權(quán)威雜志 Virus Research 上）。 3） lef11 基因 相互作用蛋白研究 通過免疫 熒光 和 免疫共沉淀 技術(shù)， 驗(yàn)證與 LEF11 共定位的宿主蛋白及相互作用的蛋白。 3） LEF11 相互作用蛋白研究 通過 免疫熒光共定位 LEF11 與篩選的宿主蛋白并通過免疫共沉淀等試驗(yàn)技術(shù) 鑒定與 LEF11 相互作用蛋白。 先前對苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒 （ AcMNPV）的 lef11研究表明，其對病毒 DNA復(fù)制、病毒基因的轉(zhuǎn)錄和病毒的增殖都有影響[7]。本課題通過研究 lef11 基因 與宿主相互作用蛋白研究， 初步揭示 BmNPV 病毒侵染增值的分子機(jī)制，對進(jìn)一步深化研究病毒宿主相互作用提空理論研究具有重要意義。 主要研究內(nèi)容 (限 200字 ) LEF11細(xì)胞定位研究 通過免疫熒光技術(shù)鑒定家蠶核型多角體病毒 LEF11蛋白定位 在 細(xì)胞 中的定位位置 。 通過 免疫熒光驗(yàn)證 LEF11與相互作用蛋白的共定位，同時(shí)通過 免疫共沉淀驗(yàn)證相互作用蛋白。 先前 Rollie J. Clem課題組證實(shí)桿狀病毒晚期表達(dá)因子 LEF7可以抑制 宿主細(xì)胞 H2AX蛋白磷酸化，劫持宿主細(xì)胞的 DDR反應(yīng)，最終調(diào)控病毒大規(guī)模復(fù)制 [4]。 西南大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目計(jì)劃任務(wù)書（學(xué)生項(xiàng)目） 6 鑒于此，本項(xiàng)目擬以 鑒定 家蠶核型多角體病毒 LEF11蛋白 與宿主相互作用蛋白 為研究對象，采用生物信息學(xué)和分子生物學(xué)等手段，鑒定 LEF11核定位 ，通過免疫共沉淀技術(shù)篩選并鑒定與 LEF11相互作用蛋白 ， 最用驗(yàn)證與 LEF11相互作用的 宿主蛋白 。 3）通過篩選與 LEF11 相互 作用蛋白，鑒定 LEF11 與宿主相互用蛋白 。它決定了是否可以找到 LEF11 互作的宿主蛋白，是研究 lef11 基因?qū)λ拗骷?xì)胞調(diào)控的前提條件； 2) 穩(wěn)定高效的家蠶基因過表達(dá)技術(shù)。 2） 本項(xiàng)目承擔(dān)單位為 “家蠶基因組學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ”，本 實(shí)驗(yàn)室完成了家蠶全基因組測序 和 家蠶 EST 數(shù)據(jù)庫構(gòu)建，可為項(xiàng)目的實(shí)施提供了信息的支撐；西南大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目計(jì)劃任務(wù)書（學(xué)生項(xiàng)目） 9 本研究室有強(qiáng)大的基因組信息分析平臺、家蠶細(xì)胞系平臺、蛋白質(zhì)組分析技術(shù)和病毒基因敲除等關(guān)鍵技術(shù)的技術(shù)平臺，可為本項(xiàng)目的實(shí)施提供了技術(shù)保證。 年度研究計(jì)劃、預(yù)期研究結(jié)果及成果提供形式。 為了精確 驗(yàn)證 LEF11 過表達(dá)后宿主蛋白 變化 ，我們利用 αLEF11 抗體 標(biāo)記了 LEF11 蛋白表達(dá)量 ，結(jié)果表明：LEF11 過表達(dá)后， 宿主細(xì)胞高效表達(dá)了目的蛋白，為進(jìn)一步分析鑒定了基礎(chǔ)（ 圖2）。從事家蠶病理