【正文】 接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線系列梯度稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器菌體獲取在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體能否用于計數(shù)不能計數(shù)可以計數(shù),但是操作復(fù)雜,需涂布多個平板共同點都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面,以獲得單細(xì)胞菌落,達(dá)到分離純化微生物的目的,也可用于觀察菌落特征:(1)原理:此法利用特定的細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板,在顯微鏡下計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。(2)系列梯度稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結(jié)果如圖所示: (3)計算公式:每克樣品中的菌株數(shù)=稀釋倍數(shù)(4)計數(shù)結(jié)果:由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落,計算結(jié)果比實際值偏小。 ()提示:統(tǒng)計的菌落數(shù)目還要經(jīng)過計算才能代表樣品中的活菌數(shù)目,而且數(shù)目偏低,因為當(dāng)兩個或多個細(xì)菌連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。④為了防止雜菌污染,從酒精中取出的涂布器應(yīng)該直接在酒精燈火焰上充分燃燒滅菌。(2)樣品稀釋:一般選用1__101__101__106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②涂布器滅菌:取出浸在酒精中的涂布器,放在火焰上燃燒,酒精燃盡后,冷卻涂布器。:在微生物學(xué)中,允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。 如果要從土壤中分離出固氮微生物,那么對培養(yǎng)基有什么要求呢?提示:固氮微生物能利用空氣中的N2,因此培養(yǎng)基中不應(yīng)添加氮源,這樣就只有固氮微生物才能生存。 在進(jìn)行稀釋操作時,需要在酒精燈火焰附近操作嗎?解釋原因。②選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),在同一稀釋度下,應(yīng)至少對3個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù),然后求平均值。 ()提示:應(yīng)該設(shè)置未接種的平板和接種在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的平板作為對照。分解尿素的細(xì)菌可以將尿素分解成NH3,導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH升高。(2)涂布平板時。 (2020(2)實驗中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2107 個/mL,若要在每個平板上涂布100 μL 稀釋后的菌液,且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個,則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋__________倍。【解析】本題主要考查培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用、無菌技術(shù)和微生物的分離與計數(shù)。200=104(倍)。棗莊高二檢測)篩選是分離和培養(yǎng)微生物新類型常用的手段,下列有關(guān)技術(shù)中不能篩選成功的是 (　　)(普通培養(yǎng)基)中,篩選大腸桿菌,篩選能夠分解尿素的微生物,篩選能分解纖維素的微生物,篩選抗鹽突變體的微生物【解析】選A。采用平板計數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個細(xì)菌形成的,所以往往少于實際的活菌數(shù),C正確。②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”,需設(shè)置完全培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)進(jìn)行接種培養(yǎng),觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目,進(jìn)行對比得出結(jié)論。_________________________________________。(2)培養(yǎng)基種類的判斷:富集培養(yǎng)目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度,所使用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。答案:(1)pH　高壓蒸汽(濕熱)　(2)選擇　增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數(shù)量)　(3)酚紅　106　偏低(4)平板劃線　5【誤區(qū)警示】從土壤中分離微生物的注意事項(1)一般步驟:土壤取樣、選擇(富集)培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。遷移】　尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料,但若不經(jīng)細(xì)菌的分解,就不能更好地被植物利用。土樣不同、培養(yǎng)基被污染和操作失誤都會影響實驗結(jié)果,對照的設(shè)置對實驗結(jié)果沒有影響。在實驗過程中,應(yīng)遵循平行重復(fù)原則,同一稀釋倍數(shù)下至少涂布三個平板,④正確。純化時,要進(jìn)行無菌操作,需要在酒精燈火焰旁接種,避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基,③正確。醋酸菌在有氧條件下能利用酒精產(chǎn)生醋酸,所以適宜濃度的酒精可以使醋酸菌活化,D項正確。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純,然后進(jìn)行數(shù)量的測定。稀釋倍數(shù)103104105106107菌落數(shù)/個1號平板4783672772652號平板4963542612083號平板509332254293(2)若研究尿素分解菌的群體生長規(guī)律,可采用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌。將103～ mL加入固體培養(yǎng)基上,用稀釋涂布平板法將菌液用涂布器涂布到固體培養(yǎng)基上。若以一個大方格( mm3)有25個中方格的計數(shù)板為例進(jìn)行計算,設(shè)5個中方格中總菌數(shù)為45,菌液稀釋倍數(shù)為102 ,那么原菌液的菌群密度=455247。,故培養(yǎng)基中的氮源為尿素,故培養(yǎng)基中尿素為無機氮(2)瘤胃中的尿素分解菌能將尿素分解成________,其中的________可用于合成微生物蛋白,該蛋白質(zhì)是反芻動物的優(yōu)質(zhì)氮源?！窘馕觥?1)尿素既可以作為尿素分解菌的氮源,也可以作為其碳源,葡萄糖在培養(yǎng)基中并不是越多越好,A項錯誤。 答案:(1)C　(2)CO2和NH3　NH3　(3)選擇　酚紅　脲酶　(4)氨會使瘤胃液pH增大 25