20xx年醫(yī)學專題—動物細胞工程制藥的研究進展(完整版)
【正文】 。中國倉鼠卵巢細胞( C H O ) 作為宿主細胞表達的外源蛋白最接近其天然構象，是生物制藥最為理想的表達系統(tǒng)，但也存在一些問題，如表達量低、大規(guī)模培養(yǎng)困難、生產成本高昂。目前用于動物細胞體外培養(yǎng)的生物反應器有機械攪拌式、氣升式、中空纖維式、回轉生物反應器等。1998 年，Rohl 等用非靜息期胎兒或纖維細胞成功克隆出 3只健康、同類的攜帶外源標記基因的轉基因克隆[17]。2006 年 6 月，由美國 Genzyme 轉基因公司研制成功的世界上第一個利用轉基因動物乳腺生物反應器生產的基因工程蛋白藥 物 棗 重 組 人 抗 凝 血 酶 Ⅲ （ 商 品 名 ：ATryn 牋）已經獲準上市[12]。目前單克隆抗體技術已趨成熟，許多產品已經進入產業(yè)化的生產階段。轉化細胞系具有長期培養(yǎng)，倍增時間短，對培養(yǎng)條件和生長因子等要求較低的特點，適于大規(guī)模工業(yè)化生產。7 0 年代以后，大量研究工作證實了二倍體細胞的安全性, WI38 是第一個生產脊髓灰質炎滅活疫苗的二倍體細胞系。本文就動物細胞工程制藥所采用的細胞種類及相關技術等進行綜述。動物細胞工程制藥的研究進展 劉星星摘 要：動物細胞工程制藥是動物細胞技術在生物制藥工業(yè)方面的應用。 （一）生產用動物細胞 目前用于生物制藥的動物細胞有4類，即原代細胞、二倍體細胞系、融合的或重組的工程細胞系和轉化細胞系。二倍體細胞系一般從動物胚胎組織中獲取，有明顯的貼壁和接觸抑制特性，有正常細胞的核型，一般可傳代培養(yǎng) 5 0 代，且無致瘤性，現在C C L 已被廣泛用于人用治療性藥物的生產，但仍不是理想的生產細胞系。在生物制藥中，可通過改造宿主細胞特性，如延長細胞周期．提高工程細胞原始表達水平等來提高藥物的產量。此外利用細胞融合技術可以生產各種免疫疫苗，腫瘤細胞 / 樹突狀細胞融合疫苗是近年來國內外惡性腫瘤免疫治療研究的熱點, 在各種動物模型及病人身上觀察到腫瘤的消退[911]。 我國自 1998 年在國家“863 ”計劃中將“轉基因動物乳腺生物反應器”作為重大研究項目以來，也取得了一些較好的成績。Schnieke 等[18]用此法成功克隆出 3 只攜帶有人凝血因子Ｉ X 基因轉染綿羊早期胎兒成纖維細胞，以該細胞系為供體移植到去核卵母細胞中，經過電和化學刺激后，將卵母細胞植入假孕母綿羊體內發(fā)育，獲得這 3 只綿羊，這 3 只綿羊能高水平地表達人凝血因子Ｉ X （125 μ g/ml ）。國外占主流優(yōu)勢的是攪拌式生物反應器懸浮培養(yǎng)，為提高細胞的產率，可采用流加或灌注培養(yǎng)及微載體培養(yǎng)等相關技術[2021]。我們應從工程細胞本身著手，對細胞本身的生理特征進行改造，除了要求目的蛋白的表達量高外，必須適應無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，具有即抗細胞衰老凋亡能力； 、個性化的細胞培養(yǎng)基，包括低血清培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基； ；、提高產品質量和安全性；“動物藥廠”計劃，盡快實現轉基因動物乳腺生物反應器的產業(yè)化；，主要是轉基因表達產物及產品的分離純化，在提高產品的純度和產量同時，降低成本。隨著生命科學的發(fā)展和細胞工程技術研究的深入，將會有更多的細胞工程藥物出現，具有廣闊的應用前景。美國 G i b c o 公司建立的流加懸浮培養(yǎng) rCHO 表達 r β
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