【正文】 離的 和 （可能歸入 ）及其實驗室保存菌株、 、 、 和 的血小板凝聚活力。不過在研究益生菌安全性時，仍需要更深入地研究前面所提及的細胞表面成分及酶的作用。 2 材料與方法 材料試劑與儀器設(shè)備 原料和試劑 發(fā)酵菌種： 嗜 酸乳桿菌 （ Lactobacillus acidophilus）。優(yōu)選的碳源或氮源之間的復(fù)合效果采用復(fù)合配比實驗確定最佳復(fù)合氮源或氮源。 菌液吸光值（ OD600）的測定 用 721分光光度計在 600nm條件下比色，測定菌液的吸光值。一般情況下，在 24h 內(nèi)儀器不需再標(biāo)定。 注意：配制 3溶液所用的水，應(yīng)預(yù)先煮沸（ 15~30） min，除去溶解的二氧化碳。用 mol/L的 NaOH溶液滴定至淺（微）紅色且 30秒不褪色。樣品如果有包裝，應(yīng)用 75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。 5．稀釋液：樣品稀釋液主要是滅菌生理鹽水，有的采用磷酸鹽緩沖液（或 ％蛋白胨水），后者對食品已受損傷的細菌細胞有一定的保護作用。 2．傾注用培養(yǎng)基應(yīng)在 46℃水浴內(nèi)保溫，溫度過高會影響細菌生長，過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻。5．為了避免食品中的微小顆?；蚺嗷械碾s質(zhì)與細菌菌落發(fā)生混淆，不易分辨，可同時作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板，不經(jīng)培養(yǎng)，而于 4℃環(huán)境中放置，以便計數(shù)時作對照觀察。（ 7）檢測時一定要使平皿完全暴露于空氣中。如均大于 300，則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如有片狀菌落生長，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個平板的菌落數(shù)乘 2代表全平板的菌落數(shù)。 氮源優(yōu)化實驗結(jié)果如表 24 時間 /h 名稱 魚粉代牛肉膏 魚粉代酵母 魚粉代藥蛋白 胰蛋白代牛肉膏 胰蛋白代酵母 胰蛋白代藥蛋白 KNO3 代牛肉膏 KNO3 代酵母 KNO3 代藥蛋白 時間 /h 名稱 月示蛋白代牛肉膏 月示蛋白代酵母 月示蛋白代藥蛋白 酪蛋白代牛肉膏 酪蛋白代代酵母 酪蛋白代藥蛋白 大豆蛋白代牛肉膏 （稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） 大豆蛋白代酵母 大豆蛋白代藥蛋白 （稀釋 10 倍） （ 稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） （稀釋 10 倍） 硫酸銨代牛肉膏 硫酸銨代酵母 硫酸銨代藥蛋白 從實驗結(jié)果得知，最優(yōu)的氮源為大豆蛋白胨代替牛肉膏。北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 1999． [17] Sandine W E． Role of Lactobacillus in the intestinal tract． Food Prot， 1979， 42： 259— 262. [18] Nilson K M， Dulie A H， Duthie A E et a1． An ideal vehicle for Lactobacillus acidophilus． Dairy Field． 1983， 164： 139. [19] 郭本恒．益生菌．北京：化學(xué)工業(yè)出版社， 20xx． [20] 陳駒聲．乳品加工技術(shù)．北京：中國輕工業(yè)出版社， 20xx. [21] 趙瑞香 .嗜酸乳桿菌及其應(yīng)用研究 .北京：科學(xué)出版社， 20xx： 174179. [22] Gregor Deid et bacteria inference prevent infection?Trend in Microbiology,9（ 9）： 424. [23] 郭本恒．益生菌．北京：化學(xué)工業(yè)出版社， 20xx． [24] 郭興華 . — 基礎(chǔ)與應(yīng)用 .北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社 . [25] 伍時華， 黃翠姬 ，黃瑤，易弋，廖蘭 ． 微生物指導(dǎo)實驗書 [M] ． 廣西工學(xué)院生化系：廣西工學(xué)院生化系， 2936． 。 接種量的確定 實驗結(jié)果如表 35 時間 /h 接種量 /% 2 4 6 實驗結(jié)果表明，隨著接種量的增加， OD值也逐漸變大，當(dāng)接種量為 2%時最大 OD值為 ；接種量為 4%時，最大 OD值為 。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。如菌落數(shù)有的大于 300，有的又小于 30，但均不在 30~300之間，則應(yīng)以最接近 300或 30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之?？捎萌庋塾^察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。注意事項：（ 1）操作要快而準(zhǔn)，包括材料、加樣、倒培養(yǎng) 基。傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一，從 12~20ml 不等，一般以 15ml 較為適宜，平板過厚可影響觀察，太薄又易于干裂。 （二）傾注培養(yǎng) 1．操作方法：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計，選擇 2~3 個適宜稀釋度，分別在制10 倍遞增稀釋的同時，以吸取該稀釋度的吸管移取 1ml 稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做兩個平皿。瓊脂平板在工作臺暴露 15 分鐘，每個平板不得超過 15 個菌落。 菌落計數(shù) （一）樣品的處理和稀釋： 1．操作方法：以無菌操作取菌液 1ml，放于 9mL 滅菌生理鹽水試管內(nèi)，經(jīng)充分振要或研磨制成 1： 10 的均勻稀釋液。 菌液滴定酸度（176。具體操作步驟如下： ( l ) 被測溶液 與標(biāo)定溶液溫度相同時，測量步聚如下： a) 用蒸餾水清洗電極頭部，再用被測溶液清洗一次： b) 把電極浸入被測溶液中，用玻璃棒攪拌溶液，使其均勻，在顯示屏上讀出溶液的 pH 值。 操作步驟 開機前的準(zhǔn)備 a） 將電極梗旋入電極梗固定座中； b） 將電極夾插入電極梗中； c） 將 pH 復(fù)合電極安裝在電極夾上； d） 將 E201C 型 pH 復(fù)合電極下端的電極保護套套拔下，并且拉下電極上端的橡皮套使其露出上端小孔； e) 用蒸餾水清洗電極。 可選的氮源有： 培養(yǎng)基 不同 碳氮源 之間搭配 的優(yōu)化 固定鹽溶液的量，對選出的碳源及氮源進行正交實驗，確定最優(yōu)碳氮源之比。 實驗方法 發(fā)酵菌種的活化 [25] （ 1） MRS培養(yǎng)基配制： 大豆蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、酵母浸膏 5g、葡萄糖20g、吐溫 80 1g、 磷酸氫二鉀 2g、乙酸鈉 5g、檸檬三銨 2g、硫酸鎂 、硫酸錳，加蒸餾水至 1000mL， 1N HCl調(diào) PH為 ， 121℃ 15分鐘滅菌。如果這 種 聯(lián)系被證明確實存在，那么目前被認為是益生菌必要特征的對人腸道細胞的粘附性，就需要慎重考慮了。實驗室保存的 16 株 中的 8 株以及所有從臨床感染性內(nèi)心肌炎樣本分離到的 5 株 都具有血小板凝聚活性，這 種凝聚作用與其細胞表面存在的某些蛋白質(zhì)有關(guān)。方法之一是檢測這些是否會將食物成分或宿主的分泌物轉(zhuǎn)化成不利于宿主的次級有害物。因此，在評估益生菌的安全性時，考慮如下的問題可能更切實可行，即考慮對宿主的入侵是否引發(fā)嚴(yán)重后果以及入侵后對宿主產(chǎn)生的作用等。 Donohue 和 Salmine 等認為可采用體外試驗、動物試驗和臨床試驗等方法來評估益生菌的安全性，根據(jù)這幾項指標(biāo)，少數(shù)目前應(yīng)用的益生菌能滿足安全性標(biāo)準(zhǔn)。 （ 4） 開發(fā)與各種益生菌因子配合的產(chǎn)品。 （ 2） 進一步加強對益生菌作用機理的研究，以指導(dǎo)益生菌制品的研制、生產(chǎn)及使用。故低成本、方便儲存和使用的劑型仍然是今后的主要研究內(nèi)容。另外，開發(fā)與保護稀有菌種，也是生物保護的重大問題。 嗜酸乳桿菌 研究開發(fā)建議 [21] 菌種資源的開發(fā)與保護 益生菌市場的核心問題是菌種的選擇和菌種的活性。國外嗜酸乳桿菌制劑的研究較為普及，產(chǎn)品種類繁多。與前兩種菌結(jié)合使用，既能獲得良好風(fēng)味，又能發(fā)揮其生理功能使發(fā)酵乳具有很好的益生作用。公元前 641年就有“酸奶 的記載，諾貝爾醫(yī)學(xué)獎得主梅其尼科夫在 20世紀(jì)初就提出 “ 酸奶長壽說 ” 。有關(guān)乳酸菌降低膽固 醇的機理尚不清楚。 20世紀(jì)二三十年代，人們用能在人體胃腸道內(nèi)存活的嗜酸乳桿菌制備酸奶并進行臨床嘗試，發(fā)現(xiàn)對便秘、痢疾等疾病產(chǎn)生暫時的緩解作用[4]，嗜酸乳桿菌其健康促進特性如下： (1)生物屏障作用 [5] 嗜酸乳桿菌與腸粘膜上皮細胞相互作用、密切結(jié)合，構(gòu)成了生物屏障；同時，通過其自身及其代謝物與其它細菌之間的相互作用，調(diào)整菌群之間的關(guān)系，維持和保證菌群最佳優(yōu)勢組合以及組合的穩(wěn)定，阻止了致病菌的定殖和入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生長及其毒素的粘附引 [6]。結(jié)果表明： 1 緒論 嗜酸 乳桿菌 概述 嗜酸乳桿菌（ Lactobacillus acidophilus） 屬革蘭氏陽性無芽孢桿菌科的乳桿菌屬，其 DNA 中G+