【正文】 Species T(U) C A G Total 55 Euforsius pieli 28S 87 Aneugmenus frontalis 28S 173 Aneugmenus pteridii 175Neostrombceros nipponicus 91 Megabeleses liriodendrovorax 58Taxonus attenatus 28S 63 Linomorpha flava 28S 153 Allantus nigrocaeruleus 178 Abeleses rufotibialis 219 Beleses nigroapicalic Runaria reductadownload Avg. 1095 1082 1061 1069 1072 1029 1091 1113 1117 1081 1220 由表 2 統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知 28S rRNA 平均堿基組成為： T： %； C： %； A： %；G： %，堿基組成沒(méi)有明顯 T\A 的偏好。分子數(shù)據(jù)有極強(qiáng)的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，是客觀、真實(shí)、可量化的，利用分子數(shù)據(jù)可以彌補(bǔ)形態(tài)學(xué)上的不足。從論文的選題、實(shí)驗(yàn)操作、研究方法、結(jié)果分析、直至論文的審定都飽含著她眾多的辛勞。A（萬(wàn)kWh）shg1Pshg1PshfPb b39。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 QA9wkxFyeQ^! dj sXuyUP2kNXpRWXm Aamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。qYpEh5pDx2zVkumamp。 QA9wkxFyeQ^! djsXuy UP2kNXpRWXm Aamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm6X4NGpP$vSTTamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwc^vR9amp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwc^vR9CpbK! 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z89Am YWpazadNuKNamp。ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。ae39。在此，特向老師致以崇高的敬意和衷心的感謝 ! 本文自開(kāi)題至成文，除受老師指導(dǎo)外，特別要感謝 在我們的實(shí)驗(yàn)操作、論文撰寫及生活各個(gè)方面的幫助。 本文研究的類群為葉蜂總科昆蟲(chóng)一小部分種類，用 NJ 法對(duì) 28S DNA 基因的部分片段以進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育重建，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同方法對(duì)同一序列構(gòu)建的分子系統(tǒng)樹(shù)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)不太相同。 28S rDNA 分子系統(tǒng)樹(shù) 6 3 L i n o m o r p h a f l a v a 2 8 S 1 5 3 A l l a n t u s n i g r o c a e r u l e u s 5 8 Ta x o n u s a t t e n a t u s 2 8 S 1 7 8 A b e l e s e s r u f o t i b i a l i s 2 1 9 B e l e s e s n i g r o a p i c a l i s 9 1 M e g a b e l e s e s l i r i o d e n d r o v o r a x 1 7 5 N e o s t r o m b o c e r o s n i p p o n i c u s 5 5 E u f o r s i u s p i e l i 2 8 S 8 7 A n e u g m e n u s f r o n t a l i s 2 8 S 1 7 3 A n e u g m e n u s p t e r i d i i R u n a r i a r e d u c t a d o w n l o a d ) 14 圖 1:28S rDNA 基因部分序列經(jīng) MEGA 分析產(chǎn)生 NJ 樹(shù)擴(kuò)樸結(jié)構(gòu)圖。 NJ、 ME 分析法建立的發(fā)育樹(shù)在 中完成， MP 法建立的發(fā)育樹(shù)在 中完成。 (3) Mega [32] MEGA 是 Molecular Evolutionary Geics Analysis 的簡(jiǎn)稱，由 Sudhir Kumar 等人編寫是一個(gè)用于序列分析、比較統(tǒng)計(jì) 和系統(tǒng)發(fā)育分析的免費(fèi)軟件包，其操作界面清晰簡(jiǎn)單，主要功能包括核酸和蛋白質(zhì)序列的多序列比對(duì)、對(duì)比對(duì)序列的統(tǒng)計(jì)分析，估算進(jìn)化距離 (geic distance)和標(biāo)準(zhǔn)誤、和系統(tǒng)樹(shù)的推斷和檢驗(yàn) 10 等 [32]。 12 用 40ul TE Buffer 重溶所得基因組 DNA， 然后 ， 置 － 20℃保存?zhèn)溆?。巰基乙醇溶液，輕輕搖勻。 主要溶液 DNA 提取常規(guī)溶液配制： TE 溶液（ ）： 10mmol/L TrisHCl， （ ， 1 mmol/L EDTA（ ） 2CTAB 100ml 提取液： CTAB 2g， Nacl ， TrisHcl（ ） ， EDTA（ ） ， PVP（ 1%） 1g。 2 材料與方法 標(biāo)本及來(lái)源 本研究提取了葉蜂科昆蟲(chóng) 10 個(gè)樣品的基因組 DNA，標(biāo)本是中南林業(yè)科技大學(xué)昆蟲(chóng)系統(tǒng)與進(jìn)化生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室人員在野外采集的近三年標(biāo)本， 100% 酒精浸泡，﹣ 20℃保存。 2020 年 Schulmeister[1]提 5 出了葉蜂總科的系統(tǒng)關(guān)系 : （葉蜂科（不包括殘青葉蜂科） + 錘角葉蜂科 + 松葉蜂科）是單系群，并且作為（三節(jié)葉蜂科 + 筒腹葉蜂科）的姐妹群，顯然是葉蜂科的并系， 而去除殘青葉蜂科外的其余葉蜂科類群是單系 [17]。這些方法依賴校正距離系數(shù)的準(zhǔn)確性。對(duì) DNA 序列而言，理論上每個(gè)位點(diǎn)均可以構(gòu)建三種可能的譜系樹(shù)，然而并非所有的位點(diǎn)都可用于重建系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。 分子系統(tǒng)樹(shù)構(gòu)建方法 分子系統(tǒng)學(xué)的主要目的是根據(jù)分子數(shù)據(jù)構(gòu)建系統(tǒng)樹(shù)，已有很多統(tǒng)計(jì)學(xué)方法可以用于分析分子數(shù)據(jù)來(lái)重建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，通常使用的方法分為 4 類：距離法、簡(jiǎn)約法、似然法以及貝葉斯法。胡婧 [12]年以網(wǎng)翅蝗科的 6 種昆蟲(chóng)作為材料，通過(guò)特異性引物，對(duì) mt 16S rRNA 基因序列進(jìn)行了擴(kuò)增。對(duì)細(xì)胞色素 b 在電子傳遞鏈中的復(fù)雜功能至今還不清楚。而 mtDNA 在進(jìn)化研究中非常有用，一直應(yīng)用于種群結(jié)構(gòu)和基因流、雜交、生物地理學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育的研究 [5 ]。 COI 基因是 mtDNA13 個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因之一。葉蜂科是葉蜂總科最大的科，大概有 7000 余種，已知 5000 種以上，中國(guó)種類超過(guò) 300屬 2000 種 ,這個(gè)類群對(duì)農(nóng)、林害蟲(chóng)種群控制和保持生態(tài)平衡起到一種關(guān)鍵性的自然調(diào)控作用。 傳統(tǒng)的昆蟲(chóng)系統(tǒng)學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育研究主要依賴形態(tài)解剖特征、生物學(xué)性狀以及生物地理學(xué)信息等，這些依據(jù)在大多數(shù)情況下能清晰的反映一個(gè)物種的分類地位或系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。這些亞基多為跨膜蛋白，跨過(guò)線粒體的內(nèi)膜，亞基 I 和 11 組成酶的催化核心。 核基因序列 生物 的性狀基本由核基因決定。對(duì)進(jìn)化過(guò)程中不同生物體的 DNA 序列的核苷酸替換率的比較研究發(fā)現(xiàn)， mtDNA 基因組的替換率比核 DNA 高 5～ 10 倍。 現(xiàn)有的研究結(jié)果表明，快 速進(jìn)化的基因或者核苷酸區(qū)段（如線粒體 DNA、線粒體的 rRNA 的 IGS 區(qū)域）適合于種內(nèi)或近緣種的系統(tǒng)發(fā)育分析；慢速進(jìn)化的基因（如核糖體 DNA 及其產(chǎn)物 rRNA）適合于遠(yuǎn)緣種類或高級(jí)階元的系統(tǒng)發(fā)育。一對(duì)序列間的距離是分支長(zhǎng)度的總和。以核酸替代模型為基礎(chǔ)， ML法需要確定每個(gè)分支在一定時(shí)間間隔內(nèi)核苷酸發(fā)生特定替代變化的概率。計(jì)算機(jī)模擬研究表明：在進(jìn)化速率恒定的前提下，最大似然法的結(jié)果質(zhì)量則依賴序列進(jìn)化模式的確定。 中國(guó)葉蜂研究的工作在新中國(guó)成立以后繁榮起來(lái)，葉蜂研究的工作者越來(lái)越多，中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所的朱弘復(fù)、王林瑤、袁德成，中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院的黃孝運(yùn)、周淑芷、肖剛?cè)?、吳?jiān)、張真等先后報(bào)道了中國(guó)一些葉蜂的新種 [1827]。提取的 DNA 和殘骸標(biāo)本均保存于中南林業(yè)科技大學(xué)昆蟲(chóng)系統(tǒng)與進(jìn)化實(shí)驗(yàn)室。 實(shí)驗(yàn)方法 基因組 DNA 的提取 本文采用 CTAB 法和試劑盒法提取葉峰基因組 DNA。 7 在上清液中加入 4