人類胎盤促乳激素與人類促乳激素穿插嵌合重組蛋白(完整版)
【正文】 2023年 1月 31日星期二 下午 3時(shí) 56分 17秒 15:56: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 目前研究結(jié)果 完成之項(xiàng)目 ? DNA shuffling之試驗(yàn)方法已建立，由 OSC及CAS的重組試驗(yàn)可得到有嵌合突變的株。 – hPRL(I)30[BamHI] :5’ CGCGGATCCAACATGAACATAAAGGATCG 339。 200bp 目前研究結(jié)果 1. DNA shuffling試驗(yàn) ? 而在將 DNA片段重新組合的PCR試驗(yàn)，則先以 Taq聚合脢做試驗(yàn)，但卻無(wú)法正確生合成所要的 DNA。 – 參考各文獻(xiàn)的方法，以 gel filtration 來(lái)分析與 hPRL receptor之競(jìng)爭(zhēng)力。 PL gene cloning PRL gene cloning PRLR gene cloning In vitro assay Binding constant Yeast two hybrid DNA shuffling PL PRL Mutant gene 工作項(xiàng)目及實(shí)施方法 (hPRL receptor)基因分子選殖 ? 為了進(jìn)行重組促乳激素的篩選 ， 本實(shí)驗(yàn)室必頇有促乳激素接受體基因以表現(xiàn)其蛋白質(zhì) 。 ER以外的 receptor ? 在一些報(bào)告中指出促乳激素 (PRL)可能為對(duì)抗乳癌的另一個(gè)目標(biāo)。 IL6在體外試驗(yàn)上也表現(xiàn)出抑制鼠的胎盤促乳激素的分泌量。顯示促乳激素與細(xì)胞動(dòng)素亦有關(guān)連，但其機(jī)制尚不清楚。 – 會(huì)過(guò)量表現(xiàn)促乳激素的基因轉(zhuǎn)殖鼠在 11至 15月齡即出現(xiàn)乳癌腫瘤 —PRL有 影響 – 經(jīng)由蛋白質(zhì)水解酵素水解的促乳激素片段，可表現(xiàn)出有抑制血管新生的作用 —PRL有 影響 研究背景 乳癌與乳癌用藥 —接 受體 ? PRL對(duì)抗乳癌的接受體研究： ? Dopamine receptor – 但由最近的研究報(bào)告指出其與乳癌的相關(guān)性小，所以抑制 Dopamine receptor對(duì)治療乳癌可能是無(wú)效的 。 PCR cloning vector 做藍(lán)白篩選 限制酵素來(lái)剪切 DNA定序確認(rèn) 選殖入表現(xiàn)穿梭載體 如： pQE30 check 表現(xiàn)選殖出之促乳激素接受體 工作項(xiàng)目及實(shí)施方法 (hPRL)之基因分子選殖與蛋白質(zhì)表現(xiàn) ? 為了進(jìn)行重組促乳激素的篩選 ， 以及測(cè)試將來(lái)進(jìn)行 shuffling重組時(shí)的 PCR條件 ， 本實(shí)驗(yàn)室亦進(jìn)行促乳激素基因選殖 ， 並可將其表現(xiàn)之蛋白質(zhì)與市售隻促乳激素蛋白質(zhì)加以比較 。 ? 對(duì) hPRL receptor有較大競(jìng)爭(zhēng)力者，可能為抗乳癌藥物 candidate。 ? 後經(jīng)參考 paper上以辨識(shí)度較高的聚合脢做效果較好，則改以rTth聚合脢做重組的 PCR，則可得到重組的 DNA。 – hPRL (II)24[HindIII] :5’ CCCAAGCTTGCAATGGAACGGATC 3’ ? 試驗(yàn)不同 DNA聚合脢 ， 決定以 super Therm聚合脢做 PCR ? 選殖入 pBluescript II SK+ vector， 經(jīng)轉(zhuǎn)型入XL1Blue E. Coli， 萃出其 plasmid， 由瓊脂膠體電泳為約 4kb相當(dāng)於 insert+vector大小的 plasmid。 ? 對(duì) OSC及突變酵素之產(chǎn)物的 TLC及 HPLC方法確立。 2023年 1月 下午 3時(shí) 56分 :56January 31, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 2023年 1月 31日星期二 下午 3時(shí) 56分 17秒 15:56: 1楚塞三湘接，荊門九派通。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 2023年 1月 31日星期二 下午 3時(shí) 56分 17秒 15:56: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過(guò)于提升自我。 2023年 1月 31日星
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