高二生物血紅蛋白的提取和分離(完整版)
【正文】 質(zhì)過(guò)程的動(dòng)畫(huà)演示 （二）緩沖溶液 : 在一定的范圍內(nèi)，凡是能夠抵制 外加少量強(qiáng) 酸或強(qiáng)堿 的影響使原來(lái)溶液 PH值基本保持 不變的混 合溶液。 血紅蛋白的特點(diǎn)： ： 選用一定的 物理或化學(xué) 的方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的 生物大分子 。 2. 主要原理： ①凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理 ②電泳法分離樣品的原理 ③緩沖溶液的組成和作用機(jī)理 課題重點(diǎn)： 凝膠色譜法的原理和方法 課題難點(diǎn)： ①樣品的處理 ②色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。② 而相對(duì)分子量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。 ： ① 許多重要的生物大分子，如多肽、 核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的 PH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。 ： SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性 。 ② 洗滌操作： 采集血樣。 甲苯層 （ 無(wú)色透明 ） 白色薄層固體 紅色透明液體 雜質(zhì)沉淀層 （ 暗紅色 ） 試管中溶液層次 (4)透 析： ① 過(guò)程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12小時(shí)。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ① 凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12小時(shí) 。 （在分離過(guò)程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說(shuō)明色譜柱制作成功） ⑥ 注意： 正確的加樣操作： 不要觸及并破壞凝膠面。這使血紅蛋白的分離過(guò)程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。如果色帶均勻、狹窄、平整，說(shuō)明凝膠色譜柱的性能良好。 A白細(xì)胞 B血小板 C紅細(xì)胞 D淋巴細(xì)胞 6．為防止血液凝固，在采血容器中要預(yù)先加入抗凝血?jiǎng)? ）。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出； 如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說(shuō)明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到 血紅蛋白溶液 ，即 :樣品的處理；再經(jīng)過(guò)透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后 通過(guò)凝膠色譜法 將相對(duì)分子質(zhì)量較大的 雜質(zhì)蛋白除去 ，即 :樣品的純化；最后經(jīng) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 進(jìn)行純度鑒定。 使吸管管口
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1