世界上最完善最詳細的神經(jīng)元原代培養(yǎng)完全黃金版(完整版)
【正文】 很難吹打下來神經(jīng)元，被迫多次吹打，造成神經(jīng)元大量死亡；2 血管膜一部分細胞會混入原代培養(yǎng)中，這些細胞往往會分裂，導致你的培養(yǎng)成果根本不能用。從處死老鼠到大腦被剝離出這段是人就會做，我就不多說了。關(guān)于POLYLYS包被，我們是包被30分鐘，吸干晾過夜，然后洗兩次，或者只洗一次但是要30分鐘接著晾干。注意注意：一切操作都在冰浴的液體中，所以要多準備冰袋。在解剖大腦時候，有人用hank39。所以，如果你在neurobasal里添加抗生素，記得用量只要標準量的一半。Invitrogen/GIBCO 無血清培養(yǎng)基neurobasal(neurbasalA)被認為是最標準，最好的培養(yǎng)基。胎鼠就要胎鼠，新生鼠就要新生鼠，不能混淆。世界上最完善最詳細的神經(jīng)元原代培養(yǎng)完全黃金版 [精華]序言：國內(nèi)外關(guān)于原代培養(yǎng)有很多文獻，不幸的是，沒有一篇是詳細的，沒有一篇解答過why.為了讓大家少走彎路，根據(jù)我殺過3000只老鼠的經(jīng)驗，我把我這幾年摸索的經(jīng)驗和大家分享，請求多投幾票得幾個叮當。因為新生鼠有一些受體，在培養(yǎng)的工作中失去功能，會不能再生，比如NMDA受體。需要的添加劑為 B27和谷氨酰胺。另一個添加成分谷氨酰胺溶液不穩(wěn)定，所以每次用時候要現(xiàn)配現(xiàn)加。s，在其中解剖。（中途冰袋沒了的是豬頭）。由于neurobasal培養(yǎng)法相當成熟，所以沒必要用難固定的膠原。不過有一點要注意，不管你是用皮層還是海馬，不要取一個分離一個，而是要快速把所有胎鼠大腦都迅速取出放到冰預冷的培養(yǎng)液中。可以說，剝離的不好不干凈，實驗就是失敗的，不可能得到高質(zhì)量的神經(jīng)元。確認后，海馬片段被移入一個小燒杯里，加少量培養(yǎng)液，放置冰上準備消化，7：實驗成敗的關(guān)鍵之二：消化。另外要用的是DNA酶。這樣消化液在培養(yǎng)皿里形成淺而廣闊的一層，均勻分布著組織塊，從而徹底解決了上述問題。消化過后可以用1ml血清終止反應(yīng)（我是用馬血清，便宜，但是切忌不要用國產(chǎn)血清，污染幾率很大）。輕柔吹打是細胞成活關(guān)鍵！要用進口槍頭，國產(chǎn)的有時候會過細。這個分步吹打的過程保證了每一個單細胞都避免了過度吹打，而分布吹打又保證了盡可能多的收獲單細胞。為了克服這些，筆者查了一些文獻，經(jīng)過反復測試采用了nycoprep低轉(zhuǎn)速密度梯度離心。如果實驗者技術(shù)精湛，也可以不用這步，但是用這步會效果更好。首先，神經(jīng)元互相接觸的幾率小，難以存活和成熟。注意一定要進口的。很多paper是1小時就換液，理由是膠質(zhì)細胞貼壁差，會除去。然后，注意：細胞請再用沒有加血清的，種板時候用的培養(yǎng)液清洗一次，也是要輕微搖晃，來進一步去除細胞碎片，從而得到良好的細胞生長環(huán)境。成熟的神經(jīng)元10um的谷氨酸即可照成細胞凋亡，而谷氨酸受體46天就開始表達，如果胎鼠神經(jīng)元經(jīng)歷了mmol濃度的培養(yǎng)液中的谷氨酸還不被毒死，那就是怪事了。對于一些雷到我的，我只能再次說，請收集足夠的背景文章在去選擇合適材料，please do it carefully and seriously!祝大家都能培養(yǎng)出健康漂亮的神經(jīng)元，歡迎大家來問問題（如果是美女的話，給個電話我會很開心）聲明，除了最后一幅圖是來自別的文獻，前面所有的經(jīng)驗都是我的原創(chuàng)，從無數(shù)失敗總結(jié)出的我認為最完美的神經(jīng)原代培養(yǎng)。如果您買到的不是這個密度，請換算一下。做原代培養(yǎng)的，首先就是收集大量背景文獻，看看你的相關(guān)要求的國際公認的做
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