【正文】 揭示其原因,但事實(shí)是越老的細(xì)胞,其基因的表達(dá)就越受到嚴(yán)格的制約,或者說喪失功能或不表現(xiàn)基因的功能越多,所以應(yīng)盡量選取幼嫩的植物組織作為培養(yǎng)的研究材料。植物激素在調(diào)節(jié)細(xì)胞脫分化和再分化中起主要作用。(1902 年)，德國植物學(xué)家G近年何首烏市場價(jià)格一直穩(wěn)中有升，供不應(yīng)求，很多地方出現(xiàn)了有價(jià)無貨的局面。何首烏傳統(tǒng)用藥的經(jīng)驗(yàn)是用其塊根，其功效有補(bǔ)肝、益脾、養(yǎng)血祛風(fēng)，常用于肝腎陰虧，須發(fā)早白，血虛頭暈等癥，亦能治瘡癢、疥癬等皮膚病。而植物組織培養(yǎng)具有生長周期短，繁殖率高，成本低，利于工廠化等諸多優(yōu)點(diǎn)，因此利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)——植物組織培養(yǎng)，能夠很好的保護(hù)何首烏資源。在超凈臺(tái)上按無菌操作要求（超凈臺(tái)先用紫外燈滅菌30min），用70%酒精棉球擦手與器具外壁。注意的是MS鐵鹽母液應(yīng)用棕色磨口瓶裝，并使其在室溫下充分反應(yīng)后，再轉(zhuǎn)入4℃冰箱中保存。待稍微冷卻，按每瓶20ml培養(yǎng)基分裝到錐形瓶內(nèi)，再用耐高溫高壓的塑料膜或牛皮紙封口，最后用線或橡皮筋扎緊，準(zhǔn)備滅菌。整個(gè)滅菌過程的具體操作步驟如下]:（1）加水 高壓蒸汽滅菌鍋，將里面的滅菌桶取出，向鍋內(nèi)加水，使水面與底架平齊。（6）降壓 停止加熱，讓其自然降壓。查閱資料后，得出兩種激素的使用范圍和大致的最佳濃度，根據(jù)查閱數(shù)據(jù)將激素配制成不同的培養(yǎng)基類型。 （3）％升汞水 用于分離材料的表面消毒。四周墻壁用磚砌，石灰粉刷，地面鋪水泥，設(shè)有通氣窗，最好有調(diào)溫調(diào)濕裝置，并嚴(yán)格做好消毒滅菌。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)（）得到實(shí)驗(yàn)愈傷組織的出愈率。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果知，第3組實(shí)驗(yàn)的出愈率最好，與其他幾組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相差較大。：（1），在這次實(shí)驗(yàn)中，褐變（）現(xiàn)象比較嚴(yán)重，每個(gè)培養(yǎng)基類型中都有褐變的發(fā)生，且大部分的褐變率較高。也出現(xiàn)少數(shù)細(xì)菌（）污染，表現(xiàn)為白色，表面濕潤光滑的粘稠物。大部分實(shí)驗(yàn)組污染率低或者未被污染。此外，還不會(huì)損傷材料，影響細(xì)胞的生長。這種培養(yǎng)基中的無機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例比較合適，足以滿足植物細(xì)胞在營養(yǎng)上和生理上的需要。將消毒的葉組織轉(zhuǎn)入到鋪有無菌濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，并用無菌濾紙吸干水分，上表皮朝上平放或豎插在MS培養(yǎng)基上。（2） 外植體制備時(shí)，由于葉塊機(jī)械損傷嚴(yán)重，與空氣的接觸面多。（2） 在實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中，有原本產(chǎn)生愈傷組織，在一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)有菌落出現(xiàn)，可能為外植體內(nèi)殺菌不徹底。接種工具、材料不要與酒精燈、超凈工作臺(tái)鐵網(wǎng)面、臺(tái)面接觸。第3組實(shí)驗(yàn)組生長勢最好。、溫度等的不同，愈傷組織的發(fā)生時(shí)間和生長存在差異。另外，要感謝學(xué)院的各位領(lǐng)導(dǎo)與老師對我的教導(dǎo)與幫助。感謝我的大學(xué)同學(xué)，四年來我們一起學(xué)習(xí)、探討、互相切磋、共同進(jìn)步，在論文寫作中互相幫助。2004[12] 崔映宇，李焰焰．何首烏進(jìn)展研究[J]．阜陽師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004[13] 譚穎然．何首烏的抗衰老作用機(jī)制探討[J]．湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004[14] 龔玉蓮．張玉葵，張雪云豬祖勝，曾小龍．何首烏愈傷組織的誘導(dǎo)[J]．生物技術(shù)，2004 [15] 楊丹，黃慧珍．組織條件對何首烏愈傷組織誘導(dǎo)及生長的影響[J]．曲阜師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2004[16] 許愛霞，張振明，葛斌，等．何首烏多糖對氧自由基及抗氧化酶活性的作用研究[J]．中國藥師，2005[17] 張嬡英，翟靜，孫凌云，等．何首烏提取物對大鼠腦缺血在灌注損傷的保護(hù)作用[J]．中國臨床康復(fù)，2005[18] 王凌暉．何首烏野生種質(zhì)資源地理變異與種源初步選擇[D]．南京林業(yè)大學(xué)，2005[19] 呂麗爽，湯堅(jiān)，何其儻．何首烏中二苯乙烯苷的制備及抗氧化機(jī)理的的研究[D]．無錫：江南大學(xué)，2006[20] 盧隆杰，盧蘇．林下何首烏栽培技術(shù)[J]．四川農(nóng)業(yè)科技，2007[21] 于憲遠(yuǎn)．何首烏的生長特性和栽培要點(diǎn)[J]．上海蔬菜，2009[22] 謝嵐．何首烏及二苯乙烯苷的進(jìn)展研究[J]．天津藥學(xué)，2010[23] 趙云峰，席長發(fā)．何首烏葉在動(dòng)物營養(yǎng)中的應(yīng)用[J]．四川奇牧獸醫(yī)，2010致 謝 在我的論文的寫作及修改過程中，通過查閱資料，使我更多的了解何首烏的相關(guān)問題，受益匪淺。本研究培養(yǎng)基與外植體污染嚴(yán)重。接種人員接種時(shí)用酒精棉擦手或用濃度為75％ 的酒精噴灑雙手，接種時(shí)避免說話，接種的材料、工具不能超出工作臺(tái)面，接種人員身體應(yīng)盡量遠(yuǎn)離臺(tái)面。（4） 培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)用具、接種工具可能滅菌時(shí)不徹底，導(dǎo)致殘留一些雜菌，發(fā)生培養(yǎng)過程中染菌。（3） 實(shí)驗(yàn)接種時(shí)，有一段時(shí)間完全暴露在空氣中，更易酚類的氧化而產(chǎn)生褐變。 實(shí)驗(yàn)褐變的影響因素主要有外植體、培養(yǎng)基、pH值、培養(yǎng)條件等。與其它培養(yǎng)基的基本成分相比，MS培養(yǎng)基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的明顯特點(diǎn)。 常用消毒劑的使用濃度及消毒效果的比較滅菌劑使用濃度消毒時(shí)間/min去除的難易效果酒精70%～75%～2易好過氧化氫10%～12%5～10最易好漂白粉飽和溶液5～30易很好次氯酸鈣9%～10%5～30易很好次氯酸鈉%～2%5～30易很好氯化汞%～%3～10較難最好抗菌素4～50mg/L30～60中較好，由于氯化汞雖然消毒效果最好，但其有很強(qiáng)的毒性，且不易去除，所以根據(jù)實(shí)際考慮，在本次研究中采用次氯酸鈉作為滅菌劑。2 外植體的預(yù)處理 外植體需要先進(jìn)行預(yù)處理才能接種。，實(shí)驗(yàn)組有一半以上出現(xiàn)污染情況。綜合圖中其他幾組比較得出，該褐變率偶然性較低。故，用第3組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)即2,4D 1mg/L和6BA 。 不同類型培養(yǎng)基何首烏葉片的出愈率500102030405060708090100123456789培養(yǎng)基類型出愈率（%）：（1）在整個(gè)研究中第3組培養(yǎng)基出愈率最高，%。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析在相同的培養(yǎng)條件下，不同激素濃度對愈傷組織的產(chǎn)生和生長影響不同。 用于接種針或其他金屬用具的滅菌，可直接在酒精燈火焰上燒紅。為避免接種過程中污染雜菌，接種工作要在無菌室或接種箱中進(jìn)行。最后待將滅菌鍋冷卻后，把滅菌鍋內(nèi)的水排放干凈。（3）密封 加蓋，將排氣軟管插入滅菌鍋的排氣管內(nèi)。將準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基裝入高壓滅菌鍋20～30min，然后取出平放在實(shí)驗(yàn)架上冷卻。激素母液2,4D（, mg/L）擴(kuò)大100倍各配制1000ml倒入磨口試劑瓶中放入4℃冰箱中待用；6BA按使用濃度（,）擴(kuò)大100倍各配制1000ml，倒入磨口試劑瓶中，放在4℃冰箱中待用。用解剖刀將葉片切成規(guī)整的5mm5 mm的小葉塊，在完成一次切割后，將解剖刀和小鑷子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精燈焰上灼燒滅菌之后放回原處，以便待冷卻后下一切割再用（棄去開始一片和最后一片）。主要設(shè)備：手提式不銹鋼蒸汽滅菌鍋 型號(hào)：YX280B 接種臺(tái) 型號(hào)：DH500AB 冰箱 型號(hào)：BCD2425 實(shí)驗(yàn)材料的采集2011年3月底，在攀枝花學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院植物園采集何首烏葉片。近年來， 隨著科學(xué)進(jìn)步的不斷發(fā)展，何首烏的用途迅速拓寬，該品不但被眾多中成藥企業(yè)看好，同時(shí)亦是化工和保健品的重要生產(chǎn)原料。通過組織培養(yǎng)等手段進(jìn)行何首烏的栽培與繁殖，能達(dá)到快速繁殖的目的，以滿足市場上的需要。研究的領(lǐng)域從植物生理學(xué)科逐漸擴(kuò)展到細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、園藝學(xué)、育種學(xué)等學(xué)科。培養(yǎng)的植物組織與細(xì)胞在經(jīng)過脫分化和再分化再生成新的植物體過程中，特別是再分化時(shí)，可經(jīng)過兩個(gè)途徑，一是由愈傷組織的部分細(xì)胞先分化產(chǎn)生芽（或根），再在另一培養(yǎng)基上產(chǎn)生根（或芽），形成一個(gè)完整植株，因?yàn)檠亢透际侵参锏钠鞴偎赃@一過程叫器官發(fā)生途徑。、脫分化與再分化當(dāng)把一個(gè)已經(jīng)失去分裂能力,處于分化成熟和分裂靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞置于特定的增殖培養(yǎng)基上時(shí),它首先發(fā)生的變化是回復(fù)到分生性狀態(tài),這一狀態(tài)包括由溶酶體的活動(dòng)而將失去功能的細(xì)胞質(zhì)組分降解,并產(chǎn)生新的細(xì)胞質(zhì)組分,同時(shí)細(xì)胞內(nèi)酶的種類與活性發(fā)生改變,蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞代謝過程也發(fā)生改變，最后引起基因表達(dá)改變，細(xì)胞的性質(zhì)和狀態(tài)發(fā)生了轉(zhuǎn)變。白首烏所含的維生素A、B、C、E不但是其茲補(bǔ)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，同時(shí)能有效地預(yù)防癌癥。何首烏功效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)主要為磷脂、蒽醌類、葡萄糖苷類等成分。何首烏對容量和親和力兩個(gè)參數(shù)均無明顯影響。老年小鼠灌服何首烏水煎濃縮液，能明顯增強(qiáng)血中SOD活性?！?（4）保肝　　何首烏所含的二苯烯化合物對過氧化玉米油所致大鼠脂肪肝和肝功能損害，肝臟過氧化脂質(zhì)升高、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶升高等均有明顯對抗作用，并使血清游離脂肪酸及肝臟過氧化脂質(zhì)含量下降。　 （3）降血脂與抗動(dòng)脈粥樣硬化　　高脂血癥大鼠每日灌胃何首烏 4g/kg，連續(xù) 10