【正文】 osomes: improved methods to characterize their morphology,RNA content, and surface protein biomarkers. Analyst. 2015。15(6):218221.[4] Pan BT, Johnstone RM. Fate of the transferrin receptor during maturation of sheep reticulocytes in vitro: selective externalization of the receptor. Cell. 1983。作者聲明：文章第一作者對研究和撰寫的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔責任。此外，獲取細胞外囊泡的量少、純度低，也是目前研究及應用面臨的棘手問題。也有學者報道，一定條件下，用腫瘤抗原刺激樹突細胞后獲取的細胞外囊泡能誘導抗腫瘤免疫反應，而有望用于腫瘤治療，目前已有臨床一期實驗相關報道[1011]。但需注意的最新一項研究指出是外周血來源的MVs成分及其生物活性受儲存條件、存放時間以及抗凝管的選擇等影響[38]。總之，細胞外囊泡在生理狀態(tài)維持以及細胞遷移、血管新生、血栓形成、免疫炎癥反應、腫瘤浸潤和轉移等過程中發(fā)揮重要作用[29]。T細胞來源的外泌體可通過磷脂酰絲氨酸識別單核細胞膜表面的受體，誘導膽固醇堆積，進而促進動脈粥樣硬化形成[31]。Collino等[27]通過miRNA芯片對比骨髓MSC和肝臟MSC與兩者分泌的微粒發(fā)現(xiàn)一些miRNA同時存在于微粒和來源母細胞中，一些miRNA只存在于母細胞中，一些miRNA則只存在微粒中。蛋白質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)這些蛋白包括血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、血小板衍生生長因子、轉化生長因子β、MAPK通路信號分子、RHO通路信號分子、Tie2/TEK及細胞黏附分子等。前者是在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。微囊泡：分子直徑1001 000 nm，也有文獻稱之為脫落囊泡或Ectosomes。刺激條件主要包括細圖2 細胞外囊泡的分類圖注：細胞外囊泡據(jù)分泌方式不同分3類，一種是多泡小體脫離溶酶體途徑與母細胞胞膜特定部位融合釋放出外泌體；一種是通過出芽的形式釋放出膜微粒；還有一種就是釋放出凋亡小體[15]。持嚴謹科學態(tài)度，盡量查詢引用原始文獻資料，按照納入標準，最后選擇44篇作為引用文獻進行寫作(圖1)。但由于描述的術語不統(tǒng)一，相關研究結果存在混淆，為了方便眾多研究者學習，文章就細胞外囊泡定義分類、形成釋放過程及機制、分離鑒定方法、生物學意義及其在臨床疾病和生物醫(yī)學研究中應用等方面的最新進展作一綜述。Chargaff等[1]在1946年首次發(fā)現(xiàn)血漿中含有一種能加速血栓形成的可沉淀的物質(zhì)，他們稱之為因子。關鍵詞：組織構建；組織工程；細胞外囊泡；外泌體；組織再生；自噬；藥物載體；非編碼RNA；免疫炎癥；國家自然科學基金主題詞：組織工程；外泌體；再生；自噬；藥物載體基金資助：國家自然科學基金資助項目(81370242)Research progress of extracellular vesicles Wang Jin1, Chen Jianying2 (1Graduate School of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524001, Guangdong Province, China。目的：就細胞外囊泡定義分類、形成釋放過程、分離鑒定方法、生物學意義及其在臨床疾病和生物醫(yī)學研究中應用等方面的最新進展作一綜述。方法：由第一作者在PubMed、CNKI等數(shù)據(jù)庫中進行文獻檢索，關鍵詞為”Extracellular Vesicles，exosome，microvesicle，microparticle”及“細胞外囊泡、外泌體、微囊泡、膜微粒”。 2Third Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524001, Guangdong Province, China)王琎，女，1989年生，漢族，河南省人，碩士。Wolf等[2]在1967年報道活化血小板能釋放富含磷脂的細胞膜來源的微粒，并具有促凝血作用的，將其命名為血小板塵埃。1 資料和方法 Data and methods 資料來源 由第一作者應用計算機檢索CNKI 數(shù)據(jù)庫和PubMed數(shù)據(jù)庫相關文獻。對CNKI、PubMed數(shù)據(jù)庫中2006至2016年的文獻進行計算機檢索將共44篇文獻納入分析全體作者共同篩選圖1 文獻檢索流程2 結果 Results 細胞外囊泡定義分類 細胞外囊泡是由脂質(zhì)雙分子層包繞形成的球狀膜性囊泡，由細胞分泌產(chǎn)生，分子直徑在4 000 nm間，其中包括外泌體、膜微粒、微囊泡及凋亡小體等，外泌體定義較為明確[1213]。胞活化、氧化應激、細胞癌性轉化、放射損傷、細胞死亡和(或)凋亡等[16]，如骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)低氧或低營養(yǎng)誘導后會分泌釋放細胞外囊泡[17]。形成過程相對簡單，是直接通過出芽方式從母細胞膜表面脫落產(chǎn)生，大小不均一，高表達磷脂酰絲氨酸，沒有特定的表面分子標記物，但和外泌體一樣表達母細胞來源的表面標記物[22]。免疫磁珠分選技術則是利用抗原抗體特異性結合的原理，用包被抗標記物抗體的磁珠與細胞外囊泡孵育后結合，這樣就能將特定的細胞外囊泡分選出來。這些蛋白質(zhì)分子部分是酶類，酶催化具有高效性，能夠放大其效應，相比RNA，進入內(nèi)皮細胞的蛋白質(zhì)能夠即時迅速發(fā)揮作用，在維持血管新生以及維持血管功能及修復損傷組織等方面起主要作用。Chen等[19]的一項人臍帶間充質(zhì)干細胞來源的微囊泡成血管相關蛋白分析中關于細胞外囊泡中蛋白質(zhì)成分分析也有類似發(fā)現(xiàn)，目前這種現(xiàn)象發(fā)生的機制仍不明確有待進一步研究。類風濕性關節(jié)炎患者關節(jié)滑液來源的纖維母細胞分泌的細胞外囊泡攜帶的TNFα結合于T淋巴細胞后抵抗機體活化誘導的細胞死亡，從而加重關節(jié)炎癥狀[32]。 細胞外囊泡能作為標記物診斷疾病、評估預后 細胞外囊泡有望作為一種非侵入性標記物，在心血管疾病、腎臟疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷以及癌癥等的早期篩查等方面起重要作用。 細胞外囊泡能作為藥物或藥物載體發(fā)揮治療作用 近幾年來研究證實干細胞來源的細胞外囊泡有著類似于干細胞的生物學功能同時兼具其他眾多優(yōu)點，如體積小、易穿透生物膜、免疫原性低等，且其特殊的脂質(zhì)雙分子層膜性結構可保護其內(nèi)容物的降解，同時抵擋RNAse對核酸的破壞，保證其生物學活性?；诩毎饽遗荻M行的免疫療法越來越引人注意，有學者提出有望將其作為“疫苗”用于預防傳染性疾病，但目前還缺乏臨床實驗數(shù)據(jù)。在臨床應用之前，細胞外囊泡的生物分布和持續(xù)生物效應，安全應用領域范圍和有效劑量等也有待大量研究驗證。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)(包括計算機數(shù)據(jù)庫)記錄及樣本已按照有關規(guī)定保存、分享和銷毀，可接受核查。33:967978.[5] Johnstone RM, Adam M, Hammond JR, et al. Vesicle formation during reticulocyte maturation. Association of plasma membrane activities with released vesicles (exosomes). J Biol Chem. 1987。140(19):66316642.[13] Yin M, Loyer X, Boulanger CM. Extracellular vesicles as new pharmacological targets to treat atherosclerosis. Eur J Pharmacol. 2015。2:20360. [19] Chen JY, Liu ZJ, Hong MM, et al. Proangiogenic Compositions of Microvesicles Derived from Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells. PLoS One. 2014。5(7):e11803.[28] Mause SF, Weber C. Microparticles Protagonists of a Novel Communication Network for Intercellular Information Exchange. Circ Res. 2010。7(9):15281533.[35] Fleitas T, Mart237。31:543551.[42] Yim N, Ryu SW. Exosome engineering for efficient intracellular delivery of soluble proteins using optically reversible proteinprotein interaction module. Nat Commun. 2016。21(1):185191.[44] Ibr