【正文】 細(xì)胞菌絲體。將物鏡鏡頭轉(zhuǎn)開，取下玻片，用擦鏡紙拭去鏡頭上的油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。找到最適宜觀察的部位后，將此部位移至視野中心，準(zhǔn)備用油鏡觀察?！　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　∑?、實(shí)驗(yàn)報(bào)告、高倍鏡和油鏡下觀察到的細(xì)菌個(gè)體形態(tài)。這2塊棱鏡中的一塊固定，另一塊可以旋轉(zhuǎn)（或者2塊均可旋轉(zhuǎn)），并注有刻度。合軸望遠(yuǎn)鏡是用在相差顯微鏡上調(diào)節(jié)光軸的輔助設(shè)備，它不能用來觀察被檢標(biāo)本。6．顯微鏡放在干燥處，鏡箱內(nèi)要放硅膠吸收潮氣。因此，對(duì)顯微鏡要妥善保管。如果鏡頭已提出香柏油而尚未見到物像時(shí)，應(yīng)按上述過程重復(fù)操作。適當(dāng)調(diào)節(jié)亮度后，只需微微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦螺旋，就可看到更清晰的物像。在鏡檢全過程中，根據(jù)所需光線的強(qiáng)弱，還可通過擴(kuò)大或縮小光圈、升降聚光器加以調(diào)節(jié)。如只需某一波長的光線時(shí)，就要用濾光片。目鏡的放大倍數(shù)過大，反而影響觀察效果。2．光學(xué)系統(tǒng)物鏡（objective）物鏡安裝在鏡筒下端的轉(zhuǎn)換器上，因接近被觀察的物體，故又稱接物鏡。鏡筒有單筒和雙筒兩種，單筒又可分為直立式和后傾式兩種。第一部分 基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的基本構(gòu)造、使用和保養(yǎng)一、目的要求。而雙筒則都是傾斜式的，傾斜式鏡筒傾斜45176。其作用是將物體作第一次放大，是決定成像質(zhì)量和分辨能力的重要部件。聚光器（condenser）光源射出的光線通過聚光器匯聚成光錐照射標(biāo)本，增強(qiáng)明度和造成適宜的光錐角度，提高物鏡的分辨力。選用適當(dāng)?shù)臑V光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。（4）調(diào)焦　光線對(duì)好后，將玻片標(biāo)本放在鏡臺(tái)上，有蓋玻片的一面朝上，被檢物體對(duì)準(zhǔn)鏡臺(tái)孔正中，用標(biāo)本移動(dòng)器上的壓片夾卡緊，然后調(diào)焦。切記此時(shí)不能使用粗調(diào)焦螺旋，由于顯微鏡下觀察的被檢物有一定厚度，故在觀察過程中必須隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦螺旋，以了解被檢物不同光學(xué)平面的情況。使用完畢，將鏡頭從香柏油中脫離，取下玻片，用擦鏡紙擦去鏡頭和玻片上的香柏油，再用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭鏡頭上的油跡，然后用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上殘留的二甲苯。1．避免直接在陽光下曝曬，因?yàn)橥哥R與透鏡之間，透鏡與金屬之間都是用樹脂或亞麻油仁粘合起來的。目鏡、物鏡放在盒內(nèi)并存于干燥器中，以免受潮生霉。相差顯微鏡主要用于觀察未染色的活細(xì)胞，亦可用于觀察固定過的材料。另外，偏振光顯微鏡的鏡臺(tái)亦能旋轉(zhuǎn)。，應(yīng)將鏡筒徐徐上升還是下降？為什么？，為什么要在載玻片上滴加香柏油？，為什么要先用低倍物鏡觀察，而不是直接用高倍物鏡或油鏡觀察？實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌個(gè)體形態(tài)的觀察一、目的要求1．學(xué)習(xí)觀察細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)2．學(xué)會(huì)生物圖的繪制二、基本原理細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)是指細(xì)菌細(xì)胞的大小，形狀等特征，利用觀察個(gè)體形態(tài)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步識(shí)別和鑒定。（1）用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒提起約2㎝，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。切忌用手或其他紙擦鏡頭，以免損壞鏡頭。菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（或稱基內(nèi)菌絲）和生長在培養(yǎng)基表面的氣生菌絲。（4），接種在玻璃紙上，并用無菌玻璃棒涂勻后，置28℃培養(yǎng)，直至菌長好，備用。（2）用另一載玻片將其壓碎，棄去培養(yǎng)基，制成涂片，干燥、固定。（2）取清潔的蓋玻片一塊，在菌落上面輕輕按壓一下，然后將印有痕跡的一面朝下放在有一滴呂氏堿性美藍(lán)染液的載玻片上，將孢子等印浸在染液中，制成印片。？實(shí)驗(yàn)四　霉菌的個(gè)體形態(tài)觀察一、目的要求掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法，并觀察其形態(tài)特征。2．載玻片觀察法（1）將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi)，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個(gè)蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數(shù)套（根據(jù)需要而定）如此裝置的培養(yǎng)皿疊起，包扎好，㎏/㎝2，℃滅菌20分鐘，備用。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告。因此，用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。4．染色半小時(shí)后，再觀察一下死細(xì)胞數(shù)是否增加。3．高倍鏡觀察　用低倍鏡調(diào)準(zhǔn)焦距后，換高倍鏡，若有點(diǎn)模糊，用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)至清晰。內(nèi)外質(zhì)分界明顯，外質(zhì)透明，內(nèi)質(zhì)泡狀或顆粒狀。①自由游動(dòng)的纖毛蟲：游泳時(shí)常匍匐爬行在雜質(zhì)中，常見的有斜管蟲（Chilodonella）、漫游蟲（Litonotus）、前管蟲（Prorodon）、腎形蟲（Colpoda）、草履蟲（Paramecium）等。2．鞏固顯微鏡的使用方法。三、器材顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，雙層瓶，擦鏡紙，生理鹽水，玻璃鉛筆，吸水紙，試管架，火柴，小燒杯，酒精瓶等；　呂氏堿性染色液，石炭酸復(fù)紅染色液；金黃色葡萄球菌菌種，枯草芽孢桿菌菌種。5．水洗 染色時(shí)間到后，用自來水沖洗，直至沖下之水無色時(shí)為止。二、基本原理革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌分類和鑒定的重要性狀。脫色劑是將被染色的細(xì)胞進(jìn)行脫色，不同類型的細(xì)胞脫色反應(yīng)不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95%的酒精（ethanol）。（注意涂片不可過于濃厚）4．染色（1）初染 加草酸銨結(jié)晶紫一滴，約一分鐘，水洗。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時(shí)間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。由于此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計(jì)數(shù)法。2．鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若選用2516規(guī)格的計(jì)數(shù)板則每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中方格，可選4個(gè)角和中央的中格（即80個(gè)小格），若選用1625規(guī)格的計(jì)數(shù)板，則數(shù)四個(gè)角：左上、右上、左下、右下的四個(gè)中方格，（即100小格）中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。圖3 目鏡測(cè)微尺A．　目鏡測(cè)微尺；A． 旋開接目鏡透鏡，放入目鏡測(cè)微尺；B． 將接目鏡插回鏡筒目鏡測(cè)微尺（圖3，A）是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片，其中央刻有精確的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長線相隔。兩對(duì)重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)10兩對(duì)重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)目鏡測(cè)微尺每小格長度（μm）=2105=4μm 同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的長度。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制。蛋白胨很易吸潮，在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)，否則，將會(huì)影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。7．包扎加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。2．學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌的操作方法。表1 滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時(shí)，壓力與溫度的關(guān)系壓力數(shù)全部空氣排出時(shí)的溫度(℃)2/3空氣排出時(shí)的溫度(℃)1/2空氣排出時(shí)的溫度(℃)1/3空氣排出時(shí)的溫度(℃)空氣全不排出時(shí)的溫度(℃)千克(公斤/厘米2)(kg/㎝2)磅/ 英寸2(lb/in2)5101520253010010911512112613094105112118124128901001091151211267290100109115121㎏/㎝2，℃15—30分鐘可達(dá)到徹底滅菌的目的。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。如果壓力未降到0時(shí)，打開排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。三、器材培養(yǎng)基平板，無菌水，滅菌棉簽（裝在試管內(nèi)），接種環(huán)，試管架，酒精燈，酒精瓶，記號(hào)筆，廢物缸，牙簽等。（b）取棉簽 左手拿含有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞（或試管帽），將其取出，將管口很快地通過酒精燈的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出放回棉塞（或試管帽），并將空試管放在試管架上。注意：接種環(huán)與瓊脂表面的角度要小，移動(dòng)的壓力不能太大，否則會(huì)刺破瓊脂。（2）頭發(fā) 在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發(fā)用力搖動(dòng)數(shù)次，使細(xì)菌菌降落到瓊脂平板表面，然后蓋上皿蓋。但要注意，如果細(xì)菌數(shù)量太多，會(huì)使很多菌落生長在一起，或者限制了菌落生長而變得很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點(diǎn)時(shí)，要選擇分離得很開的單個(gè)菌落。 (g)邊緣 整齊、不整齊。四、菌落形態(tài)特征的觀察由于微生物個(gè)體表面結(jié)構(gòu)、分裂方式、運(yùn)動(dòng)能力、生理特性及產(chǎn)生色素的能力等各不相同，個(gè)體及它們的群體在固體培養(yǎng)基上生長狀況各不一樣，按照微生物在固體培養(yǎng)基上形成的菌落特征，可粗略辨別是何種類型的微生物，應(yīng)注意菌落的形狀、大小、表面結(jié)構(gòu)、邊緣結(jié)構(gòu)、菌叢高度、顏色、透明度、氣味、粘滯性、質(zhì)地軟硬情況、表面光滑與粗糙情況等。（2）將上述三種培養(yǎng)皿各取四個(gè)。實(shí)驗(yàn)十六 土壤中微生物的檢測(cè)技術(shù)一、目的要求1．掌握倒培養(yǎng)基平板的方法　　2．學(xué)習(xí)分離純化微生物的基本操作技術(shù)。用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液注入盛有9ml無菌水的試管中，吹吸三次，使充分混勻。劃線的方法很多，但無論哪種方法劃線，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使形成單個(gè)菌落。2．每一類群菌落總數(shù)是多少？3．在平板劃線（a）中，為什么每次都需將接種環(huán)上的剩余物燒掉?實(shí)驗(yàn)十七 水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定一、目的要求1．學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的方法。為了要正確反映水質(zhì)在采樣時(shí)的真實(shí)情況，水樣在采取后應(yīng)立即送檢，一般從取樣到檢驗(yàn)不應(yīng)超過4小時(shí)。(d)培養(yǎng)基凝固后，倒置于37℃溫箱中，培養(yǎng)24小時(shí)，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。(d)凝固后倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。多管發(fā)酵法包括初發(fā)酵試驗(yàn)、平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)三個(gè)部分。三、器材圖5 多管發(fā)酵法測(cè)定水中大腸菌群的操作步驟和結(jié)果解釋乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內(nèi)有倒置小套管），三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管（瓶）（內(nèi)有倒置小套管），伊紅美藍(lán)或復(fù)紅亞硫酸鈉瓊脂平板，滅菌水；載玻片，滅菌帶玻璃塞空瓶，滅菌吸管，滅菌試管，革蘭氏染液，顯微鏡，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，滅菌三角瓶等。在10支含有5ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，各加入10ml水樣。乳糖能起選擇作用，因?yàn)楹芏嗉?xì)菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣。（6）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30—300之間，則以最近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。若其中一個(gè)培養(yǎng)皿有較大片狀菌苔生長時(shí)，則不應(yīng)采用，而應(yīng)以無片狀菌苔生長的培養(yǎng)皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。（2）池水、河水或湖水等(a)稀釋水樣 取3個(gè)滅菌空試管，分別加入9ml滅菌水。（1）自來水 先將自來水龍頭用火焰燒灼3分鐘滅菌，再開放水龍頭使水流5分鐘后，用滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。二、基本原理本實(shí)驗(yàn)采用平板計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)。角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線。（3）涂布 將上述每種培養(yǎng)基的三個(gè)平板底面分別用記號(hào)筆寫上10105和106三種稀釋度，然后用三支1ml無菌吸管分別由10，用無菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻。為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)該微生物對(duì)營養(yǎng)、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑造成只利于此菌生長，而抑制其他菌生長的環(huán)境，從而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或平板劃線分離法等分離、純化微生物，直至得到純菌株。另四個(gè)培養(yǎng)皿，在實(shí)驗(yàn)室空氣中分別暴露5分鐘、10分鐘（一般不同時(shí)間各平行三皿）。3．各類微生物的數(shù)量是多少？實(shí)驗(yàn)十五 空氣中微生物的檢測(cè)技術(shù)一、目的要求1．學(xué)習(xí)空氣中微生物的檢測(cè)技術(shù)2．體會(huì)無菌操作的重要性二、基本原理被微生物污染的空氣是呼吸道傳染病的主要傳播途徑。樣品來源菌落數(shù)（近似值）菌落類型特征描寫大小形態(tài)干濕高度透明度顏色邊緣1.123452.123452．與其他同學(xué)所做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較?？上葘⒄麄€(gè)平板上的菌落粗略觀察一下，再?zèng)Q定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個(gè)大小范圍。（4）牙垢用滅菌牙簽取牙垢按種在瓊脂平板表面，然后蓋上皿蓋。接種環(huán)通過前面劃的線條再在瓊脂的另一半，從上向下來回劃線到1/2處。（d）取樣 將濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或門旋鈕上擦拭約2平方厘米的范圍。1．做記號(hào)任何一個(gè)實(shí)驗(yàn)，在動(dòng)手操作前均需首先將器皿用記號(hào)筆做上記號(hào)，培養(yǎng)皿的記號(hào)一般在皿底上。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．如何檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。㎏/㎝2（8磅/英寸2），℃滅菌15分鐘，但為了保證效果，℃，20分鐘滅菌，然后以無菌操作加入滅菌的糖溶液。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時(shí)容易解開，同樣用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去。2．溶化在裝有試劑和藥品的燒杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。3H2O，MgSO43．取出目鏡測(cè)微尺，將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺分別用擦鏡紙擦試后，放回盒內(nèi)保存