黑木耳多糖的分離純化及藥理作用生物技術(shù)及應(yīng)用(完整版)
【正文】 直至溶液不再繼續(xù)混濁為止,在5～10℃放置過夜, 離心除去沉淀即得無蛋白質(zhì)的多糖溶液。經(jīng)脫色處理后的黑木耳多糖呈淺黃色純化是將多糖混合物分離為單一的多糖的過程，純化的方法主要有以下幾種。黑木耳總多糖加水溶解，Ba(OH)2沉淀，沉淀物除盡Ba2+，再將沉淀物上DEAE纖維素(堿型)色譜柱，依次用水、得四種單一多糖。以壓力差為推動(dòng)力的膜分離過程包括微濾、超濾、納濾、反滲透，根據(jù)篩分原理使某些組分選擇性透過，實(shí)現(xiàn)提純和濃縮[19]。微濾[20]能有效去除比膜孔大的微粒和微生物，具有能耗低、無二次污染、分離效率高等特點(diǎn)，在多糖提取中可用于多糖液體的澄清和多糖精制。吳憲瑞[1]等人經(jīng)對(duì)昆明種小鼠實(shí)驗(yàn), 發(fā)現(xiàn)黑木耳多糖可使進(jìn)食高脂肪膽固醇飼料小鼠的TC (總膽固醇)、FVCC (游離膽固醇)、CnE (膽固醇脂)、TG (甘油三脂)、B—LP (B—脂蛋白) 含量明顯降低。[23]研究表明，黑木耳多糖有明顯延緩衰老作用，它可提高機(jī)體免疫功能，對(duì)機(jī)體損傷有保護(hù)作用，可延長平均壽命，被認(rèn)為是較理想的抗衰老保健品。多糖組小鼠的血紅蛋白、肝糖原水平顯著高于對(duì)照組。常用的提取方法大多采用不同溫度的水、稀堿溶液提取，這些方法不能很好的破除細(xì)胞壁，而導(dǎo)致多糖收得率較低。如果用Sevag法結(jié)合酶法,酶處理后再經(jīng)3次Sevag法處理,在氯仿和水的界面就未見沉淀,可見用Sevag結(jié)合酶法去蛋白效率可提高68%,且節(jié)省了大量的試劑和時(shí)間,從最后得到的產(chǎn)物中含糖量來看, 兩種處理后含糖都可達(dá)到90%以上。再次衷心感謝我的恩師對(duì)我的淳淳教誨和悉心關(guān)懷 感謝所有教授過我課程的農(nóng)校的老師們，是你們誨人不倦才有了現(xiàn)在的我。黑木耳多糖可能因含有酚類化合物,在空氣中提取或干燥時(shí)顏色加深,可用雙氧水脫色。多糖在酸性或堿性條件下提取，會(huì)引起糖苷鍵的斷裂，破壞多糖的立體結(jié)構(gòu)及活性。這表明黑木耳粗多糖能明顯提高小鼠耐缺氧時(shí)間和血紅蛋白水平，降低定量負(fù)荷后血乳酸及血尿氮水平，明顯地提高了運(yùn)動(dòng)能力。周慧萍等用一個(gè)月齡小鼠，雌雄各半，30d連續(xù)腹腔注射黑木耳多糖液l00mg/kg，小鼠心肌組織脂褐質(zhì)含量明顯下降，下降率為25%～30%。 能明顯降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖。另據(jù)報(bào)道，國外多采用LKB柱色譜系統(tǒng)，用比旋度、示差折射及紫外檢測(cè)多糖，各組分的峰位自動(dòng)記錄，分離效果高且方便。 超濾[20]（ultra filtration，UF）]的孔徑范圍為1nm～100nm，截留相對(duì)分子質(zhì)量為103~106。倒去石油醚,剩余物烘干溶劑后用80%乙醇300mL浸泡3h,于80℃加熱1h,過濾。如安絡(luò)小皮傘粗多糖的純化方式，將黑木耳粗多糖水溶液加斐林試劑，同時(shí)使溶液達(dá)到不同的乙醇濃度，可得多個(gè)多糖。以上三種方法均不適合于糖肽, 因糖肽也會(huì)象蛋白質(zhì)那樣沉淀出來。用純CO2提取糖及苷類化合物的產(chǎn)率低,這是因?yàn)檫@類化合物分子量較大、羥基多、極性大,如加入攜帶劑和加大壓力則可提高產(chǎn)率[13]。唐娟等[10]采用超聲波協(xié)同纖維素酶法提取黑木耳多糖,確定了此法的最佳工藝條件,發(fā)現(xiàn)由于作用溫度低,所得到的多糖顏色淺,因此有利于多糖產(chǎn)品的進(jìn)一步精致。 酶解提取法近年來,一些學(xué)者致力于酶法提取食藥用真菌多糖的研究,所謂酶法即采用酶與熱水浸提法相結(jié)合的方法, 酶多采用一定量的果膠酶、纖維素酶及中性蛋白酶,此法具有條件溫和、雜質(zhì)易除和得率高等優(yōu)點(diǎn)。目前從黑木耳子實(shí)體中提取黑木耳多糖的技術(shù)常用的主要有: 熱水浸提法、堿浸提法、酶法、超聲波法、微波法以及復(fù)合法。大量研究表明黑木耳作為“生物應(yīng)答效應(yīng)物”( Biological Response Modifier, 簡稱BRM) 具有多種生理功能,而這些重要的生理功能都是與其多糖組分密切相關(guān)的。綜述了黑木耳多糖的保健藥理作用。isolation and purification；Health pharmacology目 錄1引言..............................................................32黑木耳的營養(yǎng)價(jià)值..................................................33黑木耳多糖的提取、分離和純化......................................3 ...............................................3 ................................................3 ................................................3 ..................................................4 酶解提取法................................................4 ...............................................4 .............................................4 超臨界流體萃取............................................4 .............................................4 Sevag法..................................................5 .............................................5 .........................
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