一、植物病原真菌的分離培養(yǎng)及純化技術(shù)20xx(完整版)
【正文】 . ?稀釋別離法主要用于病組織上產(chǎn)生大量孢子的病原真菌的別離。 消毒時間因材料質(zhì)地、發(fā)病部位深淺及污染情況而異，一般 3～ 5分鐘。 引起果實和蔬菜腐爛病的真菌，如腐霉屬 (Pythium)和疫霉屬(Phytophthora) 的真菌，用這種方法別離的效果也很好。 19 例如： 果實的腐爛病，就應(yīng)該從剛開始腐爛的局部別離。 第十六頁，共六十五頁。 ? 因此，對有些病害病原物確實定，最好是經(jīng)過別離和培養(yǎng)工作，且在適當?shù)沫h(huán)境下進行接種試驗，確定它的致病性。 第十一頁，共六十五頁。 過濾太快 ， 濾液中將混入細菌而使除菌不完全 。 第七頁，共六十五頁。 6 植物組織和煎汁 許多植物材料如豆莢、莖稈、種子等，可以放在試管中，加少量水份以保持濕潤，滅菌后即能做培養(yǎng)基使用。 2 1〕材料： 馬鈴薯 200g、葡萄糖 20g、瓊脂 20g、水 1000ml 馬鈴薯葡萄糖瓊脂〔 PDA〕培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂： potato dextrose agar, 簡稱 PDA；馬鈴薯蔗糖瓊脂： potato sucrose agar, 簡稱 PSA。 5 自然 pH； 調(diào) pH值， 也可用 1mol/L的 NaOH或 HCl調(diào)至 pH為 ～，最后加水補足至 1000mL。 ?試管分裝時，使用玻璃漏斗。 第八頁，共六十五頁。 三角瓶中的培養(yǎng)基可趁熱倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，制作平板培養(yǎng)基。 第十三頁，共六十五頁。 16 清潔環(huán)境：別離工作嚴格說應(yīng)在無菌條件下進行，無菌室或無菌箱是別離不可缺少的設(shè)施。 最好在病 、 健交接處選材取樣 。 第十九頁，共六十五頁。 22 配方為： 升汞 1g， 濃鹽酸 ， 加水 至 1000mL。 比較平安的方法是不用藥劑消毒，而以滅菌水洗 9次。 組織別離法 第二十五頁，共六十五頁。 28 3〕向小碟中參加 %升汞或 10%次氯酸鈉溶液〔約半碟〕進行外表消毒，處理時間可自30秒至 3分鐘不等，然后倒掉廢液。 45天后檢查結(jié)果。 35 從根莖維管束組織別離病菌，可先將寄主病部外表用 70％酒精擦拭消毒，將表皮組織用滅菌的解剖刀削去，然后切取其中小塊變色的維管束組織，用升汞或漂白粉液消毒后，用滅菌水沖洗幾次，移置培養(yǎng)基面上。 第三十七頁，共六十五頁。 41 方法： 用無菌水從發(fā)病組織外表沖下孢子，配成孢子懸浮液， 用無菌移液管或滴管吸取一定體積的菌液至平板培養(yǎng)基上， 然后用無菌玻璃棒將菌液輕輕的均勻涂布在整個平板上，或?qū)⒕阂浦翢o菌培養(yǎng)皿中，然后傾入融化后冷卻至45℃ 的培養(yǎng)基， 輕輕振蕩、平置、凝固后倒置培養(yǎng)。 45 為了研究一些真菌在土壤中存活和分布的情形，從有病的土壤中別離它們是必要的。 51 別離真菌時經(jīng)常有細菌污染。按以下程序進行外表消毒 : 70%酒精漂洗 30s→% 升汞漂洗 1min →70% 酒精漂洗 30s→ 無菌水沖洗 4次，在無菌濾紙上吸干水分。 A、將菜園土裝于玻璃杯中〔約半杯〕 第五十四頁，共六十五頁。 第五十七頁，共六十五頁。此外，研究真菌的遺傳和變異、性征和同宗或異宗配合等現(xiàn)象，都要求菌種從單個孢子〔或小段頂端菌絲〕繁殖而來。 此方法操作比較麻煩，但是比前一種別離法可靠。 內(nèi)容總結(jié) 1。 。如有雜菌感染可采用 “直接接種〞法，待出現(xiàn)病癥后，用此法再行別離。 63 孢子懸浮液中孢子調(diào)節(jié)到適當?shù)臄?shù)量 ， 再涂勻在瓊脂平板外表上 。 61 這種方法實質(zhì)上是別離菌落，主要用于細菌和酵母菌等菌種的純化，但不能看到和確定一個菌落是從單個孢子繁殖而來，純化的可靠性較差。 第五十八頁，共六十五頁。 水生真菌的誘發(fā)技術(shù)與步驟： 4〕進一步純化，保存?zhèn)溆谩?1℃ 黑暗條件下培養(yǎng)，待組織塊邊緣有菌絲長出后，及時挑取菌絲尖端轉(zhuǎn)入 PDA平板上培養(yǎng)。 細菌污染的排除 第五十一頁，共六十五頁。 土壤帶菌別離法 第四十五頁，共六十五頁。 42 孢子別離法 產(chǎn)生大量孢子的病菌如青霉屬 (Penicillium)、交鏈孢
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1