【正文】 Copyright(C) 2022 光譜法 ?不同的生命大分子物質(zhì)與相應(yīng)波長的光會發(fā)生特定的作用，依據(jù)作用結(jié)果可推斷出被測物質(zhì)的含量和部分理化性質(zhì)，這類測定方法為光譜法。 動物組織 必須選擇 有效成份含量豐富 的臟器組織為原材料，先進(jìn)行絞碎、脫脂等處理后在適當(dāng)?shù)娜軇┲刑崛?，如果所要求的成分在?xì)胞內(nèi)，則要先破碎細(xì)胞。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 材料的選擇與處理 第一節(jié) 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 制備生物大分子，首先要選擇適當(dāng)?shù)纳锊牧稀? ?正是這些特點(diǎn)致使蛋白質(zhì)的分離純化和分析的難度極大。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 在自然科學(xué)，尤其是生命科學(xué)高度發(fā)展的今天，蛋白質(zhì)、酶和核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能的研究是探求生命奧秘的中心課題。生物大分子結(jié)構(gòu)與功能的研究， 必須首先解決生物大分子的制備問題 ，沒有能夠達(dá)到足夠純度的生物大分子的制備工作為前題，結(jié)構(gòu)與功能的研究就無從談起。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ① 在水和各種有機(jī)溶劑中的 溶解性 。材料的來源無非是動物、植物和微生物及其代謝產(chǎn)物。 二、材料的處理 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 冰凍 70℃ 保存?zhèn)溆幂^好 ?干燥 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 植物材料 必須清洗 ,去殼，脫脂，并注意植物 品種 和 生長發(fā)育狀況 不同，其中所含生物大分子的量變化很大，另外與季節(jié)性關(guān)系密切。 ?所需的樣品量少、操作簡單、反應(yīng)迅速、靈敏廣泛用于物質(zhì)的含量測定。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 例如：測定某一蛋白質(zhì)溶液的濃度 方法：蛋白質(zhì)與相關(guān)試劑（如 雙縮脲試劑 ）作用后產(chǎn)生特定顏色的物質(zhì)（ 紫色絡(luò)合物 ），紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，于波長 540nm處進(jìn)行比色測定。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ： 這是一種較劇烈的破碎細(xì)胞的方法，通?？上扔眉矣檬称芳庸C(jī)將組織打碎，然后再用 10000r/min～ 20220r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機(jī) (即高速分散器 )將組織的細(xì)胞打碎。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ： 利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶劑或 SDS（十二烷基硫酸鈉）等表面活性劑處理細(xì)胞，可將細(xì)胞膜溶解，從而使細(xì)胞破裂，此法也可以與研磨法聯(lián)合使用。過酸、過堿均應(yīng)盡量避免，一般控制在 pH=6～ 8范圍內(nèi)，提取溶劑的 pH應(yīng)在蛋白質(zhì)和酶的穩(wěn)定范圍內(nèi)，通常選擇偏離等電點(diǎn)的兩側(cè)。 相似相溶 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 3)水解酶： ?無論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞，都會使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少。在提取液中加入少量巰基乙醇或半胱氨酸以防止 巰基氧化 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 關(guān)鍵在于 膜的選擇 ， 不同類型和規(guī)格的膜 ，水的流速 ， 分子 量 截 止 值（ 即大體上能被膜保留分子最小分子量值 ）等參數(shù)均不同 ，必須根據(jù)工作需要來選用 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?生物大分子制備得到產(chǎn)品，為防止變質(zhì)，易于保存，常需要干燥處理，最常用的方法是冷凍真空干燥 ,適用于 不耐高溫，易于氧化物質(zhì)的干燥和保存 。 一、純化方案的設(shè)計(jì) 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ③ 以電荷差異為依據(jù)的方法： 電泳、電滲析、等電點(diǎn)沉淀、吸附層析和離子交換層析等。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 2)對所選方法的要求： ①要快速、粗放 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 樣品的保存： 生物大分子制成品的正確保存極為重要，一旦保存不當(dāng)，辛辛苦苦制成的樣品失活、變性、變質(zhì)，使前面的全部制備工作化為烏有，損失慘重，全功盡棄。 ⑹時(shí)間： 生化和分子生物學(xué)樣品不可能永久存活，不同的樣品有其不同的有效期，因此，保存的樣品必須 寫明日期，定期檢查和處理 。 一般需加入防腐劑和穩(wěn)定劑， 常用的防腐劑有甲苯、苯甲酸、氯仿等。 ⑵溫度： 每種生物大分子都有其穩(wěn)定的溫度范圍，溫度升高 10℃ ，氧化反應(yīng)約加快數(shù)倍，酶促反應(yīng)增加 1～ 3倍。 ③ 分辨力不必太高 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 切忌！ 重復(fù)使用同一種分離純化方法。操作時(shí)一般先將待干燥的液體冷凍到冰點(diǎn)以下使之變成固體，然后在低溫低壓下將溶劑變成氣體而除去。 ?透析只需要使用 專用的半透膜即可 完成。 ?沉淀法 （ 即溶解度法 ） 操作簡便 ， 成本低廉 ， 不僅用于實(shí)驗(yàn)室中 ， 也用于某些生產(chǎn)目的的制備過程 ， 是分離純化生物大分子 ， 特別是制備蛋白質(zhì)和酶時(shí)最常用的方法 。