生化技術(shù) 課件 第一章 生命大分子物質(zhì)的制備ppt課件(文件)
【正文】 命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ： 這是一種較劇烈的破碎細(xì)胞的方法，通?？上扔眉矣檬称芳庸C(jī)將組織打碎，然后再用 10000r/min～ 20220r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機(jī) (即高速分散器 )將組織的細(xì)胞打碎。在 108Pa～ 108Pa 的高壓下使細(xì)胞懸液通過一個(gè)小孔突然釋放至常壓，細(xì)胞將徹底破碎。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ： 利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶劑或 SDS（十二烷基硫酸鈉）等表面活性劑處理細(xì)胞，可將細(xì)胞膜溶解，從而使細(xì)胞破裂，此法也可以與研磨法聯(lián)合使用。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 提取時(shí)所選擇的條件應(yīng)有利于目的產(chǎn)物溶解度的增加和保持其生物活性。過酸、過堿均應(yīng)盡量避免，一般控制在 pH=6～ 8范圍內(nèi)，提取溶劑的 pH應(yīng)在蛋白質(zhì)和酶的穩(wěn)定范圍內(nèi)，通常選擇偏離等電點(diǎn)的兩側(cè)。有些蛋白質(zhì)和酶，在低離子強(qiáng)度的溶液中有較大的溶解度， ? 如在純水中加入少量中性鹽，蛋白質(zhì)的溶解度比在純水時(shí)大大增加，稱為 “ 鹽溶 ” 現(xiàn)象。 相似相溶 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 3)水解酶： ?無論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞，都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少。 ?溫度升高，溶解度加大 。在提取液中加入少量巰基乙醇或半胱氨酸以防止 巰基氧化 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?通過吸咐劑直接收除去溶液中溶液分子使之濃縮所用的吸咐劑必需與溶液不起化學(xué)反應(yīng) ， 對(duì)生物大分子不吸附 ， 易與溶液分開 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 關(guān)鍵在于 膜的選擇 ， 不同類型和規(guī)格的膜 ，水的流速 ， 分子 量 截 止 值（ 即大體上能被膜保留分子最小分子量值 ）等參數(shù)均不同 ，必須根據(jù)工作需要來選用 。截留分子量通常為 1萬左右。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?生物大分子制備得到產(chǎn)品，為防止變質(zhì)，易于保存，常需要干燥處理，最常用的方法是冷凍真空干燥 ,適用于 不耐高溫，易于氧化物質(zhì)的干燥和保存 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 第六節(jié) 純化方案的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià) 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 由于生物體的組成成分是如此復(fù)雜，數(shù)千種乃至上萬種生物分子又處于同一體系中，因此 不可能有一個(gè)適合于各類分子的固定的分離程序， 但多數(shù)分離工作關(guān)鍵部分的基本手段是相同的。 一、純化方案的設(shè)計(jì) 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ③ 以電荷差異為依據(jù)的方法： 電泳、電滲析、等電點(diǎn)沉淀、吸附層析和離子交換層析等。 : 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ⑴ 早期分離純化 1)特點(diǎn)： ①粗提取液中物質(zhì)成份十分復(fù)雜 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 2)對(duì)所選方法的要求： ①要快速、粗放 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 3)可選用的方法： ① 吸附； ② 萃取； ③ 沉淀法（熱變性、鹽析、有機(jī)溶劑沉淀等）； ④ 離子交換（批量吸附、胖柱交換）、親和層析。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 樣品的保存： 生物大分子制成品的正確保存極為重要，一旦保存不當(dāng)，辛辛苦苦制成的樣品失活、變性、變質(zhì)，使前面的全部制備工作化為烏有，損失慘重，全功盡棄。加速氧化、聚合、離解和霉變。 ⑹時(shí)間： 生化和分子生物學(xué)樣品不可能永久存活，不同的樣品有其不同的有效期，因此，保存的樣品必須 寫明日期，定期檢查和處理 。 核酸大分子一般保存在氯化鈉或檸檬酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中 。 一般需加入防腐劑和穩(wěn)定劑， 常用的防腐劑有甲苯、苯甲酸、氯仿等。因此樣品通常都要避光保存。 ⑵溫度： 每種生物大分子都有其穩(wěn)定的溫度范圍，溫度升高 10℃ ，氧化反應(yīng)約加快數(shù)倍，酶促反應(yīng)增加 1～ 3倍。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 可選用的方法： 吸附層析、鹽析、凝膠過濾、 離子交換層析、親和層析、 等電聚焦制備電泳、制備 HPLC等。 ③ 分辨力不必太高 。 ③ 物理化學(xué)性質(zhì)相近的物質(zhì)很多 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 切忌！ 重復(fù)使用同一種分離純化方法。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 制備生物大分子的方法分類如下： ① 以分子大小和形態(tài)的差異為依據(jù)的方法： 差速離心、區(qū)帶離心、超濾、透析和凝膠過濾等。操作時(shí)一般先將待干燥的液體冷凍到冰點(diǎn)以下使之變成固體，然后在低溫低壓下將溶劑變成氣體而除去。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?減壓加溫蒸發(fā)濃縮 :通過降低液面壓力使液體沸點(diǎn)降低，減壓的真空度愈高，液體沸點(diǎn)降得愈低，蒸發(fā)愈快，此法適用于一些 不耐熱 的生物大分子的濃縮。 ?透析只需要使用
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