【正文】 述實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備情況，包括準(zhǔn)備的方法、過(guò)程和分析的資料 實(shí)驗(yàn)中的一些實(shí)際情況：人員需求、實(shí)驗(yàn)負(fù)責(zé)人姓名、所需經(jīng)費(fèi) 實(shí)驗(yàn)方法的選定 ? 實(shí)驗(yàn)方法按學(xué)科可分為生理學(xué)方法、生物化學(xué)方法、生物物理方法、免疫學(xué)方法等； ? 按性質(zhì)可分為形態(tài)學(xué)方法、機(jī)能學(xué)方法 ? 按范圍可分為整體綜合方法和局部分析方法 ? 按水平分： 整體水平、器官水平、細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平、分子水平和量子水平等。 可行性：是指選題應(yīng)切合研究者的學(xué)術(shù)水平、技術(shù)水平和實(shí)驗(yàn)條件，還要結(jié)合研究者的工作基礎(chǔ)，使實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌麑?shí)施。 二、提出假說(shuō) 假說(shuō)提出的一般過(guò)程 ： 觀察和記錄所有相關(guān)的信息（包括研究者已開(kāi)展的初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果） 分析和歸類這些信息 在這些信息的基礎(chǔ)上提出假說(shuō) ? 假說(shuō)是預(yù)先假定的答案或解釋，亦既是實(shí)驗(yàn)的預(yù)期結(jié)果。 無(wú)論選用何種實(shí)驗(yàn)方法，均應(yīng)保證以下幾點(diǎn) : ? 可靠性：即切實(shí)可行，穩(wěn)定可靠，是大家公認(rèn)的方法，也即是經(jīng)典方法。同時(shí)注意某些學(xué)科不太常用的儀器設(shè)備是否存在，是否會(huì)影響實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測(cè)； b、 測(cè)定動(dòng)物生理、生化、生物電和器官功能指標(biāo)的各種分析儀器和描記儀，如半導(dǎo)體測(cè)溫計(jì)、動(dòng)物血壓表、多導(dǎo)生理記錄儀等設(shè)備。應(yīng) 隔離檢疫 并提供 3周左右的動(dòng)物適應(yīng)期。 詳細(xì)的草案還應(yīng)該包括實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)技術(shù)等幾個(gè)方面的問(wèn)題。 材料和方法： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：通過(guò)圖形、表格和文字等將實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示出來(lái)，文字要簡(jiǎn)介扼要。 是否有充分的理由解釋使用動(dòng)物進(jìn)行研究的必要性。盡管 GLP最初目標(biāo)是為了保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在藥物毒性研究中的準(zhǔn)確性，將 GLP規(guī)則推廣到其它涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究領(lǐng)域中，有利于這些研究項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)化，增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。 AAALAC認(rèn)證在世界范圍內(nèi)享有很高的聲譽(yù)，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物領(lǐng)域樹(shù)立了高標(biāo)準(zhǔn)的楷模。 必須留出必要的檢疫期。 ? 要保證有一個(gè)和諧的研究團(tuán)體，強(qiáng)調(diào)各個(gè)環(huán)節(jié)的協(xié)作性。一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中所需實(shí)驗(yàn)材料的總數(shù)稱為樣本含量。例：病毒培養(yǎng)方法改進(jìn)實(shí)驗(yàn) ? 要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定處理因素和非處理因素，一旦確定就不能隨意改動(dòng)。不選用重現(xiàn)性小的指標(biāo)。要將樣本的結(jié)論外推到總體，必須盡量使樣本能夠真實(shí)地代表總體。 (3) 專設(shè)：任何一個(gè)對(duì)照組都是為相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)組專門(mén)設(shè)立的 。 實(shí)驗(yàn)條件對(duì)照 ? 對(duì)照組不施加處理因素，但施加某種與處理因素相同的實(shí)驗(yàn)條件。 ? 抽樣隨機(jī) 每一個(gè)符合條件的實(shí)驗(yàn)對(duì)象參加實(shí)驗(yàn)的機(jī)會(huì)相同，即總體中每個(gè)個(gè)體有相同的機(jī)會(huì)被抽到樣本中來(lái)；保證樣本的 代表性 。 分 兩組 可按隨機(jī)數(shù)的奇偶；分 k組 可按隨機(jī)數(shù)除以 k后的余數(shù)進(jìn)行分組 。重復(fù)程度表現(xiàn)為樣本含量的大小和重復(fù)次數(shù)的多少。 如動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)，不同動(dòng)物在血管的結(jié)構(gòu)、病變、 α和 β脂蛋白的比例以及膽固醇的水平各有不同，這樣不僅可以比較一些不同動(dòng)物病理變化，也可以根據(jù)這些不同的變化尋找生化指標(biāo)與病變形成的關(guān)系，把實(shí)際工作推進(jìn)一步。 彈性原則： 即所謂空缺原則，指的是在時(shí)間分配上留有空缺。 此法的 優(yōu)點(diǎn) 是能清除個(gè)體間生物差異，但 不適用于 在同一個(gè)體上多次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和觀察。 當(dāng)配對(duì)條件未能嚴(yán)格控制造成配對(duì)失敗或配對(duì)欠佳時(shí)，反而會(huì)降低效率。小樣本時(shí)，可能均衡性較差，抽樣誤差較大。 ?優(yōu)點(diǎn)： 每個(gè)區(qū)組內(nèi)的 k個(gè)受試對(duì)象有較好的同質(zhì)性，因此組間均衡性也較好；比完全隨機(jī)設(shè)計(jì)減少了誤差，因而更容易察覺(jué)處理組間的差別，提高了實(shí)驗(yàn)效率。由于每種處理的重復(fù)數(shù)較少，對(duì)差別的估計(jì)可能不夠精確。 五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理與分析 （一）參數(shù)估計(jì)：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)描述 算術(shù)平均數(shù)：表示一組觀察值（或變量）的集中趨勢(shì)、中心位置或平均水平的指標(biāo)。 計(jì)數(shù)資料 的分析方法； 計(jì)數(shù)資料的顯著性檢驗(yàn)大部分采用 χ2檢驗(yàn)。為保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中使用最適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，選擇動(dòng)物應(yīng)遵循以下原則： 相似性原則 ： 是指利用動(dòng)物與人類某些機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病特點(diǎn)的相似性選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。 ? 生理特性： 兩棲類和爬行類是變溫動(dòng)物，因此不適合做提問(wèn)調(diào)節(jié)研究； 獼猴 的生殖生理和人非常接近，月經(jīng)周期和人一樣約 28天左右，是研究人類避孕藥的理想動(dòng)物 。 猴對(duì)痢疾桿菌敏感 ，是研究痢疾的最好模型。 ? 一般動(dòng)物可自身合成維生素 C， 豚鼠 則不能合成，因而可用來(lái)做 Vc缺乏試驗(yàn)。如 C57BL小鼠對(duì)腎上腺皮質(zhì)激素的敏感性比 DBA及 BALB/C小鼠高12倍。 ? F1代生活力強(qiáng)，帶有兩個(gè)親本品系的特性，個(gè)體間的遺傳型和表型一致，是理想的品系，但價(jià)格較貴。既要避免高精尖的儀器、試劑、技術(shù)方法等與低規(guī)格、非標(biāo)準(zhǔn)化、反應(yīng)性能低的動(dòng)物相配，又要防止低性能測(cè)試手段、非標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)設(shè)施等與高級(jí)別、高反應(yīng)性能的動(dòng)物相配，造成不必要的資源的浪費(fèi)。 ? 應(yīng)注意的是，動(dòng)物體重除與年齡密切相關(guān)外 ,與動(dòng)物品種、品系、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、飼養(yǎng)管理等因素有關(guān)，不宜籠統(tǒng)對(duì)待。如在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)動(dòng)物懷孕，則體重及某些生理生化指標(biāo)均可受到嚴(yán)重影響 ,有時(shí)應(yīng)將懷孕動(dòng)物剔除。 進(jìn)化程度高或結(jié)構(gòu)功能復(fù)雜的動(dòng)物模型有時(shí)會(huì)給實(shí)驗(yàn)條件的控制和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的獲得帶來(lái)難以預(yù)料的困難。 相對(duì)替代：用體外培養(yǎng)的脊椎動(dòng)物細(xì)胞、組織或器官進(jìn)行研究，用有生命的物體代替活體動(dòng)物研究。毒性測(cè)定時(shí)從 Draige氏方法到 LD50實(shí)驗(yàn)方法的進(jìn)步就是利用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量的經(jīng)典例子。 三、優(yōu)化：指通過(guò)改善動(dòng)物設(shè)施、飼養(yǎng)管理和實(shí)驗(yàn)條件，精細(xì)地選擇實(shí)驗(yàn)路線和手段，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，盡量減少實(shí)驗(yàn)過(guò)程對(duì)動(dòng)物機(jī)體的損傷、減輕動(dòng)物遭受的痛苦和應(yīng)激反應(yīng)。 二、減少：如果某一研究必須使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，沒(méi)有可靠的替代選擇方法，則應(yīng)考慮把使用動(dòng)物的數(shù)量降低到實(shí)現(xiàn)科研目的所必需的最小量。 選擇來(lái)源容易、價(jià)格便宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。例：雞換羽，兔換毛，動(dòng)物的免疫功能低下。 3）性別 性別不同對(duì)實(shí)驗(yàn)的敏感程度可不同。 規(guī)格化原則 ： 是指選擇與實(shí)驗(yàn)要求一致的動(dòng)物規(guī)格。 ? 清潔級(jí)動(dòng)物：較為常用，適用于大多數(shù)科研工作，但趨勢(shì)是取消。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)充分了解動(dòng)物特性，選擇敏感性強(qiáng)、對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果干擾小 的動(dòng)物品系。大鼠肝臟的枯否氏細(xì)胞 90%有吞噬能力，肝臟再生能力很強(qiáng)，切除 60～ 70%的肝葉，仍有再生力，適于肝外科實(shí)驗(yàn)研究。 特殊性原則 ： 是指利用不同種系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)體存在的特殊構(gòu)造或某些特殊反應(yīng)選擇解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵蟮膭?dòng)物。例如尿液的滲透壓和酸堿度。在可能的情況下，應(yīng)盡量選擇在 結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝及疾病特征方面與人類相近的動(dòng)物做實(shí)驗(yàn)。 ? 適合性檢驗(yàn)：檢驗(yàn)?zāi)承誀钣^察次數(shù)與該性狀的理論比率是否符合。 率：表示一定條件下某種現(xiàn)象實(shí)際發(fā)生數(shù)與可能發(fā)生數(shù)的比。其特點(diǎn)是利用一套規(guī)格化的表格 —— 正交表來(lái)安排實(shí)驗(yàn)，適用于多因素、多水平、實(shí)驗(yàn)誤差大、周期長(zhǎng)等一類實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)。若一個(gè)區(qū)組的某個(gè)動(dòng)物發(fā)生意外，那么整個(gè)區(qū)組都得放棄，或不得已采取缺項(xiàng)估計(jì)。 ? 例： 為比較小鼠接種 3種不同菌型傷寒桿菌 (9D、 11C、 DSC1)后存活日數(shù)的差異，選擇同品系、性別 (雌、雄各半 )、體重 (土 1s)、月齡 (土2天 )、生理精神狀態(tài)、飼養(yǎng)條件等小鼠 30只，依隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為3組，在相同條件下接種菌苗，后觀察存活日數(shù)如下表。 ? 大鼠對(duì)別 正常飼料組 VitE缺乏組 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 完全隨機(jī)設(shè)計(jì)； 亦稱 單因素設(shè)計(jì)， 是將每個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象隨機(jī)分配在各組，并從各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較中得出結(jié)論。 配對(duì)比較設(shè)計(jì)： 指實(shí)驗(yàn)前將動(dòng)物按性別、體重或其它有關(guān)因素加以配對(duì)，以基本相同的兩個(gè)動(dòng)物為一對(duì)，配成若干對(duì)，然后將一對(duì)動(dòng)物隨機(jī)分配于兩組中。 最經(jīng)濟(jì)原則： 不論什么實(shí)驗(yàn)，都有它的最優(yōu)選擇方案，這包括在資金的使用上，也包括人力時(shí)間的損耗上，必要時(shí)可以預(yù)測(cè)一下自己實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)出和投入的比值，這個(gè)比值越大越好，當(dāng)然是以你所擁有的實(shí)驗(yàn)條件為基礎(chǔ)。尤其是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果要外推到人的實(shí)驗(yàn)，所選用的動(dòng)物品種應(yīng)不少于 3種，而且其中之一不應(yīng)是嚙齒類動(dòng)物。例如，血壓一般都測(cè) 3次，以 3次的均數(shù)作為最終結(jié)果。 ? 配對(duì)隨機(jī)化 (paired randomization)和區(qū)組隨機(jī)化 (block randomization)可看成是分層隨機(jī)化的實(shí)際應(yīng)用。 ? 實(shí)驗(yàn)順序隨機(jī) 每個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象接受處理先后的機(jī)會(huì)相同；使實(shí)驗(yàn)順序的影響也達(dá)到 均衡 。凡對(duì)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)產(chǎn)生影響的實(shí)驗(yàn)條件宜采用此法。 對(duì)照的種類： 組間對(duì)照 ?空白對(duì)照 ?安慰劑對(duì)照 ?實(shí)驗(yàn)條件對(duì)照 ?標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照 自身對(duì)照 空白對(duì)照 ? 對(duì)照組不施加任何處理因素。為避免或縮小誤差，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)必須注意誤差控制。該測(cè)出的變化測(cè)不出，就會(huì)得出 “ 假陰性結(jié)果 ” ，儀器不精密，所得陽(yáng)性數(shù)值則不真實(shí)。 3） 實(shí)驗(yàn)效應(yīng) 。所有影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的條件都稱為影響因素，實(shí)驗(yàn)研究的目的不同，對(duì)實(shí)驗(yàn)的要求也不同。 嚴(yán)格控制各類人獸共患病的發(fā)生，尤其是使用野生動(dòng)物（如靈長(zhǎng)類動(dòng)物）時(shí)，由于高等級(jí)動(dòng)物和人類的親緣性更近，其疾病的易感性更強(qiáng)，要特別注意安全保護(hù)。 必須留出足夠的時(shí)間來(lái)學(xué)習(xí)和掌握新的技術(shù)。中國(guó)有 12個(gè)機(jī)構(gòu)通過(guò)了 AAALAC認(rèn)證， 廣東地區(qū)廣州醫(yī)工院通過(guò) Beagle犬認(rèn)證 ） 廣西食蟹猴 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研發(fā)基地 廣西 ：南寧國(guó)家高新區(qū)投資建成了“ 廣西南寧國(guó)際靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型與醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化示范基地 ”，是國(guó)內(nèi)第一家通過(guò)國(guó)際資質(zhì)認(rèn)證的靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室 四、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)集中化 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)室：進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)、采購(gòu)、飼養(yǎng)、檢疫。 藥物安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)包括 ：?jiǎn)未谓o藥毒性試驗(yàn)、反復(fù)給藥毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)、致癌試驗(yàn)、局部毒性試驗(yàn)、免疫原性試驗(yàn)、安全性藥理試驗(yàn)、依賴性試驗(yàn)、毒代動(dòng)學(xué)試驗(yàn)等。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的來(lái)源是否合法，是否符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的各種標(biāo)準(zhǔn)化控制條件。 致謝 參考文獻(xiàn) 第二部分：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)組織和管理 概 論 使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行生物醫(yī)學(xué)研究計(jì)劃不是一個(gè)人能夠?qū)嵤┑?，是一個(gè)涉及很多人、復(fù)雜的研究過(guò)程。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)收集所有的實(shí)驗(yàn)資料，進(jìn)行各種后續(xù)指標(biāo)的檢測(cè)，包括運(yùn)用數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)的方法分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 6. 術(shù)前準(zhǔn)備：術(shù)前 3天單籠飼養(yǎng)，術(shù)前 8－ 24小時(shí)禁食、禁水。 ? 器械 準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所消毒與器具配套等也要落實(shí)，特殊器械是否準(zhǔn)備：如顯微外科或眼科手術(shù)器械。 ? 創(chuàng)造性：即實(shí)驗(yàn)方法的創(chuàng)新和改良。假說(shuō)是實(shí)驗(yàn)研究設(shè)計(jì)的前提，如果沒(méi)有假說(shuō)，實(shí)驗(yàn)和觀察就失去目標(biāo)。 目的性：指選題應(yīng)具有明確的理論意義和實(shí)踐意義，要能解決具體問(wèn)題。這樣才有可能使正確的假說(shuō)上升為結(jié)論、原理和學(xué)說(shuō)。 實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備 要求是盡可能使實(shí)驗(yàn)手段和實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化。 3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間長(zhǎng)短的需要，同時(shí)購(gòu)入或領(lǐng)取相應(yīng)數(shù)量的 飼料和墊料 。預(yù)實(shí)驗(yàn)可用少量動(dòng)物進(jìn)行， 實(shí)驗(yàn)方法和觀測(cè)指標(biāo)應(yīng)該和正式實(shí)驗(yàn)一樣 ，但預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不能歸入正式實(shí)驗(yàn)的最后結(jié)果中一同分析。 摘要：簡(jiǎn)要介紹實(shí)驗(yàn)研究的目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)論。 一、關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的法律、法規(guī)和相關(guān)要求 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案是否符合國(guó)家法律？在很多國(guó)家，不是所有關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方案都可以實(shí)施。 是否有完整的實(shí)驗(yàn)記錄。 1. 動(dòng)物分組與識(shí)別的 SOP、 2. 飼養(yǎng)管理 SOP、 3. 觀察記錄及實(shí)驗(yàn)操作的 SOP、 4. 動(dòng)物尸檢以及組織病理學(xué)檢查處理的 SOP、 5. 動(dòng)物尸體及其