熒光定量pcr在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用(完整版)
【正文】 的 1% ? HCV病毒顆粒很難有效地分離純化、人工合成抗原 ? 丙型肝炎的窗口期很長(zhǎng)，血清學(xué)檢測(cè)無(wú)法早期診斷 ? 抗體持續(xù)性存在，無(wú)法提示正確的病毒載量 ? HCV的型別復(fù)雜，高突變率 ? HCV核心抗原檢測(cè)試劑盒敏感性差： % HCV RNA HCV RNA陽(yáng)性是病毒感染和復(fù)制的直接標(biāo)志。 拉米夫定治療人群 ? 有明顯 HBV DNA復(fù)制者 ? 前 C區(qū)變異的慢性乙型肝炎 ? 代償期的慢性乙型肝炎 ? 接受肝臟移植的患者 ? 干擾素治療失敗 拉米夫定治療效果 ? 絕大多數(shù)患者 HBV DNA水平顯著下降。 ? PCR所用引物相應(yīng)的 DNA序列發(fā)生突變，此引物與突變 DNA不能配對(duì)結(jié)合。 HBeAg與抗 HBe共存？ ?處于血清轉(zhuǎn)換過(guò)程中 ?野生株與變異株同時(shí)存在 HBeAg水平與 HBV DNA的關(guān)系 ? HBeAg陽(yáng)性標(biāo)本 HBV DNA檢出率 90％左右 ? HBeAg與 HBV DNA有著良好的相關(guān)性 HBeAg陰性 /抗 HBe陽(yáng)性 /HBV DNA陽(yáng)性 HBV DNA水平一般較低 ? HBV低水平復(fù)制 ? HBV病毒前 C區(qū)基因變異 ? 重疊 HCV感染 “兩對(duì)半”缺陷 ? “兩對(duì)半”是 機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài)，為間接指標(biāo)。 ? 抗 HBs為保護(hù)性抗體，陽(yáng)性表示對(duì) HBV有免疫力。熒光定量 PCR在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 內(nèi)容提要 一、基因診斷技術(shù)簡(jiǎn)介 二、乙型肝炎的病原檢測(cè) 三、丙型肝炎的病原檢測(cè) 四、性病相關(guān)病原體的檢測(cè) 基因診斷技術(shù)簡(jiǎn)介 4 基因診斷 3 免疫學(xué)診斷 臨床診斷 細(xì)胞膜 細(xì)胞核 DNA 轉(zhuǎn)錄 mRNA 翻譯 蛋白質(zhì) 1 形態(tài)學(xué)診斷 2 生化診斷 概念 PCR與基因診斷技術(shù) ? 基因診斷即通過(guò)核酸的分子生物學(xué)檢測(cè)直接檢測(cè)基因的存在狀態(tài)或缺陷對(duì)疾病作出診斷的方法。 HBsAg和抗 HBs同時(shí)陰性： 即所謂窗口期，此時(shí) HBsAg和抗 HBs都未產(chǎn)生。 ? “攜帶者”、“大三陽(yáng)”、“小三陽(yáng)”等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度。 ? 病毒 DNA整合于宿主肝細(xì)胞染色體而血中游離 HBV DNA很少或缺乏。 ? 用藥 4周開(kāi)始下降， 12至 16周約半數(shù)以上的病例血清 HBV DNA降到可檢測(cè)水平以下。HCV RNA的定量測(cè)定有助于了解病毒復(fù)制程度、抗病毒治療的選擇及療效評(píng)估等。浙江省為高發(fā)區(qū)，位居全國(guó)第三。 ? 血清學(xué)檢查，僅 10%UU尿道炎患者在病程中特異性抗體滴度升高 4倍，使其方法學(xué)應(yīng)用受限。 ? 彌補(bǔ) ELISA方法的高漏檢率 ,HCV RNA可作為 HCV感染診斷的指標(biāo)。 ? 病毒學(xué)應(yīng)答： HBV DNA低于檢測(cè)下限 ? 血清學(xué)應(yīng)答 ? 生化學(xué)應(yīng)答 ? 組織學(xué)應(yīng)答 應(yīng)用抗病毒藥物后如何判斷療效？ 應(yīng)用抗病毒藥物后如何判斷療效？ ?治療結(jié)束時(shí) 完全應(yīng)答 ?隨訪(fǎng) 1年 持續(xù)應(yīng)答 ?無(wú)應(yīng)答 YMDD變異 ? YMDD：酪氨酸－蛋氨酸－天門(mén)冬氨酸－天 門(mén)冬氨酸
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